韋林洪, 張 軍, 劉 俊

(揚(yáng)州職業(yè)大學(xué), 江蘇 揚(yáng)州 225009)

氯霉素滴眼液主要用來(lái)治療由大腸桿菌、流感嗜血桿菌、克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等敏感細(xì)菌引起沙眼、結(jié)膜炎、眼瞼緣炎、角膜炎等。其主要成分為氯霉素,輔料為硼酸、硼砂、醋酸苯汞、注射用水等,其含量測(cè)定的主要方法有微生物檢定法[1]、紫外分光光度法[2]、高效液相色譜法[3-4]等。微生物檢定法的測(cè)定原理與臨床應(yīng)用的要求一致,利用氯霉素能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的特點(diǎn)來(lái)進(jìn)行含量測(cè)定,具有靈敏度高、樣品用量少、測(cè)定結(jié)果直觀等優(yōu)點(diǎn),但存在操作繁瑣、測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)、對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的操作技能要求較高、實(shí)驗(yàn)誤差大等缺點(diǎn)，限制了其應(yīng)用[5]。2010版和2015版《中國(guó)藥典》均采用高效液相色譜法測(cè)定其含量,在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合要求后,采用梯度洗脫法測(cè)定樣品中氯霉素的含量,該法分離效果好、準(zhǔn)確度高,但實(shí)驗(yàn)操作繁瑣,需要熟練的操作人員,且難以滿(mǎn)足醫(yī)院和藥廠(chǎng)快速測(cè)定其含量的需要。文獻(xiàn)報(bào)道的紫外分光光度法未進(jìn)行方法學(xué)考察,本文采用紫外分光光度法測(cè)定氯霉素滴眼液的含量,并對(duì)分析方法的準(zhǔn)確度、精密度和專(zhuān)屬性等質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行考察。

1 儀器、試劑和溶液的制備

1.1 主要儀器

T6紫外分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;AR2140電子天平,上海梅特勒公司。

1.2 主要試劑

氯霉素對(duì)照品(批號(hào)17010720,純度≥98.0%),江蘇綠葉生物科技有限公司;氯霉素滴眼液(8mL∶20mg,批號(hào)20171101、20171104、20171108),長(zhǎng)春迪瑞制藥有限公司;95%乙醇、硼酸、硼砂、醋酸苯汞、庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀、三乙胺、磷酸(以上均為分析純),國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;純化水,Milli-Q凈化系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司)。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

用分析天平精確稱(chēng)取于105℃干燥至恒重的氯霉素對(duì)照品0.2502g,置于100mL容量瓶中,加入95%乙醇10mL,振搖使其完全溶解,然后用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻,得到濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對(duì)照品溶液,備用。

1.3.2 供試品溶液的制備

準(zhǔn)確吸取氯霉素滴眼液0.5mL于100mL的容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻,得到供試品溶液,備用。

1.3.3 空白輔料溶液的制備

根據(jù)氯霉素滴眼液處方規(guī)定,分別稱(chēng)取7.5g硼酸、1.5g硼砂和0.01g醋酸苯汞于1000mL容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻。精密量取0.5mL置于100mL的容量瓶中,用純化水定容,搖勻,得到空白輔料溶液,備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取0.6mL濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對(duì)照品溶液和0.5mL氯霉素滴眼液分別置于100mL的容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻。以純化水為空白,分別將氯霉素對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,氯霉素對(duì)照品溶液和供試品溶液在278nm處有最大吸收,而空白輔料溶液在該波長(zhǎng)處的吸光度趨于零,因此,選擇278nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)繪

精密量取濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL分別置于100mL容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻,得到濃度分別為2.5、5、10、15、20μg·mL-1的系列對(duì)照品溶液。以純化水為空白,在278nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以氯霉素對(duì)照品溶液濃度C(μg·mL-1)為橫坐標(biāo),以吸光度A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),見(jiàn)圖1。

圖1 氯霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

氯霉素濃度在2.5～20μg·mL-1與吸光度線(xiàn)性關(guān)系良好,符合朗伯-比爾定律。其線(xiàn)性回歸方程為A=0.03108C+0.05051,相關(guān)系數(shù)為0.9996。

2.3 供試品的含量測(cè)定

取3批供試品,分別按1.3.2的方法制備供試品溶液。以純化水為空白,在278nm處分別測(cè)定供試品溶液的吸光度,重復(fù)3次。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中氯霉素的含量,按下列公式計(jì)算氯霉素滴眼液標(biāo)示量的百分含量,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

式中：C供為供試品溶液的濃度,μg·mL-1;100為供試品定容體積,mL;S為標(biāo)示量,8mL∶20mg;0.5為供試品取樣量,mL;1000為濃度換算系數(shù)。

2.4 加樣回收率測(cè)定

在200mL容量瓶中分別加入0.5mL氯霉素滴眼液,然后分別加入濃度為2.502mg·mL-1的氯霉素對(duì)照品溶液0.4、0.5、0.6mL(每個(gè)添加水平重復(fù)3次),用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻。以純化水為空白,在278nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,計(jì)算加樣回收率。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 氯霉素滴眼液的含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

表2 加樣回收率(n=3)

由表2可知:加樣回收率在98.0%～101.0%范圍內(nèi),表明該方法的準(zhǔn)確度好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

在100mL容量瓶中分別加入0.4、0.5、0.6mL氯霉素滴眼液,用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻,得到濃度分別為10、12.5、15μg·mL-1的樣品溶液。以純化水為空白,分別在278nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,考察方法的精密度。每個(gè)濃度重復(fù)3次,試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知:該方法的重復(fù)性在可接受范圍內(nèi),精密度符合要求。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取0.6mL氯霉素滴眼液置于100mL容量瓶中,用純化水稀釋至刻度線(xiàn),搖勻,在室溫下放置0、1、2、3、4、5、6h后,以純化水為空白,分別在278nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,吸光度為0.526±0.05,該結(jié)果表明供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定性好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

3 結(jié)論

本文采用紫外分光光度法測(cè)定氯霉素滴眼液的含量并考察了分析方法的準(zhǔn)確度、精密度、專(zhuān)屬性和穩(wěn)定性等質(zhì)量指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明:采用紫外分光光度法測(cè)定氯霉素滴眼液的含量具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,該法操作簡(jiǎn)單、快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)、分析成本低。