史琦 李春雷 孔艷華 龍泓竹 李陽溪 閻玥 李友林

摘要 目的：觀察不同致敏液成分、致敏液注射部位、激發(fā)液濃度、激發(fā)時長所造成的SD大鼠哮喘模型的差異，旨在建立一種較為成功的哮喘大鼠模型。方法：分別以10% OVA/Al（OH）3混合液1 mL和10%OVA/Al（OH）3+百日咳桿菌混合液1 mL作為致敏液;注射部位分為腹腔注射和五點(diǎn)注射（雙側(cè)足心、雙側(cè)腹股溝皮下、腹腔）;以1%OVA或2%OVA作為激發(fā)液;激發(fā)時間包括7 d和21 d;經(jīng)上述方法不同組合疊加造模后評價(jià)大鼠的一般活動狀態(tài)、肺組織病理及肺功能檢測結(jié)果。結(jié)果：OVA+百日咳腹腔注射組和OVA+百日咳五點(diǎn)注射組大鼠出現(xiàn)呼吸急促，呼吸困難等典型的哮喘癥狀，OVA腹腔注射組1部分大鼠出現(xiàn)較輕程度的哮喘癥狀，其余各組哮喘癥狀不明顯。病理結(jié)果顯示：OVA+百日咳五點(diǎn)注射組大鼠可見大量的嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤、管腔狹窄、黏液栓生成、支氣管痙攣;OVA腹腔注射組1和OVA+百日咳腹腔注射組主要表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞浸潤和杯狀細(xì)胞較多;其余各組病理改變不明顯。肺功能結(jié)果顯示：疊加了百日咳后的腹腔注射組和五點(diǎn)注射組大鼠的I值和Rn值均較單純OVA腹腔注射組升高，五點(diǎn)注射組大鼠的氣道高反應(yīng)性升高更加明顯（P<0.01）。結(jié)論：OVA結(jié)合滅活百日咳桿菌共同致敏、多點(diǎn)皮下注射聯(lián)合腹腔注射能比較成功的構(gòu)建SD大鼠哮喘模型。

關(guān)鍵詞 SD大鼠;哮喘;造模;模型評價(jià)

Comparative Study on the Establishment Method and Evaluation of SD Rat Asthma Model

Shi Qi， Li Chunlei， Kong Yanhua， Long Hongzhu， Li Yangxi， Yan Yue， Li Youlin

Abstract Objective：To observe the differences of SD rat asthma models with different methods of sensitization fluid composition， sensitized injection site， atomization liquid concentration and time， aiming to establish a more successful asthma rat model. Methods：The10% OVA/Al（OH）3 mixture 1 mL or 10% OVA/Al（OH）3+ pertussis mixture 1 mL were taken as the sensitization fluid respectively; sensitized injection site was abdominal injection or 5 points injection （bilateral foot heart， bilateral inguinal subcutaneous and abdominal injection）; using 1% OVA or 2% OVA as the excitation liquid; excitation time including 7 days and 21 days. General activities， pulmonary pathology and pulmonary function detection were evaluated by different combination methods of factors above. Results：Typical asthmatic symptoms such as shortness of breath， dyspnea and so on in OVA+ pertussis abdominal injection group and OVA+ pertussis 5 points injection group rats were obvious. Mild asthma symptoms were observed in the first OVA group rats， and asthma symptoms in other groups were not obvious. The pathological results showed that OVA+ pertussis 5 points injection group rats showed a large number of eosinophils and lymphocytes infiltration， bronchostenosis， mucus production and bronchospasm. The first OVA group and the OVA+ pertussis abdominal injection group rats showed infiltration of lymphocytes and goblet cells. The pathological changes in the other groups were not obvious. Results of lung function showed that： I and Rn values of OVA+ pertussis 5 points injection group and OVA+ pertussis abdominal injection group rats increased compared with those of the OVA abdominal injection group. Hyperresponsiveness of OVA+ pertussis 5 points injection group increased more significantly （P<0.01）. Conclusion：Sensitization with both OVA and pertussis， multipoint subcutaneous injections combined with abdominal injection can successfully construct the asthma model in SD rats.

Key Words SD rats; Asthma; Model building; Model evaluation

中圖分類號：R285.5;R256.12;R-332文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.11.014

支氣管哮喘（Bronchial Asthma，BA）簡稱哮喘，是由多種細(xì)胞包括嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等及細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎性反應(yīng)性疾病。臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的喘息、氣急、胸悶或咳嗽，近年來認(rèn)識到哮喘是一種異質(zhì)性疾病。全球哮喘患病率呈逐年增長的趨勢，西歐近10年間哮喘患者增加了1倍，美國自20世紀(jì)80年代初以來哮喘患病率增加了60%以上，亞洲的成人哮喘患病率為0.7%～11.9%（平均≤5%）。我國目前至少有3 000萬左右的哮喘患者，其中老年人是繼青少年之后的第二大哮喘發(fā)病高峰人群[1-3]?！度蛳∝?fù)擔(dān)報(bào)告》的研究數(shù)據(jù)來自全球80多個國家和地區(qū)，該報(bào)告顯示當(dāng)時全球范圍內(nèi)約有3億人患有哮喘病。預(yù)計(jì)到2025年，如果全球人口的城市化比例從45%升至59%，則哮喘病患者將有可能達(dá)到4億人[4]。

BA是臨床常見、多發(fā)、難治病，如何提高BA的防控水平、減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)、減少患者致殘率和降低勞動力喪失等已成為眾多學(xué)者探討的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。動物模型是用來識別和檢測哮喘發(fā)病機(jī)制與哮喘表型發(fā)展關(guān)系的理想的工具，人類利用動物模型研究哮喘已百余年的歷史[5]。在研究探索BA防治過程中，穩(wěn)定的動物模型的建立、復(fù)制及科學(xué)評價(jià)成為BA實(shí)驗(yàn)研究成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。目前嚙齒動物（近交系小鼠和大鼠）和豚鼠模型是最常使用的BA動物模型。近年來轉(zhuǎn)基因技術(shù)及物種特有的探針的發(fā)展，也有利于哮喘詳細(xì)的機(jī)制研究[6]。目前，BA動物模型仍存在著造模方法不一、動物種類繁多、模型評價(jià)指標(biāo)不統(tǒng)一以及動物與人類哮喘發(fā)病過程差異性大等諸多問題。

本研究在綜合了相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)研及前期研究結(jié)果[7-9]的基礎(chǔ)上，比較不同致敏液成分（不同佐劑）、致敏注射部位、激發(fā)液濃度及激發(fā)時長所制備的SD大鼠哮喘模型的差異，并結(jié)合大鼠一般活動狀態(tài)、肺組織病理及肺功能檢測進(jìn)行模型綜合評價(jià)，以期建立起穩(wěn)定、可復(fù)制的SD大鼠哮喘模型，規(guī)范評價(jià)方法，為后期的中藥干預(yù)性機(jī)制、機(jī)制研究奠定良好基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級健康雄性SD大鼠共48只，平均體質(zhì)量（170±10）g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司[合格證書號：SCXK（京）2009-0007]，于中日友好醫(yī)院臨床研究所動物室常規(guī)飼養(yǎng)。

1.1.2 試劑與儀器 血清卵蛋白干粉（ovalbumin，OVA，Alfa，USA，批號：A16951）;氫氧化鋁Al（OH）3（Sigma，批號：A4682）;百日咳類毒素（Sigma，批號：P7208）;3%戊巴比妥鈉（上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：WS20050411）。超聲霧化器（江蘇省魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司，型號：402AI）;倒置光學(xué)顯微鏡、普通光學(xué)顯微鏡（Olympus，Japan，型號：BX51）;動物呼吸動力參數(shù)及肺功能測定系統(tǒng)（SCIREQ，Canada，型號：flexlVent FX），由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 動物分組采用Excel表隨機(jī)數(shù)字分組法。造模采用卵蛋白與氫氧化鋁混合液致敏大鼠后再行卵蛋白激發(fā)，并結(jié)合百日咳桿菌注射的方法。根據(jù)注射部位、致敏藥物及藥量、霧化天數(shù)及藥量的不同，造模過程共分為2次實(shí)驗(yàn)，具體分組及操作方法見表1、表2。

1.2.2 取材與標(biāo)本制備 各組大鼠最后1次霧化激發(fā)后用戊巴比妥鈉按50 mg/kg體質(zhì)量劑量麻醉。迅速打開胸腔，迅速分離出右肺上、中、下葉。其中，右肺中葉置于新鮮配制的中性4%多聚甲醛固定液中放置72 h（室溫）后，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度4 μm，常規(guī)蘇木素-伊紅（HE）染色。

1.2.3 模型評價(jià)指標(biāo)

1.2.3.1 大鼠一般情況 記錄大鼠是否出現(xiàn)煩躁、搔鼻、呼吸加快、口唇發(fā)紺、腹肌痙攣、點(diǎn)頭呼吸及四肢癱軟等表現(xiàn)。

1.2.3.2 肺組織病理變化 觀察造模后肺組織病理切片HE染色是否表現(xiàn)為氣道大量炎性細(xì)胞浸潤，支氣管黏膜上皮腫脹、成片脫落、黏膜腺體細(xì)胞（杯狀細(xì)胞）增生，部分肺泡間隔增厚，支氣管痙攣等。

1.2.3.3 肺功能檢測方法及評價(jià)指標(biāo) 末次霧化激發(fā)24 h后以10%水合氯醛（10 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，喉鏡行氣管插管，確認(rèn)插管成功后（與喉鏡配套使用的手持鏡片，插管成功后鏡片上大鼠呼出氣體清晰可見）將其與肺功能儀固定，進(jìn)行肺功能測定。相關(guān)參數(shù)設(shè)定為：強(qiáng)力呼吸頻率120次/min，深呼吸頻率30次/min。所測得的指標(biāo)：IC（深吸氣量），Crs（動態(tài)順應(yīng)性），Rn（中心氣道阻力），G（組織阻尼），H（組織遲滯），I（氣道高反應(yīng)性），Cst（靜態(tài)順應(yīng)性）。觀察造模后大鼠肺功能檢測是否表現(xiàn)為氣道阻力增加、氣道高反應(yīng)性等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。若符合正態(tài)分布和方差齊性，則采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或方差分析;若不符合正態(tài)分布或方差不齊，則進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況 1）2次造模實(shí)驗(yàn)中，正常組大鼠均表現(xiàn)為精神活潑，反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)，皮毛光潔，未出現(xiàn)呼吸急促、困難或喘鳴音等癥狀。其余造模組大鼠均不同程度出現(xiàn)精神萎靡、拱背蜷縮等表現(xiàn)。2）OVA+百日咳腹腔注射組和OVA+百日咳五點(diǎn)注射組大鼠出現(xiàn)躁動不安、搔抓顏面皮毛等過敏癥狀，繼而俯伏不動，出現(xiàn)呼吸急促，呼吸困難伴輕度紫鉗，部分大鼠可聞及響亮的呼氣相哮鳴音，口鼻流出黏液，可出現(xiàn)呼吸不規(guī)則、排尿排便增多等癥狀。反復(fù)激發(fā)后大鼠消瘦、咳嗽喘息、毛色黃澀失去光澤且時有脫落，嚴(yán)重者精神不振、反應(yīng)遲鈍、四肢癱軟，2組中以后者癥狀更加明顯。3）OVA腹腔注射組2大鼠僅表現(xiàn)為精神萎靡、拱背蜷縮，未觀察到明顯的哮喘癥狀。OVA腹腔注射組1部分大鼠出現(xiàn)打噴嚏、焦躁不安、撓鼻、呼吸急促、腹肌痙攣等肉眼可見癥狀，但哮喘程度明顯弱于OVA+百日咳復(fù)合注射組。

2.2 肺組織HE染色結(jié)果 1）正常組大鼠肺組織HE染色結(jié)果未見炎性細(xì)胞浸潤，肺泡擴(kuò)張良好、支氣管黏膜和管壁厚度正常，且肺泡、支氣管黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整清晰，支氣管無痙攣。2）OVA+百日咳五點(diǎn)注射組大鼠可見肺組織內(nèi)有不規(guī)則暗紅色充血區(qū)，支氣管和血管平滑肌輕度增生，在大中氣道和血管周圍伴有大量紅染的嗜酸性粒細(xì)胞及紫藍(lán)色簇狀淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤，管腔狹窄，管壁明顯增厚，支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列紊亂、成片脫落，杯狀細(xì)胞增生明顯，支氣管內(nèi)有大量黏液栓生成，支氣管痙攣，巨噬細(xì)胞增多等典型BA病理表現(xiàn)。3）其余3個造模組可見肺組織炎性細(xì)胞浸潤，支氣管黏膜上皮細(xì)胞排列紊亂、成片脫落，肺泡間隔增厚，支氣管痙攣，巨噬細(xì)胞增多等病理表現(xiàn)，但病理損害輕重程度不同，且均較OVA+百日咳五點(diǎn)注射組程度輕。其中，OVA腹腔注射組2大鼠支氣管管腔基本正常，上皮輕度增生，管腔未見明顯狹窄，管壁炎性反應(yīng)較輕，少數(shù)支氣管周圍有淋巴細(xì)胞侵潤灶，支氣管和血管平滑肌輕度增生，杯狀細(xì)胞較少;OVA腹腔注射組1和OVA+百日咳腹腔注射組肺組織哮喘病理程度較上述2組稍重，主要表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞浸潤和杯狀細(xì)胞較多。見圖1。

2.3 大鼠肺功能檢測結(jié)果 肺功能結(jié)果顯示：同正常組比較，OVA腹腔注射組1大鼠I（氣道高反應(yīng)性）和Rn（中心氣道阻力）升高，G（組織阻尼）和H（組織遲滯）降低;OVA腹腔注射組2大鼠I值和Rn值降低，G值和H值升高，說明單純OVA腹腔注射造模方法后，大鼠的氣道高反應(yīng)性指標(biāo)和阻力指標(biāo)出現(xiàn)升降不同的變化，不能完全符合哮喘病變特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)2中疊加了百日咳后的腹腔注射組和五點(diǎn)注射組大鼠的I值和Rn值均較單純OVA腹腔注射組升高，五點(diǎn)注射組大鼠的氣道高反應(yīng)性升高更加明顯（P<0.01）;同時，這2個組大鼠的IC（深吸氣量）和Cst（靜態(tài)順應(yīng)性）較OVA腹腔注射組有不同程度的降低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1、表2。

圖1 SD大鼠肺組織病理組織學(xué)結(jié)果（HE染色，×20） 注：正常組;B：OVA腹腔注射組2;C：OVA腹腔注射組1;D：OVA+百日咳腹腔注射組;E：OVA+百日咳五點(diǎn)注射組;標(biāo)尺=200 μm

3 討論

目前，大多數(shù)BA動物模型復(fù)制的是“經(jīng)典”的Th2哮喘表型，這些模型的特征是具有高水平的特異性抗原IgE，以嗜酸粒細(xì)胞為主的呼吸道炎性反應(yīng)，Th2細(xì)胞因子包括IL-4、IL-5和IL-13[6]。用于哮喘研究的動物模型主要有小鼠、大鼠、豚鼠，體積較大的動物如貓、兔、羊、犬及靈長類動物。不同種類的造模動物各具優(yōu)缺點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)用大鼠品系純、來源廣、易飼養(yǎng)，相關(guān)生物學(xué)試劑易獲得，標(biāo)本采集量較小鼠充足，對抗原反應(yīng)較為一致，可在麻醉?xiàng)l件下進(jìn)行氣道高反應(yīng)性檢測及評價(jià)，能出現(xiàn)與人類哮喘類似的遲發(fā)相哮喘反應(yīng)且反應(yīng)出現(xiàn)的時間與哮喘患者接近，有氣道反應(yīng)性增加和嗜酸粒細(xì)胞浸潤等優(yōu)點(diǎn)，因而成為近年來研究的熱點(diǎn)，我國主要使用SD和Wistar大鼠[10-13]。

OVA是最早的并且是目前建立BA動物模型中使用最廣泛的致敏原，分為單純OVA和復(fù)合OVA（含佐劑，主要是氫氧化鋁）2種。最為經(jīng)典的模型為給予豚鼠腹腔注射10%OVA致敏14 d后再以1%OVA霧化吸入激發(fā)，霧化過程中持續(xù)至豚鼠出現(xiàn)煩躁不安、呼吸急促、腹肌抽搐、大小便失禁等BA癥狀為止，1次/d，共7 d。以往研究顯示，按照上述經(jīng)典方法造模，模型動物肺組織病理觀察可見細(xì)支氣管及周圍炎性細(xì)胞浸潤明顯，管腔中炎性細(xì)胞及黏液增多，管腔變小[14-15]。本研究中，OVA腹腔注射1、2組均為參考經(jīng)典方法進(jìn)行SD大鼠造模，2組的區(qū)別在于霧化激發(fā)的開始時間、霧化天數(shù)及霧化液濃霧的不同。OVA腹腔注射組2大鼠經(jīng)造模后氣管管腔基本未見狹窄，炎性細(xì)胞浸潤程度較輕，與以往研究結(jié)果不完全相符合。OVA腹腔注射組1大鼠造模后病理變化較組2加重，表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞浸潤明顯增多、杯狀細(xì)胞增多，肺功能的結(jié)果也顯示，OVA腹腔注射組1大鼠的氣道高反應(yīng)性和中心氣道阻力升高，但這種造模方法霧化OVA濃度加倍，實(shí)驗(yàn)過程中更容易造成動物的死亡，且霧化時間共計(jì)21 d，加重實(shí)驗(yàn)負(fù)擔(dān)。

佐劑作為免疫增強(qiáng)劑，常與抗原物質(zhì)一起注射或預(yù)先注人機(jī)體后，影響機(jī)體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，使機(jī)體更早、更有效、更持久地產(chǎn)生免疫應(yīng)答。具有免疫原性的佐劑有百日咳桿菌、結(jié)核分枝桿菌和枯草桿菌等;非免疫原性佐劑有氫氧化鋁、液態(tài)鋁、硫酸鋁鉀和明礬等。多數(shù)文獻(xiàn)中采用的氫氧化鋁作為OVA致敏哮喘模型佐劑的方法，常因兩者的混合度差而影響致敏的效果[16]。哮喘病因復(fù)雜、發(fā)病機(jī)制涉及多種細(xì)胞和細(xì)胞組分的參與，必須根據(jù)研究的需要選擇合適的哮喘動物模型，經(jīng)典的卵蛋白激發(fā)哮喘模型不是適用于所有情況，必要時要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行改進(jìn)或創(chuàng)立新的哮喘模型。其實(shí)驗(yàn)中采用了卵蛋白、氫氧化鋁及滅活的百日咳桿菌混合為造模液，同時提高霧化液的濃度，結(jié)果顯示成功復(fù)制了BA大鼠模型[17]。采用3種不同的方法進(jìn)行哮喘模型的建立研究顯示，OVA+百日咳桿菌共同致敏和OVA單獨(dú)致敏均可以顯著增加大鼠BALF中的白細(xì)胞數(shù)量，同時可增加嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的數(shù)量，而百日咳單獨(dú)致敏僅僅嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量有影響，且增加作用不明顯，可知OVA致敏在哮喘模型復(fù)制中仍起關(guān)鍵作用[18]。本次實(shí)驗(yàn)研究中，OVA+百日咳腹腔注射組肺組織病理程度與OVA腹腔注射組1類似，較OVA腹腔注射組2稍重，主要表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞浸潤和杯狀細(xì)胞較多，但并未顯著的提高造模的成功率。

綜合目前國內(nèi)BA動物模型的研究情況，模型制備的影響因素主要包括：實(shí)驗(yàn)動物種類、品系、性別、體質(zhì)量、年齡差別;霧化液成分雖有不同，但仍以卵蛋白激發(fā)最為常用;多數(shù)造模過程中均加用致敏佐劑氫氧化鋁和滅活百日咳桿菌;致敏液的濃度以10%的卵蛋白1 mL或100 g/L卵蛋白1 mL居多;激發(fā)的方式一般分為霧化激發(fā)或滴鼻激發(fā);激發(fā)頻率的差異較大，如激發(fā)2次/d、每天激發(fā)、隔天激發(fā)、1周激發(fā)1次等;每次激發(fā)時間為20 s至1 h不等;激發(fā)的總時長為1～6周不等，慢性哮喘模型制備連續(xù)激發(fā)12周[19]。有學(xué)者采用組胺激發(fā)對SD大鼠進(jìn)行篩選建立哮喘急性和慢性模型，在大鼠最后1次激發(fā)后5 h，背部皮內(nèi)多點(diǎn)注射OVA生理鹽水溶液。被動皮膚過敏反應(yīng)結(jié)果顯示，模型組皮膚藍(lán)斑面積較正常對照組顯著增大，慢性模型組皮膚藍(lán)斑面積明顯大于急性模型組。說明多點(diǎn)注射、反復(fù)激發(fā)的方法可能使模型處于更嚴(yán)重的致敏狀態(tài)[20]。在本次研究中，OVA+百日咳五點(diǎn)注射組大鼠在本次實(shí)驗(yàn)中呼吸急促、輕度發(fā)紺及咳嗽喘息最為明顯，病理染色結(jié)果顯示嗜酸性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤程度最重，可見明顯的支氣管管腔狹窄、管壁增厚和大量黏液栓生成等典型的哮喘病理表現(xiàn)，同時肺功能檢測中氣道高反應(yīng)性升高也更加明顯。

綜上所述，OVA結(jié)合滅活百日咳桿菌共同致敏較單獨(dú)使用OVA致敏效果突出，多點(diǎn)皮下注射聯(lián)合腹腔注射的造模成功率高于單純腹腔注射，同時適當(dāng)提高霧化激發(fā)液的濃度可以加重模型大鼠的肺病理損傷程度。

參考文獻(xiàn)

[1]中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組.支氣管哮喘防治指南（2016年版）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2016，39（9）：675-697.

[2]嚴(yán)峻，蔡永遼，陳永謙，等.肺功能檢查在老年支氣管哮喘診斷中的意義[J].臨床肺科雜志，2013，18（11）：1973-1974.

[3]楊世剛.老年支氣管哮喘臨床特點(diǎn)及治療效果觀察[J].中國傷殘醫(yī)學(xué)，2013，21（9）：234-235.

[4]常愛玲.全球約3億人患有哮喘病[J].首都醫(yī)藥，2004，11（5）：25.

[5]Karol MH.Animal models of occupational asthma[J].Eur Respir J，1994，7（3）：555-568.

[6]呂洪臻，黃誠.支氣管哮喘動物模型的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2012，18（19）：3216-3220.

[7]李新辰，張妍迪，白根本，等.高濃度臭氧暴露法建立大鼠哮喘模型[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2014，14（1）：23-25，封4.

[8]陳馨馨，李友林.仙味保金方治療過敏性支氣管哮喘模型家兔的血清代謝組學(xué)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（2）：579-581.

[9]張亞娟，王亞楠，丁亞駿，等.卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2012，21（3）：268-270.

[10]Waserman S，Olivenstein R，Renzi P，et al.The relationship between late asthmatic responses and antigen-specific immunoglobulin[J].J Allergy Clin Immunol，1992，90（4 Pt 1）：661-669.

[11]施煥中.正確認(rèn)識和合理應(yīng)用支氣管哮喘的動物模型[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2005，28（11）：749-750.

[12]Bellofiore S，Martin J G.Antigen Challenge of Sensitized Rats Increases Airway Respo-nsiveness to Methacholine[J].J Appl Physiol，1988，65：1642-1646.

[13]Ceyhan B B，Sungur M，Celikel C A，et al.Effect of Inhaled Cyclosporine on the Rat Airway：Histologic and Bronchoalveolar Lavage Assessment[J].Respiration，1998，65：71-78.

[14]李國豪，徐邦牢，雷秀霞，等.壁虎粉對哮喘豚鼠模型干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2007，7（2）：143-144，168.

[15]何會霞，李自紅.支氣管哮喘實(shí)驗(yàn)動物模型的研究進(jìn)展[J].中國老年學(xué)雜志，2008，28（20）：2074-2076.

[16]劉佳，鄭健，于濤.小鼠過敏性哮喘模型的研究進(jìn)展及評價(jià)[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2011，21（2）：65-68.

[17]劉貴穎，張慧琪，朱振剛，等.卵清蛋白致敏大鼠支氣管哮喘模型的制備[J].臨床肺科雜志，2013，18（7）：1167-1169.

[18]王雅娟.3種大鼠哮喘模型的比較[C].中醫(yī)藥理論與應(yīng)用研究——安徽中醫(yī)藥繼承與創(chuàng)新博士科技論壇論文集，2008：464-467.

[19]錢振福，崔芳囡.國內(nèi)支氣管哮喘氣道重塑動物模型的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2009，15（1）：14-18.

[20]劉中成，張艷芬.一種大鼠慢性哮喘模型的建立與評價(jià)[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（6）：718-723.

（2018-11-06收稿 責(zé)任編輯：芮莉莉）

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81403377）;北京市科學(xué)技術(shù)委員會“十病十藥”研發(fā)項(xiàng)目（Z161100001816004）作者簡介：史琦（1983.09—），女，博士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥防治肺系及過敏性疾病的臨床及基礎(chǔ)研究，E-mail：shiqi19830910@163.com通信作者：李友林（1961.07—），男，碩士研究生，主任醫(yī)師，中日友好醫(yī)院中醫(yī)肺病二部主任，國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室（肺病慢性咳喘）主任，中醫(yī)藥防治過敏性疾病北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任，研究方向：中醫(yī)藥防治肺系及過敏性疾病的臨床及基礎(chǔ)研究，Tel：（010）84206023，E-mail：lyl19610721@163.com