胡恒龍 胡祖余

摘要：通過對臨床分離的32株禽多殺性巴氏桿菌的藥敏試驗，了解本地多殺性巴氏桿菌的耐藥情況，為臨床治療提供技術(shù)指導。結(jié)果表明，六安市多殺性巴氏桿菌對林可霉素、復方新諾明、強力霉素和青霉素呈現(xiàn)較高的耐藥性。

關鍵詞：禽多殺性巴氏桿菌;耐藥性;調(diào)查

中圖分類號：S852.61

文獻標識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.201 9.10.010

0 引言

禽多殺性巴氏桿菌又名禽霍亂、禽出血性敗血癥，是一種侵害家禽和野禽的接觸性傳染病[1]。本病一年四季均可發(fā)生，家禽以7-10月為發(fā)病的高峰時段，呈散發(fā)或地方流行性[2]。由于本病發(fā)病急，死亡速度快，常給家禽養(yǎng)殖帶來較大損失。本病的控制以抗生素治療為主要手段。近年，由于抗生素的大量不合理使用，細菌的耐藥情況越來越嚴重[3]。為了解六安市禽多殺性巴氏桿菌抗生素耐藥情況，防控本病提供技術(shù)支持，對分離自六安市養(yǎng)禽戶發(fā)病家禽的32株多殺性巴氏桿菌進行藥敏試驗，為臨床用藥提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1. 1菌株來源

32株多殺性巴氏桿菌分離白于六安市部分養(yǎng)禽戶，臨床以發(fā)病急、死亡快為特征，解剖可見心冠脂肪出血、肝臟腫大質(zhì)地變脆、肝表面有白色針尖樣白色壞死點等特征性病變。

1.1.2 試劑

水解酪蛋白（ MH）瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、細菌微量生化管購白杭州天和微生物試劑有限公司;血瓊脂培養(yǎng)基由杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)的血瓊脂作基礎，加入采集的無菌綿羊血液配制而成;青霉素、頭孢噻肟、阿莫西林、氟苯尼考、恩諾沙星、新霉素、林可霉素、多西環(huán)素、復方新諾明等9種臨床常用藥物藥敏紙片購白杭州微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離培養(yǎng)與鑒定

以無菌方法將臨床接診的病死動物肝臟、心血，接種于血瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)18 - 24 h;挑取疑似菌株轉(zhuǎn)接于麥康凱瓊脂，37℃恒溫再培養(yǎng)18 - 24 h，觀察細菌生長情況;將符合多殺性巴氏桿菌培養(yǎng)特征的菌株分離純化，進行生化鑒定。同時，挑選單個菌落，涂片進行革蘭氏染色和美藍染色，以觀察細菌形態(tài)和染色特征。

1.2.2 藥敏試驗

采用WHO推薦的Kirby-B auer紙片瓊脂擴散法進行：取經(jīng)生化鑒定陽性菌株，用滅菌生理鹽水稀釋為0.5比濁單位，用無菌棉拭子均勻涂布在水解酪蛋白瓊脂上，稍干后，放置藥敏試紙（90 mm直徑培養(yǎng)皿，每皿9種藥敏紙片），37℃恒溫培養(yǎng)24 h后，測定抑菌圈大小。以藥敏紙說明書判定細菌敏感、中介和耐藥。

2 結(jié)果

2.1 細菌培養(yǎng)特性

細菌在血瓊脂培養(yǎng)基上生長旺盛，為成片遷延生長，呈表面光滑、濕潤、半透明、奶酪狀;在MH瓊脂上，經(jīng)分區(qū)劃線后，單個菌落為奶油狀、半透明、灰白色。在麥康凱瓊脂平板上，未見細菌生長。

2.2 染色鏡檢

細菌經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢，為革蘭氏陰性、球狀短桿菌;經(jīng)美藍染色后鏡檢，視野著色較淡，細菌呈小球狀成對排列。

2.3 生化鑒定

被檢測細菌分解葡萄糖、果糖、麥芽糖，觸媒、氧化酶陽性，吲哚試驗陽性，尿素酶、鳥氨酸、賴氨酸、VP試驗為陰性，符合多殺性巴氏桿菌生物學特性[4]。鑒定的32株多殺性巴氏桿菌中，雞源15株、鴨源6株、鵝源11株。

2.4 藥敏試驗

分離菌對臨床常用的9種抗生素藥敏結(jié)果，見表1。從表中可知，所有菌株對頭孢噻肟、阿莫西林、恩諾沙星、氟苯尼考和新霉素表現(xiàn)較高的敏感性，敏感率分別為93.75%（ 30/32）、84.38%（ 27/32）、62.55%（ 20/32）、59.38%（ 19/32）、56.25%（ 18/32），而對林可霉素、復方新諾明、強力霉素和青霉素呈現(xiàn)較高的耐藥性，耐藥率分別為78.13%（ 25/32）、62.5%（ 20/32）、53. 13%（ 17/32）、34.38%（ 11/32）.

3 討論與結(jié)論

從本次調(diào)查分析，六安市禽源多殺性巴氏桿菌對抗生素存在一定程度的耐藥情況，但對一些臨床常用的藥物如頭孢噻肟、阿莫西林、恩諾沙星、氟苯尼考等的敏感性還處在較高水平，與一些文獻報道的耐藥程度嚴重性還有一定距離，這表明細菌的耐藥性存在顯著的地區(qū)差異，與當?shù)氐挠盟幜晳T有關，也提示獸醫(yī)工作者應引導養(yǎng)殖戶科學合理用藥，盡可能通過藥敏試驗篩選敏感藥物。同時，在治療中，注意療程、劑量和輪換用藥，并加強飼養(yǎng)管理和環(huán)境消毒，防止疫病反復發(fā)作，防止細菌耐藥性的產(chǎn)生。

本次調(diào)查的32株多殺性巴氏桿菌，為在臨床接診中分離保存的。在初次分離時，如果培養(yǎng)基為血瓊脂等營養(yǎng)較高的培養(yǎng)基，細菌通常在平板上呈成片融合生長，很難觀察到單個菌落，這可能是由于接診病例多為急性死亡家禽，體內(nèi)有大量細菌，因此生長旺盛。另外，在禽霍亂病例診治中，部分病例有反復發(fā)作的情況出現(xiàn)，即用藥病好、停藥又死亡，與飼養(yǎng)管理差、環(huán)境消毒不嚴有關。因此在治療同時也要加強飼養(yǎng)管理，提高家禽免疫力，嚴格環(huán)境消毒，以減少該病對養(yǎng)禽業(yè)造成的損失。

參考文獻

[l]Y.M.Saif禽病學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：871-886

[2]耿新.雞巴氏桿菌病的診治[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2014，30（ ll）：187.

[3]陳紅梅，程龍飛，鄧輝，等.禽源多殺性巴氏桿菌耐藥性分析及氟苯尼考耐藥基因fLoR分布[J].畜牧與獸醫(yī)，2019，51（3）：93-96.

[4]王建兵，王風葉.禽巴氏桿菌病病原的分離與鑒定[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2015，34（1）：90-91

作者簡介：胡恒龍（1973-），男，安徽六安人，大專，獸醫(yī)師，從事動物疫病預防與控制、動物衛(wèi)生監(jiān)督、畜產(chǎn)品質(zhì)量安全管理等工作。7F586183-5F75-4EE6-BBB1-B668EEBBF221