上海中醫(yī)藥大學(xué) 上海 201203

五行學(xué)說作為中醫(yī)理論體系中的一個(gè)組成部分[1]，是一種能夠闡釋人體的生理、病理及其與外在環(huán)境的相互聯(lián)系，并指導(dǎo)臨床診斷與治療的獨(dú)特理論。在中醫(yī)美容實(shí)踐中，五行歸類、臟腑相關(guān)理論對(duì)美容輔助產(chǎn)品的研發(fā)和應(yīng)用具有重要價(jià)值[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為，“肝、心、脾、肺、腎”這五臟狀態(tài)的微小變化，都能夠直接影響人體皮膚狀態(tài)[3]。筆者在中醫(yī)五行理論指導(dǎo)下，選取對(duì)應(yīng)人體五臟的五種中藥材[4-5]，按照一定比例浸泡在植物油中制備成五行按摩油，通過中醫(yī)推拿與經(jīng)絡(luò)按摩手法，試圖探索自制五行按摩油在提高皮膚彈性及保濕等方面的功效，同時(shí)評(píng)價(jià)了自制五行按摩油的外用安全性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 儀器 皮膚彈性測(cè)量?jī)xCutometer MPA580（配有Corneometer探頭）、經(jīng)皮水分散失度（transepidermal water loss,TEWL）測(cè)量?jī)xTewameterTM300均購(gòu)于德國(guó)Courage-Khazaka公司；AT210型電子天平購(gòu)于瑞士梅特勒-托利多公司；TC-6K型電子天平購(gòu)于美國(guó)雙杰兄弟有限公司。

1.2 藥品和試劑 藏紅花、蘇木、枸杞、蟬蛻、何首烏均購(gòu)于上?？禈蛑兴庯嬈邢薰荆ㄅ?hào)：141185-201469、141009-201463、141096-201416、141003-201452、141062-201485）；葡萄籽油購(gòu)自上海浦恩生化科技有限公司（批號(hào)：20180109875）；乙醇（分析純）購(gòu)于沃凱公司（批號(hào)：201705674）；水為蒸餾水。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)雌性新西蘭大白兔4只，體質(zhì)量2.0～2.5kg，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滬）2014-0008]。

1.4 自制五行按摩油的制備 具體制備方法參考文獻(xiàn)[6-7]，稱取藏紅花、蘇木、枸杞、蟬蛻、何首烏各50g，置于錐形瓶中，加入1 000mL葡萄籽油，使其完全浸沒飲片。將錐形瓶密封放置于陽(yáng)光下，倒置容器7d，待浸提完成后，將飲片及油取出加熱，待油溫達(dá)50℃時(shí)停止加熱，立即撈出藥渣，待油冷卻至室溫后過濾，置于容器內(nèi)密封備用。

1.5 對(duì)象 2017年5月至6月選擇年齡30～56歲、皮膚代謝速率相對(duì)穩(wěn)定的女性作為受試者，隨機(jī)抽取16例女性，平均年齡（45.7±8.8）歲，按隨機(jī)分配原則分為自制五行按摩油組和葡萄籽油對(duì)照組，每組8例。自制五行按摩油組受試者平均年齡（45.3±9.3）歲，葡萄籽油對(duì)照組平均年齡（46.1±8.8）歲，兩組受試者年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。所有受試者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期或哺乳期女性；（2）易過敏體質(zhì)；（3）有心腦血管、肝、腎、造血系統(tǒng)性疾病和精神病史者；（4）短期內(nèi)使用其他背部護(hù)膚品或按摩產(chǎn)品者；（5）非志愿參加者或不能按要求完成規(guī)定內(nèi)容者。

1.6 測(cè)試方法 分別進(jìn)行短期和長(zhǎng)期功效測(cè)試[8]。同一受試者的測(cè)試由同一測(cè)試人員采用同一儀器完成。所有測(cè)試均在恒溫恒濕（溫度20～22℃，相對(duì)濕度40%～60%）的環(huán)境下進(jìn)行。

1.6.1 短期功效測(cè)試 受試者充分暴露后背部皮膚，在測(cè)試人員的幫助下對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)單清潔，用四功能美容蒸汽機(jī)熱噴5min，并用無(wú)屑紙巾擦干，測(cè)試人員在其背部用記號(hào)筆標(biāo)記直徑約為3cm的圓圈，用皮膚彈性測(cè)量?jī)xCutometer MPA580和TEWL測(cè)量?jī)x分別測(cè)試標(biāo)記部位皮膚角質(zhì)層的水分含量[9]、TEWL和皮膚彈性值。隨后由測(cè)試人員分別使用自制五行按摩油和葡萄籽油5mL按摩背部20min，2、4h后測(cè)試相應(yīng)部位皮膚的水分含量和TEWL值。在進(jìn)行皮膚水分含量測(cè)試時(shí)，每一皮膚區(qū)域重復(fù)測(cè)試5次，TEWL測(cè)試40s。皮膚彈性值測(cè)試采用恒定負(fù)壓模式，共2個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)6s，結(jié)果以R值表示。

1.6.2 長(zhǎng)期功效測(cè)試 兩組受試者每周分別使用自制五行按摩油、葡萄籽油2次，連續(xù)使用4周，分別測(cè)試使用前和使用2、4周后相應(yīng)位置皮膚彈性值[10-11]。

1.7 動(dòng)物皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 選擇雌性新西蘭大白兔4只，實(shí)驗(yàn)前背部?jī)蓚?cè)剃毛，兩側(cè)去毛面積各3cm×3cm左右，剃毛后恢復(fù)24h備用。給藥前目視檢查有無(wú)因剃毛而破損的皮膚，若有破損，則不宜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用自身左右對(duì)照，左側(cè)為葡萄籽油對(duì)照組，右側(cè)為自制五行按摩油組。分別取0.5mL受試物涂布于兩側(cè)已剃毛的皮膚，立即用玻璃紙覆蓋，再以3cm×3cm的兩層紗布包裹，最后用繃帶及膠帶固定。

根據(jù)臨床實(shí)際應(yīng)用情況，每只動(dòng)物每次給藥4h，連續(xù)給藥3d。給藥前用溫水清洗給藥部位，于每次給藥后1h、再次給藥前及給藥第3天去除藥物后1、24、48和72h分別觀察并記錄兩側(cè)皮膚狀況，包括有無(wú)紅斑及水腫等，對(duì)其進(jìn)行評(píng)分，觀察期限內(nèi)每天進(jìn)行評(píng)價(jià)。

參照《化學(xué)品急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)方法》[12]中皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥物刺激性進(jìn)行評(píng)價(jià)。見表1、2。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以表示，兩組受試者的皮膚水分含量、TEWL和皮膚彈性值組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，同組治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者治療前后皮膚水分含量比較 兩組受試者治療前皮膚水分含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與治療前比較，治療后2h后兩組受試者皮膚水分含量均增加（P＜0.05），自制五行按摩油組治療后4h皮膚水分含量仍高于治療前（P＜0.05）；而葡萄籽油對(duì)照組治療后4h皮膚水分含量下降，與治療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。自制五行按摩油組治療2、4h后皮膚水分含量均高于同時(shí)點(diǎn)葡萄籽油對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。表明自制五行按摩油有更好的保濕效果，并可持久保濕4h以上。

2.2 兩組受試者治療前后TEWL比較 兩組受試者治療前及治療后2、4h的TEWL差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與治療前比較，自制五行按摩油組治療2、4h后水分流失差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。表明單次使用自制五行按摩油對(duì)皮膚TEWL的影響不大，效果與葡萄籽油相似。

表3 兩組受試者治療前后皮膚水分含量比較

2.3 兩組受試者皮膚治療前后彈性值比較 兩組受試者治療前皮膚彈性值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，自制五行按摩油組受試者皮膚彈性值呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，治療2、4周皮膚彈性值均高于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；葡萄籽油對(duì)照組治療4周后，皮膚彈性值與治療前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。組間比較，治療2、4周后自制五行按摩油組受試者皮膚彈性值高于同時(shí)點(diǎn)葡萄籽油對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表5。綜上所述，自制五行按摩油提高皮膚彈性的功效優(yōu)于葡萄籽油，預(yù)示其具有減緩衰老的作用[13]。

表5 兩組受試者皮膚彈性值比較

2.4 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 自制五行按摩油多次給藥，對(duì)家兔完整皮膚均無(wú)刺激性，無(wú)明顯紅斑和水腫發(fā)生；葡萄籽油多次給藥，對(duì)家兔完整皮膚也無(wú)刺激性，也未見明顯紅斑和水腫。見表6、圖1。

3 討論

皮膚老化是由自然因素或非自然因素造成的皮膚衰老現(xiàn)象，從老化機(jī)制上可以分為自然老化與光老化，主要體現(xiàn)在皮膚干燥、彈性減低、皺紋增加、雀斑產(chǎn)生等方面[14-15]。本研究表明，自制五行按摩油具有較好的保濕作用并能保持皮膚的彈性，皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)顯示該油對(duì)皮膚無(wú)刺激性，為該產(chǎn)品的后期開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

表6 動(dòng)物皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分（分）

自制五行按摩油由5種中草藥制成，何首烏味苦、澀、甘，性溫，入腎經(jīng)，能養(yǎng)血潤(rùn)燥、祛風(fēng)止癢，可治血虛生風(fēng)之皮膚瘙癢；蘇木味咸、甘、微辛，性平，入脾經(jīng)，可有助于改善皮損或皮膚局部炎癥[16]；蟬蛻味甘，微苦，入肺肝經(jīng)，可補(bǔ)充角質(zhì)層的脂質(zhì)成分，并能夠修復(fù)損傷的皮脂膜，有助于恢復(fù)皮膚的屏障功能[17]，三者相互配合，皮損問題可以有效得到控制和緩解。藏紅花味甘、性平，入心經(jīng)，其提取物被證明具有促進(jìn)血液循環(huán)、改善面部膚色及增強(qiáng)免疫功能等作用[18]；枸杞味甘，入肝經(jīng)，其提取物有抗氧化活性[19]，兩者相結(jié)合，能夠提高機(jī)體免疫選擇力，增強(qiáng)皮膚光澤度。方中五味中藥對(duì)應(yīng)歸經(jīng)為五臟，合用能夠全面調(diào)理和保養(yǎng)皮膚，對(duì)于增強(qiáng)皮膚彈性有較好功效。

中藥材以基底油浸泡后，藥材中的脂溶性成分與油充分融合，具有良好的成型性、黏附性，同時(shí)具有載藥量大，釋藥性好和無(wú)毒無(wú)刺激性等優(yōu)點(diǎn)，皮溫下即可充分吸收，藥物有效成分在皮膚滯留時(shí)間長(zhǎng)，而且其pH在5～7，無(wú)刺激性，使用安全可靠，在美容護(hù)膚方面應(yīng)用廣泛。本研究發(fā)現(xiàn)，自制五行按摩油能夠增加皮膚水分含量、減緩經(jīng)表皮失水，并提高皮膚彈性值，效果優(yōu)于葡萄籽油，說明自制五行按摩油具有一定的抗衰老作用。進(jìn)一步研究將擴(kuò)大樣本量，深入研究其作用機(jī)制，為自制五行按摩油用于輔助美容治療提供更充分的參考依據(jù)。

圖1 動(dòng)物皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)