方偉禎 古文深 房綺梅 曾無(wú)藝 丁睿 段朝暉★

目前全世界約有1.85 億人感染丙型肝炎病毒，且每年新增丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染者約35 萬(wàn)［1］，丙型肝炎呈全球性流行，不同性別、年齡、種族人群均對(duì)HCV 易感，主要經(jīng)血液傳播，也可經(jīng)破損的皮膚和黏膜傳播［2］，但是目前卻尚未研制出能夠預(yù)防丙肝感染的疫苗，因此，對(duì)丙肝進(jìn)行早期準(zhǔn)確診斷、合理治療和療效監(jiān)測(cè)具有重要的臨床意義。目前認(rèn)為HCV RNA 定量檢測(cè)是診斷HCV 感染的金標(biāo)準(zhǔn)［3］，一般人在感染HCV 1～2 周，血清中即可檢測(cè)到HCV RNA，反映病毒的復(fù)制與傳染性［4］。外周血中HCV 核心抗原（HCV-cAg）是HCV 病毒顆粒的結(jié)構(gòu)蛋白，在各亞型HCV 病毒中高度保守，血清中的HCV-cAg 非常穩(wěn)定，可以在室溫條件下穩(wěn)定存在7 d［5］，根據(jù)國(guó)內(nèi)外近十幾年的許多研究報(bào)道顯示［6］，HCV-cAg 的靈敏度與HCV RNA 接近，且價(jià)格趨于便宜，因此其應(yīng)用越來越受到重視。

超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）是體內(nèi)消除超氧陰離子自由基對(duì)細(xì)胞損害的一種非常重要的抗氧化酶，具有保護(hù)機(jī)體細(xì)胞免受損傷的作用［7］。近年來的研究表明［8］，游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）可導(dǎo)致肝細(xì)胞線粒體腫脹和通透性增加、肝細(xì)胞變性、壞死和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，極低濃度的FFA 即可對(duì)肝臟造成損傷，還可誘發(fā)肝纖維化。而SOD 與FFA 水平在丙肝患者中變化的相關(guān)研究卻不多。為此，本研究檢測(cè)在不同HCV RNA 載量組中SOD 和FFA 的水平，探討檢測(cè)SOD 和FFA 在HCV 病情進(jìn)展評(píng)估中的意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院2015年1月至2019年2月收治的HCV RNA 定量檢測(cè)陽(yáng)性的105例丙肝患者為研究對(duì)象，其中男72 例，女33 例，平均年齡（56.42±13.5）歲，丙肝診斷參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)會(huì)、傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)《丙型肝炎防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，排除肝硬化，肝細(xì)胞癌患者，除丙型外其他類型肝炎患者與心功能嚴(yán)重不全者。所收集的病例均為首次感染丙肝的患者，并為治療前的血清標(biāo)本，標(biāo)本離心后立即檢測(cè)，若不能立即進(jìn)行檢測(cè)應(yīng)放在-20℃環(huán)境下保存。將HCV RNA 拷貝數(shù)檢測(cè)為陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行分組，其中拷貝數(shù)1.0×103～1.0×105的為低載量組（n=22），拷貝數(shù)1.0×105～1.0×106的為中載量組（n=34），拷貝數(shù)≥1.0×106的為高載量組（n=49）。

1.2 主要試劑

HCV-RNA 采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒核酸檢測(cè)試劑盒；HCVcAg 檢測(cè)采用山東萊博生物科技有限公司生產(chǎn)的HCV-cAg 診斷試劑盒；SOD 檢測(cè)采用福建福緣生物科技有限公司的超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)試劑盒；FFA 檢測(cè)采用積水醫(yī)療科技（中國(guó)）有限公司的血清游離脂肪酸檢測(cè)試劑盒。

1.3 主要儀器

美國(guó)ABI ViiATM7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀；上海賽默飛世爾MK3 酶標(biāo)儀；美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特AU5800 生化分析儀。

1.4 方法

HCV RNA 檢測(cè)采用PCR-熒光探針法；HCVcAg 檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫法；SOD 檢測(cè)采用鄰苯三酚比色法；FFA 檢測(cè)采用酶法測(cè)定。所有標(biāo)本檢測(cè)都嚴(yán)格參照說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料采用（）表示，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV RNA 各載量組與HCV-cAg 陽(yáng)性率的結(jié)果比較

105 例標(biāo)本中，HCV RNA低載量組中1例HCV-cAg 陽(yáng)性，中載量組3 例陽(yáng)性，高載量組23 例陽(yáng)性，隨著患者體內(nèi)HCV RNA 載量的升高，HCVcAg 陽(yáng)性率也隨之升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩者呈正相關(guān)，見表1。

表1 HCV RNA 各載量組與HCV-cAg 陽(yáng)性率的結(jié)果比較［n（%）］Table 1 Comparison of HCV RNA group and HCV-cAg positive rate［n（%）］

2.2 HCV RNA 各載量組與SOD、FFA 水平的結(jié)果比較

105 例標(biāo)本中，HCV RNA 載量不同組間SOD和FFA 水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），隨著患者體內(nèi)HCV RNA 載量的升高，SOD 水平逐漸降低，兩者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系；低、中載量FFA 水平組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而均與高載量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 HCV RNA 各載量組與SOD、FFA 水平的結(jié)果比較Table 2 Comparison of HCV RNA group and result of SOD and FFA test

3 討論

丙型肝炎在人群中的感染率逐年增高，其中50%～85%的丙型肝炎為慢性病型肝炎，又有10%～15%的患者可發(fā)展為肝硬化，進(jìn)而增加了肝癌的發(fā)生率，死亡人數(shù)也成倍增長(zhǎng)［9］。丙肝已經(jīng)成為堪比艾滋病的嚴(yán)重社會(huì)與公共衛(wèi)生問題，因此丙型肝炎的早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療顯得尤為重要。

目前臨床上丙型肝炎的檢測(cè)手段主要是HCV RNA 以及抗HCV 的檢測(cè)。雖然HCV RNA是丙型肝炎患者臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但也存在一定的不足與缺陷［10］。HCV RNA 的前處理過程復(fù)雜性較高，易出現(xiàn)HCV RNA 污染、滅活等現(xiàn)象，造成結(jié)果錯(cuò)誤［11］，同時(shí)也不能確切反映患者肝臟的病理改變。HCV-Ab 不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，且出現(xiàn)較慢，根據(jù)劉瀟，陳佳琦等試驗(yàn)表明［3］，HCV-Ab 陽(yáng)性組中丙型肝炎感染率為25% ，可見單純檢測(cè)HCV-Ab 在臨床丙型肝炎感染篩查中特異性不高，容易造成漏檢。

許多研究顯示，HCV-cAg 與HCV 感染的早期診斷密切相關(guān)，HCV-cAg 在患者感染HCV 后14～70 d 即可出現(xiàn)，其出現(xiàn)的時(shí)間僅比HCV RNA 晚約1 d［4］。本研究結(jié)果顯示，HCV RNA 載量不同組間HCV-cAg 陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），隨著HCV RNA 載量的增加，HCV-cAg 陽(yáng)性率也逐漸升高，兩者呈正相關(guān)關(guān)系。在HCV RNA低載量組中，HCV-cAg 陽(yáng)性檢出率較低，僅為4.5%，分析其原因可能是因?yàn)樵贖CV 感染早期，HCV-cAg 濃度較低，未到達(dá)酶學(xué)檢測(cè)下限或標(biāo)本中的HCV-Ab 和用于核心抗原檢測(cè)的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原而造成HCV-cAg 假陰性。上述結(jié)果表明丙型肝炎患者外周血中HCV-cAg 與HCV RNA 有良好的相關(guān)性，是理想的HCV 感染標(biāo)志物。

研究表明［12］，自由基及其誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化物是導(dǎo)致組織損傷的重要原因。肝病患者均存在嚴(yán)重的脂質(zhì)氧化過損傷，SOD 活性下降，其活性大小可以間接反映體內(nèi)自由基的數(shù)量。本研究結(jié)果顯示，HCV RNA 載量不同組間SOD 水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示在肝功能損傷時(shí)，氧自由基增多，SOD 水平逐漸降低，且隨著病情的加重其SOD 值更低，兩者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。上述結(jié)果表明，SOD 的變化不僅可作為判斷丙型肝炎的病變程度，而且對(duì)估計(jì)病情具有重要的臨床價(jià)值。提高SOD 活性，有可能減輕或改善丙型病毒性肝炎的損傷程度。

當(dāng)患者感染HCV 時(shí)，HCV 病毒在肝臟中進(jìn)行大量復(fù)制，不僅激活了機(jī)體正常的免疫系統(tǒng)對(duì)病毒進(jìn)行清除，同時(shí)也引發(fā)機(jī)體的免疫病理反應(yīng)［13］，導(dǎo)致肝細(xì)胞的損傷破壞，肝功能異常。FFA 是具有很強(qiáng)毒性的兩性分子，對(duì)肝細(xì)胞具有直接毒性作用，有研究表明［14］，血清中FFA 濃度的略微增加即可損傷肝細(xì)胞，進(jìn)一步加重病情，在HCV 病程中發(fā)揮很重要的作用。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)FA 水平與HCV RNA 之間存在相關(guān)關(guān)系，HCV RNA 低、中載量組間FFA 水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而均與高載量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。分析其原因可能是因?yàn)樵贖CV RNA低、中載量組中，此時(shí)的肝臟仍然具備一定的代償能力，HCV RNA 載量增多引起的肝臟處理FFA 能力的下降還處于可代償?shù)姆秶?。?dāng)患者HCV RNA 載量增多到高載量時(shí)，肝臟處理FFA 的能力失代償，導(dǎo)致患者血清FFA 水平急劇上升。因此血清FFA 水平不僅可以用來預(yù)測(cè)丙肝患者肝臟炎癥的程度，還可以用來預(yù)計(jì)HCV 病毒復(fù)制的活躍程度。

綜上所述，血清HCV RNA 載量對(duì)丙肝診斷和藥物治療療效監(jiān)測(cè)具有重要指導(dǎo)意義，HCV-cAg檢測(cè)具有較高的靈敏度和特異性、快速檢測(cè)以及操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，SOD、FFA 在一定程度上可以反映肝臟損傷程度和病變情況，因此將HCV RNA、HCV-cAg、SOD 和FFA 四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，在丙型肝炎早期準(zhǔn)確診斷及監(jiān)測(cè)療效中具有重要意義。