張兵 盧亦愚 程東慶

1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 杭州 310053 2.浙江省疾病預(yù)防控制中心

甲型流感病毒由于其高致病性及高致死性，對人類健康和畜牧業(yè)均造成了重大危害，是全球公共衛(wèi)生面臨的重大威脅之一。其中H3N2型甲型流感病毒是引起流感大流行的重要亞型之一，20世紀(jì)以來出現(xiàn)過3次流感世界性大流行，1968年H3N2型甲型流感病毒導(dǎo)致的流感大流行至少造成全球100萬人死亡[1]。疫苗是流感防治的主要方法之一，然而由于流感病毒易于發(fā)生抗原性變異、溫度敏感性變異等，疫苗極易失效[2]。臨床上，抗流感藥物主要包括M2離子通道蛋白抑制劑和神經(jīng)氨酸酶抑制劑兩大類[3]，隨著這些藥物的長期廣泛使用，流感病毒耐藥性不斷增強，因此急需開發(fā)治療流感的新藥物。

中藥治療流感自古有之，從中藥中尋找有效成分以開發(fā)新藥治療流感已逐漸引起研究者重視[4]。蘭科植物白及（Bletilla striata）在我國境內(nèi)分布廣泛，研究證實，聯(lián)芐類和菲類是白及的主要有效成分，其生物活性包括抗氧化、抗誘變、抗炎、抗菌、抗血小板聚集等[5]。因此，本研究建立流感病毒鼠肺適應(yīng)株感染小鼠模型，探討白及提取物在小鼠體內(nèi)抗流感病毒的藥效，為開發(fā)抗流感的新藥物提供實驗依據(jù)，并為臨床治療流感提供新思路。

1 對象和方法

1.1 病毒株和雞胚 流感病毒A/Sydney/5/97（H3N2）由浙江省疾病預(yù)防控制中心保存并提供；9～10d齡SPF級雞胚購于浙江立華農(nóng)業(yè)科技有限公司[實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（浙）2016-0003]。

1.2 實驗動物 SPF級雌性BALB/C小鼠181只，6～8周齡，體質(zhì)量18～20g，購于上海西普爾必凱實驗動物有限公司[實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2018-0006]，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心[實驗動物使用許可證號：SYXK（浙）2018-0012]。

1.3 藥物和試劑 白及于2012年采挖自浙江省杭州市臨安區(qū)，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院丁志山教授鑒定。白及塊莖洗凈后，置于35℃的烘箱中烘干、粉碎，并過40目篩。準(zhǔn)確稱取200g粉末，加入95%乙醇3 000mL，回流提取2h，減壓抽濾，再向濾渣中加入95%乙醇1 500mL，回流提取、抽濾，合并兩次濾液，減壓濃縮，干燥備用。使用時以二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）配制成生藥質(zhì)量濃度為1.4mg·mL-1的儲備液，過濾除菌后置于-20℃儲存。達菲膠囊購于瑞士巴塞爾豪夫邁·羅氏有限公司（規(guī)格：75mg；批號：10077524）；Prime ScriptTMOne Step RT-PCR Kit試劑盒購于TaKaRa公司（批號：AK3001）；白細胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、干擾素-α（interferon-α,IFN-α）和IFN-β ELISA試劑盒購于ebioscience公司（批號：1702201、1703151、1702151）。

1.4 主要儀器 1300型生物安全柜為Thermo公司產(chǎn)品；Milli-Q Biocel超純水儀購于美國Millipore公司；BSS260型雞胚孵育箱購于德國Grumbach公司。

1.5 方法

1.5.1 流感病毒鼠肺適應(yīng)株的制備 參考文獻[6]的方法，將16只雌性BALB/C小鼠以完全隨機法分成4組，并用苦味酸進行標(biāo)記稱重。對流感病毒毒株A/Sydney/5/97（H3N2）進行倍比稀釋，稀釋濃度為 10-1～10-3，稀釋后滴鼻感染小鼠，每只小鼠的接種劑量為90μL，每個稀釋度重復(fù)3次，接種病毒后每天觀察小鼠的生命體征。選擇活動減弱明顯、精神狀態(tài)不佳及體質(zhì)量變化最大的小鼠，當(dāng)生命體征下降較明顯時處死小鼠，并分離其病變肺，冰上研磨，以熒光定量PCR檢測肺組織勻漿上清液Ct值。參考文獻[7-8]的方法，再次增殖病毒并進行血凝實驗。當(dāng)血凝滴度達到1：1 024時，則可作為流感病毒鼠肺適應(yīng)株，分裝并置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2 流感病毒半數(shù)致死劑量（mouse influenza virus median lethal dose，MLD50） 的測定 將 56只雌性BALB/C小鼠以完全隨機法分成7組，每組8只，分別稱重并用苦味酸標(biāo)記。流感病毒從10-1開始，以0.9%氯化鈉溶液進行10倍連續(xù)倍比稀釋，根據(jù)Reed-Muench法確定最適滴鼻濃度[9]。乙醚麻醉后，病毒滴鼻感染小鼠，每只小鼠的接種劑量為90μL，分兩次滴鼻完成，中間間隔2h。接種病毒后的小鼠正常飼養(yǎng)，每日觀察小鼠的活動、精神狀態(tài)及體質(zhì)量變化，觀察周期為14d[10]。計算小鼠的死亡率，根據(jù)Reed-Muench方法計算MLD50[9]。

1.5.3 白及提取物對小鼠的毒性試驗 取雌性BALB/C小鼠25只，隨機分成5組，每組5只，分別稱重并用苦味酸標(biāo)記。毒性試驗高、中、低劑量組分別以16g/kg·d、8g/kg·d、4g/kg·d 白及提取物灌胃，正常對照組給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，DMSO組給予等量DMSO 灌胃，灌胃體積均為 200μL/只，1次/d，連續(xù)給藥7d。每日觀察并記錄小鼠的活動、精神狀態(tài)、體質(zhì)量變化[11]，并計算小鼠死亡率。根據(jù)死亡率確定白及提取物的最大無毒劑量，即小鼠模型的給藥劑量。

1.5.4 小鼠感染模型的建立及給藥 參考朱華等[12]的方法，84只小鼠適應(yīng)性培養(yǎng)2d后，采用完全隨機法分為7組：模型組、達菲組、白及提取物高劑量組、中劑量組、低劑量組、正常對照組及DMSO組，每組12只。將1.5.3得出的白及最大無毒劑量確定為高劑量，然后依次進行兩次2倍稀釋，即為中、低劑量。乙醚麻醉小鼠后，模型組、達菲組和白及提取物高、中、低劑量組小鼠以0.1MLD50的病毒鼠肺適應(yīng)株90μL滴鼻感染；正常對照組和DMSO組以等量0.9%氯化鈉溶液滴鼻，分兩次滴鼻完成，中間間隔2h。接種病毒后2h，模型組、正常對照組分別予以0.9%氯化鈉溶液灌胃，達菲組予達菲0.03g/kg·d灌胃，白及高、中、低劑量組分別予白及提取物 8g/kg·d、4g/kg·d、2g/kg·d灌胃，DMSO組給予等量DMSO灌胃，灌胃體積均為 200μL/只，1 次/d，連續(xù)給藥 7d。

1.5.5 白及提取物對小鼠血清炎性細胞因子的影響 感染后第 1、3、5、7天各組隨機選取3只小鼠，禁食不禁水4h后稱重，摘取眼球取血后處死。血液標(biāo)本室溫靜置1h，3 000r/min離心10min分離血清，按ELISA試劑盒說明書分別檢測IL-2、IFN-α和 IFN-β 的含量[13]。

1.5.6 白及提取物對小鼠肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率的影響 前期操作同1.5.5，小鼠摘除眼球取血后，打開胸腔，在無菌條件下分離全肺，以PBS沖洗2次，濾紙吸干肺臟水分，稱量肺質(zhì)量，并計算肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率。肺指數(shù)（%）=肺臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%；肺指數(shù)抑制率（%）=（模型組平均肺指數(shù)-藥物組平均肺指數(shù)）/模型組平均肺指數(shù)×100%[14]。

1.5.7 白及提取物對小鼠肺組織病理學(xué)的影響 各組剩余小鼠第7天稱重完畢后，開胸分離右肺，以10%甲醛固定，再以乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋后制備成4～5μm常規(guī)切片，HE染色后光鏡下觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變[15]。

1.5.8 白及提取物對小鼠肺組織病毒載量的影響 各組剩余小鼠第1、3、5、7天稱重完畢后，開胸分離左肺，加入1mL磷酸鹽緩沖液，用玻璃勻漿器研磨，3 000r/min離心1min，取其上清液，以Qiagen試劑盒提取肺組織中的流感病毒RNA。甲型流感病毒通用引物和探針由浙江省疾病預(yù)防控制中心提供，引物序列見表1。采用Prime ScriptTMOne Step RT-PCR試劑盒及甲型流感病毒通用引物、探針來檢測病毒RNA合成量。反應(yīng)體系共 25μL，2×One Step RT-PCR BufferⅢ12.5μL，TaKaRa Ex TaqTMHS（5U·μL-1）0.5μL，Prime ScriptTMRT Enzyme Mix Ⅱ 0.5μL，20μmol·L-1的 PCR 上下游引物各 0.6μL，20μmol·L-1的探針0.3μL，以RNase Free dH2O補足至25μL。反應(yīng)條件為：42℃逆轉(zhuǎn)錄 30min，95℃預(yù)變性 2min，95℃變性5s，55℃退火35s，共40個循環(huán)。反應(yīng)完成后，分析得出各個樣品的Ct值。用Ct值來表示病毒載量，Ct值越小，則病毒載量越大，小鼠流感病毒感染程度越嚴(yán)重[16-17]。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MLD50測定結(jié)果 以小鼠的死亡率作為判斷指標(biāo)，依據(jù)Reed-Muench法計算得出MLD50為10-5/90μL。見表2。本實驗要求所有小鼠均存活，但臨床表現(xiàn)處于異常狀態(tài)且肺組織形態(tài)存在病理性變化，基于小鼠的死亡率及上述因素，最終確定流感病毒毒株的最佳接種劑量為0.1MLD50。

2.2 白及提取物小鼠毒性試驗結(jié)果 小鼠連續(xù)給藥7d，并記錄小鼠的活動、精神狀態(tài)和死亡情況，計算小鼠死亡率。結(jié)果顯示，白及提取物劑量為16g/kg·d時，對小鼠存在毒性作用。見表3。因此，后續(xù)試驗中以8g/kg·d為高劑量，然后依次對半稀釋得到4g/kg·d、2g/kg·d，即為中、低劑量。

2.3 各組小鼠肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率比較 流感病毒感染后，模型組小鼠的肺指數(shù)持續(xù)增加，感染后第3、5、7天，均高于正常對照組（P＜0.01），在第 7 天達到最高值，說明成功建立流感病毒小鼠模型。第1天時，達菲組及白及提取物高、中、低劑量組小鼠肺指數(shù)低于模型組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；而第3、5、7天達菲組肺指數(shù)均低于模型組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；第 3、5、7 天白及提取物高劑量組，第5、7天中劑量組肺指數(shù)也低于模型組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。各時間點白及提取物各劑量組的肺指數(shù)均高于DMSO組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。第 5、7天白及提取物各劑量組肺指數(shù)均顯著高于達菲組（P＜0.01）。見表4。表明達菲對小鼠流感感染模型的保護作用要優(yōu)于白及提取物。第1、3、5、7天，白及提取物各劑量組和達菲組隨著時間延長，肺指數(shù)抑制率呈升高趨勢，從高到低依次為達菲組、白及提取物高、中、低劑量組。白及提取物高劑量組肺指數(shù)抑制率最高達35.8%，而達菲組最高可達47.2%。見表5。

表2 MLD50測定結(jié)果Tab.2 Results of MLD50determination

表3 白及提取物對小鼠的毒性Tab.3 Toxicity of Bletilla striata extract on mice

2.4 各組小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化比較 流感病毒感染第7天，正常對照組及DMSO組小鼠支氣管結(jié)構(gòu)完整，肺泡、肺泡囊、肺泡管、肺泡隔形態(tài)完整，支氣管上皮完整，管腔內(nèi)無分泌物且無炎性細胞滲出。模型組小鼠肺組織可見大量中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞等炎性細胞浸潤，組織間可見大量紅細胞滲出、肺泡壁增厚、肺間質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞等肺間質(zhì)性炎癥表現(xiàn)。達菲組和白及提取物高劑量組肺間質(zhì)炎癥緩解，肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)較為完整，有少量淋巴細胞滲出，伴少量紅細胞漏出；中劑量組與模型組比較，仍顯示出一定的改善趨勢；低劑量組病理學(xué)改善不明顯。見圖1。

2.5 各組小鼠肺組織中病毒載量變化比較 正常對照組與DMSO組小鼠肺組織中無流感病毒檢出。感染后第1、3、5、7天，模型組小鼠肺組織Ct值分別為26.02、15.93、13.63、13.57，表明病毒載量隨著時間的延長而不斷增加。白及提取物高劑量組Ct值分別為25.76、20.26、18.17、18.41；中劑量組 Ct值分別為25.23、17.29、17.09、16.31； 低 劑 量 組 Ct 值 分 別 為25.99、17.15、15.56、14.74；達菲組 Ct值分別為 25.61、21.06、19.18、19.54。Ct值均不斷減小，表明病毒載量隨著時間的延長而不斷增加。與模型組比較，第1天時達菲組及白及提取物高、中、低劑量組Ct值均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；第 3、5、7 天時達菲組及白及提取物高劑量組Ct值高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；第5、7天中劑量組Ct值高于模型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；第5天低劑量組Ct值高于模型組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。上述結(jié)果表明，白及提取物可以抑制小鼠肺組織中流感病毒復(fù)制，其中以白及提取物高劑量組效果最明顯，感染第3天即開始起效。

表4 各組小鼠肺指數(shù)比較（%）Tab.4 Comparison of lung index in each group(%)

表5 各組小鼠肺指數(shù)抑制率比較（%）Tab.5 Comparison of inhibition ratio of lung index in each group(%)

2.6 各組小鼠血清IL-2含量比較 與正常對照組比較，模型組小鼠血清中 IL-2含量降低，感染后第1、3 天差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05），第 5、7天差異則無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組比較，白及提取物各劑量組和達菲組小鼠血清中IL-2含量均有不同程度升高，第1、3、5、7天白及提取物高劑量組和達菲組小鼠血清中IL-2含量均高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；中劑量組IL-2含量高于模型組，除第3天外，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；低劑量組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與白及提取物高劑量組比較，中劑量組IL-2含量降低，其中第1、5天差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；白及提取物低劑量組第1、3、5、7天IL-2含量均低于高劑量組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。白及提取物中、低劑量組各時間點差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表6。

2.7 各組小鼠血清IFN-α、IFN-β含量比較 感染后第1～3天，模型組、白及提取物各劑量組和達菲組小鼠血清中IFN-α含量明顯升高，到第5～7天又逐漸下降。與正常對照組比較，模型組小鼠血清中IFN-α含量升高，其中第3、5天差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05），第 1、7 天差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組比較，第1、3、5天白及提取物高劑量組和達菲組IFN-α含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；第1、3天白及提取物中、低劑量組IFN-α含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。與白及提取物高劑量組比較，中劑量組IFN-α含量降低，但各時間點均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；低劑量組IFN-α含量降低，第 3、5 天差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），第 1、7天均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。白及提取物中、低劑量組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表7。

圖1 流感病毒感染第7天各組小鼠肺組織病理改變（HE染色，40×）Fig.1 Pathological changes of mice lung tissue on the 7th day of influenza virus infection in each group(HE stain,40×)

圖2 各組小鼠肺組織中病毒載量變化比較Fig.2 Comparison of viral load of lung tissue in each group

感染后第1～3天，模型組、白及提取物各劑量組和達菲組小鼠血清中IFN-β含量明顯升高，到第5～7天又逐漸下降。與正常對照組比較，模型組小鼠血清中IFN-β含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，第1、3、5、7天白及提取物高、中劑量組、達菲組IFN-β含量升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），第5天白及提取物低劑量組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。白及提取物各劑量組間比較，相同時點隨著劑量增高，IFN-β含量隨之升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表 8。

表6 各組小鼠血清 IL-2 含量比較（±s，pg·mL-1）Tab.6 Comparison of serum IL-2 content in each group(±s,pg·mL-1)

表6 各組小鼠血清 IL-2 含量比較（±s，pg·mL-1）Tab.6 Comparison of serum IL-2 content in each group(±s,pg·mL-1)

注：與正常對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與白及提取物高劑量組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：Compared with normal control group,△P＜0.05,△△P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05,**P＜0.01;compared with Bletilla striata extract high dose group,#P＜0.05,##P＜0.01

組別IL-2含量第1天 第3天 第5天 第7天正常對照組DMSO組模型組達菲組白及提取物高劑量組白及提取物中劑量組白及提取物低劑量組126.86±0.66 123.85±1.14 115.11±1.33△△132.44±4.57**131.07±2.10**124.02±2.79*#120.98±0.49##124.54±2.53 126.13±3.22 117.74±2.98△134.33±3.31**130.92±3.30**125.25±3.62 120.45±1.69##124.96±1.43 124.89±0.90 115.61±6.75 132.62±6.32**131.76±0.71**124.50±2.71*#121.17±0.47##123.56±3.64 124.13±2.08 116.18±3.70 134.81±3.23**130.25±4.24**125.44±2.77*119.22±3.85#

表7 各組小鼠血清 IFN-α 含量比較（±s，pg·mL-1）Tab.7 Comparison of serum IFN-α content in each group（±s,pg·mL-1)

表7 各組小鼠血清 IFN-α 含量比較（±s，pg·mL-1）Tab.7 Comparison of serum IFN-α content in each group（±s,pg·mL-1)

注：與正常對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與白及提取物高劑量組比較，#P＜0.05Note：Compared with normal control group,△P＜0.05,△△P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05，**P＜0.01;compared with Bletilla striata extract high dose group,#P＜0.05

組別IFN-α第1天 第3天 第5天 第7天正常對照組DMSO組模型組達菲組白及提取物高劑量組白及提取物中劑量組白及提取物低劑量組25.60±3.62 23.99±3.05 33.15±3.37 57.73±4.49**52.66±8.41**45.53±4.35**43.52±6.96*25.12±1.50 24.09±1.14 37.64±3.15△△62.39±5.31**58.53±5.10**50.48±2.74**47.74±2.76*#25.44±1.95 25.07±0.31 30.09±1.77△49.82±2.61**42.57±3.68**39.36±5.31 34.58±2.87#26.42±6.15 25.42±0.69 28.84±3.98 37.30±4.30 33.19±2.73 30.45±2.55 27.15±3.03

3 討論

近年來，我國各地多次流感大爆發(fā)，全國各地均成為流感高發(fā)地區(qū)。由于流感病毒傳播速度快，極易發(fā)生抗原突變，目前尚無有效的手段來預(yù)防流感的爆發(fā)和傳播。奧司他韋（達菲）為臨床治療流感的常用藥，但目前流感病毒普遍對其存在耐藥性，急需開發(fā)新型抗流感藥物[18]。

蘭科植物白及（Bletilla striata）又名白芨、甘根，為傳統(tǒng)中藥，味苦、甘，性涼。白及的化學(xué)成分包括聯(lián)芐、二氫菲、聯(lián)苯、菲、類固醇及其他皂苷、黃酮類化合物等[19-21]。已有研究表明，白及中的聯(lián)芐類化合物及黃酮類化合物成分具有抗病毒作用，可見白及中多種成分均具有抗流感病毒的潛力[22-23]。

本研究建立了流感病毒鼠肺適應(yīng)株感染小鼠模型，以肺指數(shù)、肺指數(shù)抑制率、肺組織病毒載量、肺臟病理形態(tài)學(xué)改變以及血清中炎癥因子含量來綜合評價白及提取物小鼠體內(nèi)抗流感病毒藥效。實驗結(jié)果表明，白及提取物高、中劑量組可以在第5、7天顯著降低模型小鼠的肺指數(shù)，達菲組在第3、5、7天顯著降低模型小鼠的肺指數(shù)，而其他各組對模型小鼠的肺指數(shù)無明顯影響；白及提取物高劑量組可在第3、5、7天降低肺臟病毒載量，并能夠改善病毒感染所致機體肺組織病理形態(tài)學(xué)改變，減少肺組織中的中性粒細胞、淋巴細胞浸潤，減輕肺泡壁充血以及肺泡擴張等。

在小鼠血清中，白及提取物各劑量組和達菲組小鼠血清中IL-2、INF-α、INF-β含量均有不同程度升高。IL-2由T細胞產(chǎn)生，以自分泌和旁分泌方式發(fā)揮效應(yīng)，主要生物學(xué)功能包括活化T細胞，促進細胞因子產(chǎn)生；刺激自然殺傷細胞（natural killer cell,NK cell）和淋巴因子激活的殺傷細胞（lymphokine-activated killer cell,LAK cell）等多種殺傷細胞增殖分化，并誘導(dǎo)其產(chǎn)生細胞因子；促進B細胞增殖和分泌抗體；激活巨噬細胞等。INF-α、INF-β是免疫細胞抗病毒免疫應(yīng)答時產(chǎn)生的細胞因子，通過干擾病毒基因轉(zhuǎn)錄或病毒蛋白組分的翻譯，從而阻止或限制病毒感染；同時能調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)。

表8 各組小鼠血清 IFN-β 含量比較（±s，pg·mL-1）Tab.8 Comparison of serum IFN-β content in each group(x±s，pg·mL-1)

表8 各組小鼠血清 IFN-β 含量比較（±s，pg·mL-1）Tab.8 Comparison of serum IFN-β content in each group(x±s，pg·mL-1)

注：與正常對照組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與白及提取物高劑量組比較，##P＜0.01；與白及提取物中劑量組比較，◆◆P＜0.01Note：Compared with normal control group,△△P＜0.01;compared with model group,*P＜0.05,**P＜0.01;compared with Bletilla striata extract high dose group,##P＜0.01;compared with Bletilla striata extract medium dose group,◆◆P＜0.01

組別IFN-β第1天 第3天 第5天 第7天正常對照組DMSO組模型組達菲組白及提取物高劑量組白及提取物中劑量組白及提取物低劑量組115.44±1.27 116.51±1.62 128.34±4.41△△159.61±4.17**156.09±0.19**150.17±1.70**##128.05±2.12##◆◆115.87±4.95 116.75±3.96 157.51±7.29△△208.01±0.50**195.89±3.31**183.67±2.40**##163.60±2.78##◆◆114.26±1.99 114.96±7.92 143.56±2.17△△187.11±6.43**177.16±2.13**166.35±2.81**##150.65±1.39*##◆◆116.50±2.64 116.86±2.13 134.19±3.50△△173.79±2.60**163.13±2.18**144.68±2.34**##138.81±0.63##◆◆

本研究表明，白及提取物在小鼠體內(nèi)能有效拮抗流感病毒，能夠降低小鼠肺指數(shù)、肺組織病毒載量、改善病毒感染所致機體肺組織病理形態(tài)學(xué)改變，其機制可能是促進IL-2、INF-α、INF-β分泌，增強和調(diào)節(jié)小鼠細胞免疫功能，從而達到抗流感病毒感染的效果。研究結(jié)果提示，白及提取物中有效成分極有可能發(fā)展成為抗流感病毒新藥，需進一步深入研究。