木薯海藻糖-6-磷酸酯酶MeTPP6基因克隆及其表達(dá)分析

丁澤紅 吳春來(lái) 顏彥

摘要：海藻糖-6-磷酸酯酶（TPP）負(fù)責(zé)海藻糖生物合成催化反應(yīng)的最后一步，是植物海藻糖生物合成途徑的關(guān)鍵酶。采用RT-PCR的方法從木薯葉片中克隆了1個(gè)TPP基因，命名為MeTPP6，該基因含有1個(gè)1 122 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼373個(gè)氨基酸，具有TPP家族保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明，MeTPP6與杞柳和楊樹(shù)中同源基因的親緣關(guān)系較近，序列相似性高達(dá)89.7%和89.0%。啟動(dòng)子分析表明，MeTPP6含有干旱、低溫、熱脅迫、激素（如ABA）和光響應(yīng)等相關(guān)元件。熒光定量PCR分析表明，MeTPP6在葉片和葉柄中表達(dá)量最低;在須根和儲(chǔ)藏根中表達(dá)量最高，分別為葉片表達(dá)量的4.2倍和4.5倍。而且，MeTPP6基因的表達(dá)能被干旱、低溫和ABA處理顯著誘導(dǎo)。這些結(jié)果表明，MeTPP6通過(guò)依賴于ABA的信號(hào)通路在轉(zhuǎn)錄水平參與木薯干旱和低溫脅迫，可作為重要候選基因進(jìn)一步研究其在木薯非生物逆境中的功能。

木薯（Manihot esculenta Crantz）是大戟科熱帶地區(qū)重要的薯類(lèi)作物，具有高產(chǎn)、高淀粉和耐貧瘠等特性，在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)和工業(yè)中占有非常重要的地位。木薯是一種耐旱作物，一方面木薯可以通過(guò)調(diào)節(jié)氣孔開(kāi)閉以及新展開(kāi)葉片的表面積大小來(lái)減少蒸騰作用造成的水分損失;另一方面，木薯具有發(fā)達(dá)的根系，可以從深層（>2 m）土壤中吸收水分[1]。然而，在較長(zhǎng)時(shí)間或較為嚴(yán)重的干旱條件下，其塊根產(chǎn)量仍會(huì)顯著下降[2]。作為典型的熱帶作物，木薯主要種植在30°S至30°N之間的熱帶和亞熱帶地區(qū)。與其抗旱性相比，木薯對(duì)低溫非常敏感，在<14 ℃時(shí)木薯生長(zhǎng)比較緩慢，<10 ℃時(shí)木薯將停止生長(zhǎng)。更嚴(yán)重的是，極端的低溫氣候可以造成木薯大幅減產(chǎn)甚至絕收[3]。因此，提高木薯對(duì)干旱和低溫等脅迫的抗性，使其在不良生長(zhǎng)環(huán)境下減少產(chǎn)量損失或是維持原有產(chǎn)量具有重要意義。

海藻糖是天然雙糖中最穩(wěn)定的糖質(zhì)，在真菌、細(xì)菌、藻類(lèi)、和動(dòng)植物中廣泛存在[4]。研究表明，在干旱、低溫和高鹽等非生物脅迫條件下，植物體內(nèi)海藻糖含量會(huì)大量積累[5]，植物生物抗性顯著增強(qiáng)。因此，提高海藻糖含量的累積對(duì)植物抵御干旱、低溫等逆境脅迫非常重要。植物中海藻糖主要經(jīng)TPS/TPP途徑合成，即尿苷二磷酸葡萄糖和6-磷酸葡萄糖分別在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase，簡(jiǎn)稱(chēng)TPS）、海藻糖-6-磷酸酯酶（trehalose-6-phosphate phosphatase，簡(jiǎn)稱(chēng)TPP）的催化作用下生成海藻糖[6]。不難看出，TPP負(fù)責(zé)海藻糖生物合成催化反應(yīng)的最后一步，是植物海藻糖生物合成途徑的1個(gè)關(guān)鍵酶。

植物中TPP由多基因編碼，例如水稻中有13個(gè)TPP基因（OsTPP1-OsTPP13）[7]，擬南芥中有10個(gè)TPP基因（AtTPPA- AtTPPJ）[8-9]，它們都含有TPP基因家族保守結(jié)構(gòu)域。早在2005年，Pramanik 等從水稻中克隆了OsTPP1基因，瞬時(shí)表達(dá)表明OsTPP1受到低溫、干旱、鹽和外源脫落酸（ABA）誘導(dǎo)，而且低溫處理后同時(shí)提高了TPP活性和海藻糖含量[10]。將OsTPP1基因在水稻中超表達(dá)后，轉(zhuǎn)基因植株對(duì)鹽和低溫的耐受性增強(qiáng)[7]。進(jìn)一步功能分析表明，OsTPP1可以激活脅迫相關(guān)基因的表達(dá)，從而增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植株的抗逆性[7]。重要的是，Nuccio等將OsTPP1基因在玉米中超表達(dá)后，多年份多地點(diǎn)田間試驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)基因植株在正常和干旱條件下均可以增加玉米產(chǎn)量[11]。由此可見(jiàn)，OsTPP1是1個(gè)重要的作物抗逆遺傳改良的候選基因。另1個(gè)水稻TPP基因OsTPP7，最近被證明通過(guò)糖代謝調(diào)控增強(qiáng)水稻厭氧萌發(fā)的耐受性[12]。在擬南芥中，Vogel等通過(guò)酵母互補(bǔ)試驗(yàn)鑒定并克隆了2個(gè)擬南芥TPP基因AtTPPA和AtTPPB[13]。研究發(fā)現(xiàn)，AtTPPA和AtTPPB表達(dá)后可以互補(bǔ)tps2突變體的功能，并能夠在體內(nèi)（in vivo）和體外（in vitro）試驗(yàn)中檢測(cè)到TPP活性[13]。此外，擬南芥TPP基因家族成員的表達(dá)也受到低溫、干旱、鹽和ABA處理的調(diào)控[9]。

然而，目前這些研究主要集中在模式植物擬南芥和水稻中，在熱帶作物（如木薯）中尚沒(méi)有關(guān)于TPP基因克隆及其響應(yīng)非生物脅迫的研究報(bào)道。本研究采用RT-PCR的方法從木薯葉片中克隆了1個(gè)TPP基因（命名為MeTPP6），分析其保守結(jié)構(gòu)域、系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和啟動(dòng)子元件，并通過(guò)qRT-PCR分析了其在不同組織中以及在干旱、低溫和外源ABA處理下的表達(dá)水平，旨在為進(jìn)一步研究MeTPP6在木薯非生物逆境響應(yīng)中的功能奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究所用材料為木薯主推栽培品種Ku50，具有高淀粉、抗逆性好等特點(diǎn)，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所提供。植物RNA提取試劑盒（貨號(hào)：DP437）購(gòu)自天根生化科技有限公司，cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（貨號(hào)：K1622）購(gòu)自Fermentas 公司。本研究中PCR引物在生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.2 木薯種植與處理

按照丁澤紅等方法[14]進(jìn)行木薯種植。將Ku50種莖切成15 cm左右的莖段，選擇粗細(xì)均勻且含有3～4個(gè)芽眼的莖段種植于塑料盆（上直徑18.5 cm，下直徑14.8 cm，高18.8 cm），每盆種植1個(gè)莖段。將蛭石和營(yíng)養(yǎng)土按照1 ∶ 1的體積比混合后作為木薯基質(zhì)。種植約10 d后對(duì)木薯進(jìn)行間苗，每盆只保留1棵苗。試驗(yàn)時(shí)間為2013年5月，試驗(yàn)地點(diǎn)為中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所。木薯種植60 d后，分別進(jìn)行低溫、干旱和ABA處理。（1）低溫處理：將生長(zhǎng)狀況一致的植株放置于光照培養(yǎng)箱，進(jìn)行4 ℃低溫脅迫處理。在處理0、6、24 h 后，分別收集第1張完全展開(kāi)葉、未展開(kāi)葉和根的樣品，-80 ℃保存?zhèn)溆谩＃?）干旱處理：采用PEG-6000進(jìn)行干旱模擬處理。處理植株澆灌20%的PEG-6000溶液，對(duì)照植株不施PEG（采用澆灌自來(lái)水代替）。在處理0、3和24 h 后，分別收集第1張完全展開(kāi)葉、未展開(kāi)葉、老葉和根的樣品，-80 ℃保存?zhèn)溆?。?）ABA處理：采用 100 μmol/L ABA溶液進(jìn)行澆灌處理，在處理0、3、5、7 d 后收集第1張完全展開(kāi)葉的樣品，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

為了研究不同組織中MeTPP6基因的表達(dá)情況，還收集了正常種植條件下木薯Ku50的根（包括須根和儲(chǔ)藏根）、莖、葉和葉柄的樣本，用于qRT-PCR分析。

1.3 引物合成及qRT-PCR

1.4 生物信息學(xué)分析

參照丁澤紅等方法[14]進(jìn)行生物信息學(xué)分析，具體描述如下：用BLASTP搜索Phytozome數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取其他物種中與MeTPP6同源的蛋白質(zhì)序列;用ExPASy ProtParam計(jì)算蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量;用Plant-mPLoc預(yù)測(cè)亞細(xì)胞定位;用NCBI-CDD數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)保守結(jié)構(gòu)域;用ClustalX進(jìn)行序列比對(duì);用MEGA 5.2構(gòu)建Neighbor-Joining系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù);用PlantCARE分析啟動(dòng)子元件;用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)PCR引物。

2 結(jié)果與分析

2.1 MeTPP6基因克隆

在前期木薯轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中獲得了1個(gè)在干旱脅迫下差異表達(dá)基因（cassava4.1_009931m.g），之后根據(jù)Phytozome木薯數(shù)據(jù)庫(kù)提供的參考序列，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增、凝膠電泳檢測(cè)（圖1）。經(jīng)測(cè)序后獲得1條全長(zhǎng)為1 122 bp的序列，編碼373個(gè)氨基酸（圖2），根據(jù)其與水稻TPP基因的同源性將其命名為MeTPP6。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，MeTPP6與參考序列之間僅存在1個(gè)堿基差異，可引起氨基酸編碼的改變。ProtParam預(yù)測(cè)MeTPP6蛋白的分子式為C1 876H2 988N510O544S14，總原子數(shù)目為5 932，理論等電點(diǎn)（pI值）為9.31，分子量為 41 840.3 ku，不穩(wěn)定系數(shù)為27.48，屬于穩(wěn)定蛋白。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)該蛋白質(zhì)定位于液泡或葉綠體。NCBI-CDD保守結(jié)構(gòu)域分析表明，MeTPP6編碼的蛋白含有TPP基因家族保守結(jié)構(gòu)域（Trehalose_PPase）（圖2），屬于木薯TPP基因家族成員。

2.2 MeTPP6系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析

通過(guò)BlastP工具在線搜索Phytozome數(shù)據(jù)庫(kù)獲取與MeTPP6同源性較高的其他物種中的蛋白質(zhì)序列，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。聚類(lèi)后發(fā)現(xiàn)，這些基因可以分為3組（圖3）：第Ⅰ組包括許多C4植物，如小米、狗尾草、黍羊Panicum hallii、柳枝稷、玉米、高粱和二穗短柄草;水稻TPP基因也被聚類(lèi)在第Ⅰ組，它與二穗短柄草的同源基因親緣關(guān)系較近，序列相似度高達(dá)87.8%。木薯MeTPP6基因被聚類(lèi)在第Ⅱ組，它與杞柳（SapurV1A.0684s0130.1）和楊樹(shù)（Potri.005G077200.1）中同源基因的親緣關(guān)系較近，序列相似性分別為89.7%和89.0%。擬南芥TPP基因被聚類(lèi)在第Ⅲ組，同時(shí)還包含了其他十字花科的物種，如白菜型油菜、薺菜花、琴葉擬南芥和鼠耳芥等。

2.3 MeTPP6基因啟動(dòng)子分析

啟動(dòng)子對(duì)基因表達(dá)起重要調(diào)控作用，它決定著基因的轉(zhuǎn)錄起始和表達(dá)程度。本研究選取MeTPP6起始密碼子上游 1 500 bp 的序列進(jìn)行啟動(dòng)子分析，發(fā)現(xiàn)了許多與逆境響應(yīng)相關(guān)的元件，如干旱誘導(dǎo)元件MBS、低溫響應(yīng)元件LTR、低溫和干旱響應(yīng)元件C-repeat/DRE、熱脅迫響應(yīng)元件HSE以及防御與脅迫相關(guān)元件TC-rich repeats（表1）。除此之外，還發(fā)現(xiàn)了許多與激素響應(yīng)相關(guān)的元件，如水楊酸響應(yīng)元件TCA-element、茉莉酸響應(yīng)元件TGACG-motif和CGTCA-motif、赤霉素響應(yīng)元件P-box和GARE-motif、脫落酸（ABA）響應(yīng)元件ABRE，以及許多與光響應(yīng)相關(guān)的元件，包括MRE、ACE、G-Box、Sp1和box II等。這些研究結(jié)果表明，MeTPP6可能參與木薯干旱、低溫、高溫、激素和光響應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)調(diào)控。

2.4 MeTPP6在木薯不同組織中的表達(dá)分析

TPS基因的表達(dá)量在植物不同組織器官中存在較大差異。本研究考察了MeTPP6基因在木薯Ku50不同組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，MeTPP6在葉片和葉柄中表達(dá)量最低;莖中表達(dá)量較高，約為葉片中表達(dá)量的2.1倍;須根和儲(chǔ)藏根中表達(dá)量最高，分別為葉片中表達(dá)量的4.2倍和4.5倍（圖4）。這些結(jié)果表明，MeTPP6基因主要在木薯的須根和儲(chǔ)藏根中起作用。

2.5 MeTPP6在不同脅迫條件下的表達(dá)分析

本研究在MeTPP6基因啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)現(xiàn)了干旱、低溫和ABA響應(yīng)相關(guān)的元件。為了進(jìn)一步驗(yàn)證MeTPP6的功能，本研究分別在干旱、低溫和ABA處理?xiàng)l件下考察了MeTPP6基因的表達(dá)模式（圖5）。

在PEG-6000脅迫條件（模擬干旱）下，在處理3、24 h后MeTPP6在老葉中的表達(dá)量呈現(xiàn)持續(xù)下降的變化趨勢(shì)，但表達(dá)量無(wú)顯著差異;在第1張完全展開(kāi)葉中，MeTPP6的表達(dá)量呈現(xiàn)先下降后上升的變化趨勢(shì)，在處理3、24 h后分別下降了19%和上升了1.3倍;在未展開(kāi)葉，MeTPP6的表達(dá)量呈現(xiàn)先不變后上升的變化趨勢(shì)，在處理24 h后上升了1.8倍;在根中，MeTPP6的表達(dá)量呈現(xiàn)持續(xù)上升的變化趨勢(shì)，在處理3、24 h后分別上升了1.3倍和1.5倍（圖5-A）。

在低溫脅迫下，在未展開(kāi)葉和第1張完全展開(kāi)葉，MeTPP6的表達(dá)量在處理6、24 h后均呈現(xiàn)持續(xù)下降的變化趨勢(shì)，其表達(dá)量分別下降了56%和64%、49%和65%;不同的是，根中MeTPP6的表達(dá)量在處理6、24 h后呈現(xiàn)持續(xù)上升的變化趨勢(shì)，其表達(dá)量分別上升了3.8倍和8.1倍（圖5-B）。

在ABA處理?xiàng)l件下，MeTPP6在葉片中的表達(dá)量顯著上升了，在處理3、5、7 d后分別上升了1.4倍、1.7倍、1.9倍（圖5-C）。

這些結(jié)果充分表明，MeTPP6基因在轉(zhuǎn)錄水平參與干旱、低溫和ABA處理響應(yīng)，可作為候選基因進(jìn)一步研究其在木薯抗逆中的功能。

3 討論與結(jié)論

海藻糖是重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，提高植物體內(nèi)海藻糖含量可以增強(qiáng)植物對(duì)干旱、低溫等非生物脅迫的抗性[16]。TPS和TPP是海藻糖生物合成途徑中的關(guān)鍵酶。與TPS相比，有關(guān)植物TPP基因克隆的研究還很少，且大多數(shù)報(bào)道都集中在模式植物擬南芥和水稻中。擬南芥中共有10個(gè)TPP基因，水稻中有13個(gè)TPP基因，它們都含有TPP基因家族保守結(jié)構(gòu)域[7-8]。研究表明，提高TPP基因的表達(dá)量可以增強(qiáng)植物對(duì)逆境脅迫的抗性。在擬南芥中超表達(dá)AtPPD基因后，轉(zhuǎn)基因植株抗鹽能力增強(qiáng)[17];在水稻中超表達(dá)OsTPP1基因后，轉(zhuǎn)基因植株中OsTPP1表達(dá)量上升，其對(duì)低溫、鹽和干旱脅迫的抗性增強(qiáng)[7，10]。進(jìn)一步試驗(yàn)表明，ABA代謝參與OsTPP1基因的表達(dá)調(diào)控[10]。而且，在玉米中超表達(dá)OsTPP1基因后發(fā)現(xiàn)，在正常和干旱條件下均可以增加玉米產(chǎn)量[11]。可見(jiàn)，TPP是1個(gè)非常重要的抗逆候選基因，可用于作物抗逆遺傳改良育種。本研究通過(guò)RT-PCR的方法從木薯葉片中克隆了1個(gè)TPP基因MeTPP6，序列分析表明MeTPP6編碼373個(gè)氨基酸，含有TPP基因家族保守結(jié)構(gòu)域，屬于木薯TPP基因家族成員。進(jìn)化樹(shù)分析表明，它與杞柳和楊樹(shù)中TPP基因的親緣關(guān)系較近，序列相似性分別為89.7%和89.0%。

TPP基因在不同組織中的表達(dá)具有較大差異。例如擬南芥AtTPPA、AtTPPF和AtTPPG主要在花粉表達(dá)，AtTPPB主要在胚根、側(cè)根以及根的伸長(zhǎng)區(qū)表達(dá)，而AtTPPE主要在子葉和木質(zhì)部表達(dá)[9]，暗示不同TPP成員可能傾向于在不同組織中發(fā)揮功能。本研究發(fā)現(xiàn)MeTPP6在葉片和葉柄中表達(dá)量最低，在須根和儲(chǔ)藏根中表達(dá)量最高，支持MeTPP6基因主要在木薯的須根和儲(chǔ)藏根中起作用。

TPP基因表達(dá)受到低溫、干旱、鹽、機(jī)械損傷和滲透脅迫等調(diào)控，且不同TPP成員對(duì)各種處理的響應(yīng)不一樣。例如，在擬南芥幼苗中，AtTPPE、AtTPPF、AtTPPG和AtTPPJ的表達(dá)均受到低溫、鹽和滲透脅迫的誘導(dǎo)，AtTPPA和AtTPPH的表達(dá)僅受到低溫脅迫誘導(dǎo)但被鹽和滲透脅迫抑制[9]。在根中，AtTPPD、AtTPPF和AtTPPI的表達(dá)均受到低溫、鹽和滲透脅迫的誘導(dǎo);AtTPPA、AtTPPE和AtTPPG的表達(dá)受到低溫和鹽脅迫的誘導(dǎo)，但對(duì)滲透脅迫表現(xiàn)出不同的響應(yīng)模式;而AtTPPB和AtTPPH的表達(dá)則受到低溫、鹽和滲透脅迫的抑制[9]。此外，不同TPP成員對(duì)激素的響應(yīng)也不一樣。AtTPPA和AtTPPB的表達(dá)受到ABA處理抑制，AtTPPI和AtTPPD的表達(dá)受到ABA處理誘導(dǎo)，而AtTPPE、AtTPPG和AtTPPF的表達(dá)則同時(shí)受到ABA和JA處理誘導(dǎo)[9]。水稻中OsTPP1基因的表達(dá)也受到低溫、干旱、鹽和外源ABA激素的誘導(dǎo)[7，10]。本研究在MeTPP6啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)現(xiàn)了一系列與干旱、低溫、防御和脅迫響應(yīng)相關(guān)的元件，表達(dá)分析也進(jìn)一步證實(shí)，MeTPP6基因的表達(dá)量受到干旱和低溫的調(diào)控。植物響應(yīng)外界非生物脅迫的信號(hào)路徑主要分為依賴于ABA信號(hào)通路和不依賴于ABA信號(hào)通路2種[18]。本研究在MeTPP6啟動(dòng)子區(qū)域多個(gè)位置發(fā)現(xiàn)了與ABA響應(yīng)相關(guān)的元件ABRE，且表達(dá)分析結(jié)果也表明MeTPP6基因表達(dá)是響應(yīng)ABA信號(hào)的。因此，本研究推測(cè)MeTPP6可能是通過(guò)依賴于ABA的信號(hào)通路參與木薯干旱和低溫等非生物脅迫調(diào)控。這些結(jié)果將為進(jìn)一步研究MeTPP6基因在木薯抗逆中的功能提供理論參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]張 鵬，安 冬，馬秋香，等. 木薯分子育種中若干基本科學(xué)問(wèn)題的思考與研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)科學(xué)（生命科學(xué)），2013，43（12）：1082-1089.

[2]Okogbenin E，Setter T L，F(xiàn)erguson M，et al. Phenotypic approaches to drought in cassava：review[J]. Frontiers in Physiology，2013，4（1）：93.

[3]盧賽清，盤(pán) 歡，馬崇熙，等. 2008年廣西木薯低溫凍害情況及應(yīng)對(duì)措施[J]. 廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2009（1）：21-22.

[4]張 雯，王宇斐，郭延平.高等植物6-磷酸海藻糖信號(hào)調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 植物生理學(xué)報(bào)，2016，52（4）：394-400.

[5]張建波，王莎莎，郝大海，等. 干旱和低溫脅迫影響煙草幼苗海藻糖代謝的差異比較[J]. 生物技術(shù)通報(bào)，2015，31（10）：111-118.

[6]史健志，徐 燕，紀(jì)德華，等. 壇紫菜6-磷酸海藻糖合成酶（TPS）家族基因的克隆及表達(dá)特征分析[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2015，39（4）：485-495.

[7]Ge L F，Chao D Y，Shi M，et al. Overexpression of the trehalose-6-phosphate phosphatase gene OsTPP1 confers stress tolerance in rice and results in the activation of stress responsive genes[J]. Planta，2008，228（1）：191-201.

[8]Vandesteene L，Lopez-Galvis L，Vanneste K，et al. Expansive

evolution of the trehalose-6-phosphate phosphatase gene family in Arabidopsis[J]. Plant Physiology，2012，160（2）：884-896.

[9]Li P H，Ma S S，Bohnert H J. Coexpression characteristics of trehalose-6-phosphate phosphatase subfamily genes reveal different functions in a network context[J]. Physiologia Plantarum，2008，133（3）：544-556.

[10]Pramanik M R，Imai R. Functional identification of a trehalose 6-phosphate phosphatase gene that is involved in transient induction of trehalose biosynthesis during chilling stress in rice[J]. Plant Molecular Biology，2005，58（6）：751-762.

[11]Nuccio M L，Wu J，Mowers R，et al. Expression of trehalose-6-phosphate phosphatase in maize ears improves yield in well-watered and drought conditions[J]. Nature Biotechnology，2015，33（8）：862.

[12]Kretzschmar T，Pelayo M A，Trijatmiko K R，et al. A trehalose-6-phosphate phosphatase enhances anaerobic germination tolerance in rice[J]. Nature Plants，2015，1（9）：15124.

[13]Vogel G，Aeschbacher R A，Muller J，et al. Trehalose-6-phosphate phosphatases from Arabidopsis thaliana：identification by functional complementation of the yeast tps2 mutant[J]. Plant Journal，1998，13（5）：673-683.

[14]丁澤紅，付莉莉，鐵韋韋，等. 木薯MeNCED3基因克隆、結(jié)構(gòu)變異及其表達(dá)分析[J]. 生物技術(shù)通報(bào)，2016，32（10）：148-153.

[15]Fu L L，Ding Z H，Han B Y，et al. Physiological investigation and transcriptome analysis of polyethylene glycol （PEG）-induced dehydration stress in cassava[J]. International Journal of Molecular Sciences，2016，17（3）：283.

[16]Garg A K，Kim J K，Owens T G，et al. Trehalose accumulation in rice plants confers high tolerance levels to different abiotic stresses[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2002，99（25）：15898-15903.

[17]Krasensky J，Broyart C，Rabanal F A. The redox-sensitive chloroplast trehalose-6-phosphate phosphatase AtTPPD regulates salt stress tolerance[J]. Antioxidants & Redox Signaling，2014，21（9）：1289-1304.

[18]Shinozaki K，Yamaguchi-Shinozaki K. Gene networks involved in drought stress response and tolerance[J]. Journal of Experimental Botany，2007，58（2）：221-227.盧勁曄，顧蓓蓓，馬 卉，等. 視黃醇對(duì)大腸桿菌誘導(dǎo)的大鼠乳腺上皮細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的抑制作用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，47（6）：35-38.