田明　常偉平　盛旭東

摘要：目的? 探討UbcH10在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法? 收集2018年2月～10月在本院就診并行手術(shù)切除的肝癌患者腫瘤組織標(biāo)本30例，并以相應(yīng)癌旁正常組織（距離腫瘤組織>5 cm）為參照。采用免疫組化分析肝癌組織和癌旁正常肝組織中的UbcH10蛋白的表達(dá)量以及肝癌UbcH10蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果? 有93.33%的肝癌組織中顯示UbcH10表達(dá)，僅有6.67%的癌旁正常肝組織顯示UbcH10表達(dá)，肝癌組織中UbcH10表達(dá)高于癌旁正常肝組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其中高分化肝癌組織UbcH10表達(dá)低于低分化肝癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同年齡、性別患者中UbcH10表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;不同腫瘤大小、組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移患者中UbcH10表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? UbcH10在肝癌患者肝組織中過度表達(dá)，并與腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。UbcH10可作為肝癌患者腫瘤治療的預(yù)后標(biāo)志物和潛在分子靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：UbcH10;肝癌組織;癌旁正常肝組織

中圖分類號(hào)：R735.7? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.14.023

文章編號(hào)：1006-1959（2019）14-0072-03

Abstract：Objective? To investigate the expression and clinical significance of UbcH10 in hepatocellular carcinoma.Methods? 30 cases of tumor tissue specimens from patients with liver cancer who underwent surgical resection in our hospital from February to October 2018 were collected and referenced to the corresponding adjacent normal tissues （>5 cm from tumor tissue）. The expression of UbcH10 protein in liver cancer tissues and adjacent normal liver tissues and the relationship between UbcH10 protein expression and clinicopathological features were analyzed by immunohistochemistry.Results? U3cH10 expression was observed in 93.33% of liver cancer tissues， and only 6.67% of adjacent normal liver tissues showed UbcH10 expression. The expression of UbcH10 in liver cancer tissues was higher than that in adjacent normal liver tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression of UbcH10 in highly differentiated liver cancer tissues was lower than that in poorly differentiated liver cancer tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in the expression of UbcH10 between patients of different ages and genders （P>0.05）. The expression of UbcH10 in patients with different tumor size， histological differentiation and lymph node metastasis was statistically significant （P<0.05）.Conclusion? UbcH10 is overexpressed in liver tissues of patients with liver cancer and is associated with tumor size， differentiation and lymph node metastasis. UbcH10 can be used as a prognostic marker and a potential molecular target for tumor therapy in patients with liver cancer.

Key words：UbcH10;Liver cancer tissue;Adjacent normal liver tissue

原發(fā)性肝細(xì)胞癌（primary hepatocellular carcinoma），簡(jiǎn)稱肝癌，是高發(fā)病率高死亡率的惡性腫瘤，手術(shù)切除是其最主要的根治性治療，但術(shù)后5年生存率僅約50%，5年復(fù)發(fā)率可達(dá)60%～70%[1]。泛素結(jié)合酶UbcH10是第10個(gè)被識(shí)別的人泛素結(jié)合酶，屬于泛素結(jié)合酶E2家族的成員，是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白，其可參與蛋白質(zhì)的特異性降解，通過與細(xì)胞后期促進(jìn)復(fù)合物相互作用影響有絲分裂紡錘體裝配檢測(cè)點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)有絲分裂后期轉(zhuǎn)換[2]。有研究報(bào)道[3]，泛素結(jié)合酶UbcH10與腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展密切相關(guān)。因此，尋找更準(zhǔn)確的早期診斷工具和新的治療靶點(diǎn)尤為重要，也是降低肝癌患者死亡率的重要舉措。本研究主要探討UbcH10表達(dá)在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 收集2018年2月～10月在西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院就診并行手術(shù)切除的肝癌患者腫瘤組織標(biāo)本30例，并以相應(yīng)癌旁正常組織（距離腫瘤組織>5 cm）為參照。所有患者在手術(shù)前或手術(shù)后均未進(jìn)行化療或放療。30例肝癌患者中，男性17例，女性13例;年齡50～65歲，平均年齡（54.23±4.37）歲;其中8例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，22例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研獲得患者同意并獲得研究所研究倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)? ?納入標(biāo)準(zhǔn)：①心、肺功能基本正常;②預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月;③經(jīng)臨床和病理學(xué)檢查為原發(fā)性肝癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位腫瘤;②不穩(wěn)定的系統(tǒng)性疾病;③未控制的感染。

1.3主要試劑? ?UbcH10特異的兔抗體抗體、免疫組化通用二抗試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司;Harris蘇木素購(gòu)自中國(guó)北京中衫金橋公司;DAB顯色液試劑盒、檸檬酸鹽緩沖液均購(gòu)自北京中杉金橋有限公司。

1.4方法? 在取得組織樣本后在液氮中快速冷凍，并在手術(shù)后于-80℃下儲(chǔ)存以進(jìn)行免疫組化分析。通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)肝癌組織中的UbcH10蛋白表達(dá)。免疫組化染色采用鏈霉卵白素-辣根過氧化物酶（sp）法。石蠟包埋，3 μm厚的組織切片，將切片脫石蠟并使用乙醇溶液脫水。終止內(nèi)源過氧化物酶活性后在磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中漂洗后，在檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）中處理，然后將切片在室溫下冷卻。第一抗體是對(duì)UbcH10特異的兔抗體（1∶15，Atlas Antibodies，Sigma-Aldrich，USA）。將切片與一抗孵育過夜4℃，然后使用二抗，用二氨基聯(lián)苯胺顯示結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過顯微鏡計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分比判定，在光學(xué)顯微鏡下每張切片隨機(jī)連續(xù)計(jì)數(shù)5個(gè)視野（×400）內(nèi)陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)。具體判斷標(biāo)準(zhǔn)：組織完全不著色或陽性細(xì)胞數(shù)不足5%為陰性（-）;組織陽性細(xì)胞數(shù)為5%～25%為陽性（+）;陽性細(xì)胞數(shù)>25%～50%為中陽性（++）;陽性細(xì)胞數(shù)占50%以上為強(qiáng)陽性（+++），視為UbcH10高表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1肝癌組織中UbcH10的表達(dá)? 有93.33%（28/30）的肝癌組織中顯示UbcH10表達(dá)，僅有6.67%（2/30）的正常肝組織顯示UbcH10表達(dá)，肝癌組織中UbcH10表達(dá)高于癌旁正常肝組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其中高分化肝癌組織UbcH10表達(dá)低于低分化肝癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖1。

2.2肝癌UbcH10表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系? 不同年齡、性別患者中UbcH10表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;不同腫瘤大小、組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移患者中UbcH10表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

癌癥的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)由多種基因參與的、多步驟、多階段的病理過程。其中可能涉及多種原癌基因的異常激活，抑癌基因作用減弱或者失活。這些病理改變可能使正常細(xì)胞的增殖失控，最終導(dǎo)致細(xì)胞癌變。肝癌做為一種常見的惡性腫瘤，原發(fā)性肝癌的病因及確切分子機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為其發(fā)病是多因素的復(fù)雜過程，受環(huán)境和飲食雙重因素影響。早期肝癌常癥狀無特異性，中晚期肝癌的癥狀則較多，常見的臨床表現(xiàn)為肝區(qū)疼痛、納差、腹脹、消瘦，乏力、進(jìn)行性肝大或上腹部包塊等;部分患者有低熱、腹瀉、黃疸、上消化道出血;且肝癌破裂后出現(xiàn)急腹癥表現(xiàn)等，也有癥狀不明顯或僅表現(xiàn)為轉(zhuǎn)移灶的癥狀。腫瘤標(biāo)志物指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細(xì)胞生物合成、釋放或者是宿主對(duì)癌類反應(yīng)性的一類物質(zhì)。

白酶體系統(tǒng)（UPS），介導(dǎo)泛素-蛋細(xì)胞內(nèi)泛素化的蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶體降解，是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)蛋白穩(wěn)態(tài)的重要途徑。當(dāng)泛素-蛋白酶體通路對(duì)腫瘤相關(guān)因子的降解功能發(fā)生異常時(shí)，可能引起癌基因蛋白異常增高、抑癌基因蛋白異常降解、腫瘤細(xì)胞凋亡通路受抑制或增殖活化，而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。UbcH10作為泛素結(jié)合酶家族的成員，參與細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子的泛素依賴性蛋白水解過程，被認(rèn)為是癌癥進(jìn)展中的關(guān)鍵因素。韓少山等[4]研究表明，UbcH10的高表達(dá)與肝癌的惡性臨床病理特征相關(guān)，其可能成為潛在的分子標(biāo)注或治療靶點(diǎn)。UbcH10過度表達(dá)可引起腫瘤細(xì)胞多種指標(biāo)的改變[5，6]，抑制其表達(dá)可降低癌細(xì)胞的惡性程度。多項(xiàng)研究表明，UbcH10在乳腺癌[7]、卵巢癌[8]、淋巴瘤[9]、胃癌[10]、胰腺導(dǎo)管癌[11]、腦膠質(zhì)瘤[12]、結(jié)腸癌[13]等多種腫瘤中呈高表達(dá)并且與腫瘤分期呈正相關(guān)，提示不良預(yù)后[14-16]。

本研究結(jié)果顯示，有93.33%（28/30）的肝癌組織中顯示UbcH10表達(dá)，僅有6.67%（2/30）的正常肝組織顯示UbcH10表達(dá)，肝癌組織中UbcH10表達(dá)高于癌旁正常肝組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其中高分化肝癌組織UbcH10表達(dá)低于低分化肝癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同年齡、性別患者中UbcH10表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;不同腫瘤大小、組織學(xué)分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移患者中UbcH10表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明肝癌組織中存在UbcH10過度表達(dá)，可能與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)。另有研究表明[17]，干擾UbcH10基因表達(dá)可顯著抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖活性并增加細(xì)胞凋亡。Treffers EE等[18]研究表明，UbcH10基因過表達(dá)小鼠在接觸致癌藥物后有更高的癌癥發(fā)病率，并且UbcH10基因過表達(dá)小鼠在生長(zhǎng)過程有自然形成腫瘤的傾向。

綜上所述，UbcH10在肝癌患者肝組織中過度表達(dá)，并與腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。UbcH10可作為肝癌患者腫瘤治療的預(yù)后標(biāo)志物和潛在分子靶點(diǎn)。

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收稿日期：2019-3-26;修回日期：2019-4-30

編輯/杜帆