劉芳 國大亮 趙宇 劉玉璇 劉洋

摘 要：鱷魚血具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒和抗氧化的作用，可用于食品與藥品中，具有較高的藥用價值。該文對鱷魚血的抗癌、抗菌、抗病毒、抗氧化等方面的生理活性進(jìn)行了綜述，并對其發(fā)展前景進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：鱷魚血;抗癌;抗菌;抗病毒;抗氧化

中圖分類號 S986.2;Q959.6+文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A文章編號 1007-7731（2019）16-0012-04

Abstract：Crocodile blood has strong anti-tumor，anti-bacterial，anti-viral and anti-oxidation effects，can be applied to foods and medicines，has a high medicinal value. This article summarizes the physiological activities of anti-cancer，anti-bacterial，anti-viral and anti-oxidation of crocodile blood，and summarizes its prospects.

Key words：Crocodile blood;Anti-cancer;Anti-bacterial;Anti-virus;Anti-oxidation

鱷魚是現(xiàn)存最古老的珍稀動物，其生態(tài)價值、科學(xué)價值以及經(jīng)濟(jì)價值都很高[1]。各國醫(yī)學(xué)家們利用鱷魚優(yōu)良的資源開發(fā)出了很多健康的藥品，其中，鱷魚血具有很高的藥用價值及研究價值[2]。當(dāng)前，鱷魚血的高值化利用受到了廣泛的關(guān)注，深入研究鱷魚血的功能特性，并加以開發(fā)利用，是當(dāng)前的研究重點(diǎn)。本文主要介紹了近年來國內(nèi)外有關(guān)鱷魚血生理活性的研究進(jìn)展，旨在對未來鱷魚血的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 抗癌活性

鱷魚血可以消炎、抗腫瘤、清熱解毒，對肝癌、胃癌等都具有良好的功效。鱷魚血液中的血紅蛋白氨基酸鏈結(jié)構(gòu)十分獨(dú)特，可以有效增強(qiáng)血液和細(xì)胞的活力以及抗突變能力，此外鱷魚血中還包含有1種超級縮氨酸（S.P）和非常豐富的超氧化物歧化酶（SOD），可以有效地抑制和殺滅腫瘤細(xì)胞。

鱷魚血液在體外能有效降低結(jié)直腸癌細(xì)胞的存活率[3]，賡迪等[4]體外采用MTT法測定鱷魚血漿和血清對胃癌細(xì)胞BGC823、肝癌細(xì)胞HepG2、卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用，采用S180腫瘤模型評價小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大劑量血漿和血清能抑制BGC823、HepG2、SKOV3等細(xì)胞的生長增殖，對S180腫瘤的抑制率高達(dá)57.55%。表明養(yǎng)殖鱷魚血液具有抗癌活性[4-5]。

許東暉等[6]經(jīng)小鼠實(shí)驗(yàn)表明，鱷魚血漿能夠顯著提高荷瘤小鼠的脾臟指數(shù)，其原因在于鱷魚血漿可以刺激脾臟細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖，使宿主免疫系統(tǒng)激活，從而提高抗癌能力。此外，腹腔注射鱷魚血漿比灌胃給予所產(chǎn)生的抑制腫瘤的作用要強(qiáng)，說明鱷魚血漿中能產(chǎn)生抗腫瘤作用的有效成分是蛋白類或肽類物質(zhì)，能在胃腸道中被酶解，從而降低其抗癌作用。

鱷魚白細(xì)胞提取物中的活性物質(zhì)對Hela細(xì)胞具有抗癌活性，并通過降低明膠酶MMP-2、MMP-9活性及其蛋白水平來抑制遷移和侵襲過程，這種機(jī)制是通過干擾Ras和p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來調(diào)節(jié)的[7]。從鱷魚白細(xì)胞提取物中提取的陽離子抗菌肽，揭示了人宮頸癌細(xì)胞的抗癌活性和凋亡誘導(dǎo)作用。經(jīng)鱷魚白細(xì)胞提取物治療后癌細(xì)胞遷移受到了明顯抑制，表明其具有很強(qiáng)的抗轉(zhuǎn)移能力。RT2肽來源于鱷魚白細(xì)胞，通過凋亡誘導(dǎo)可殺死人宮頸癌細(xì)胞，其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制是降低Bcl-2和XIAP的表達(dá)水平，提高caspase-3、caspase-8和p53的表達(dá)水平[8]。在體內(nèi)異種移植模型中，RT2可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制腫瘤生長[9]。

Theansungnoen T等[10]用已知的抗菌肽KT2和RT2以及從淡水鱷魚白細(xì)胞提取物中提取的新型RP9來評估殺死人類宮頸癌細(xì)胞的能力。采用陰離子交換柱和反相高效液相色譜相結(jié)合的方法對提取物中的RP9進(jìn)行純化，并對其序列進(jìn)行了質(zhì)譜分析。新肽對革蘭氏陰性霍亂弧菌和革蘭氏陽性短小芽孢桿菌有抑制作用，掃描電鏡下可見該肽直接影響細(xì)菌表面。采用化學(xué)合成的方法，研究了KT2和RT2的抗腫瘤活性，用磺酰羅丹明B比色法測定這些抗菌肽對HeLa和CaSki癌細(xì)胞株均有抑制作用，此外，用最佳候選肽KT2和RT2測定了人細(xì)胞凋亡陣列法對癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，結(jié)果顯示，KT2和RT2可誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡。

2 抗菌活性

鱷魚的免疫系統(tǒng)和人的不同，它可以在身體剛剛被細(xì)菌攻擊的時候被感知，并及時將其殺死。從鱷魚血紅蛋白水解物中提取的一種新型抗菌肽可誘導(dǎo)膜滲透，導(dǎo)致鐵調(diào)節(jié)失調(diào)、氧化應(yīng)激和細(xì)菌死亡[11]。鱷魚血清已被證明具有超過人血清的抗菌活性，這種活性是由于陽離子抗菌肽（CAMPS）在起作用[12]。Merchant M E等[13]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鱷魚血清的抗菌譜比人血清的抗菌譜更為廣泛，在100%的測試細(xì)菌菌株中均產(chǎn)生抑制，相比之下，人類血清僅為35%。然而，隨著冷存時間的增長，鱷魚血清的抗菌作用就會降低，表明鱷魚的有效成分在冷藏過程中會失去活性。通過蛋白酶預(yù)孵育可完全抑制鱷魚血清的抗菌活性。此外，鱷魚血清在56℃孵育30min消除了鱷魚血清的所有抗菌性能。其體外抗菌活性相對較快，在大腸桿菌接種后5min內(nèi)有顯著活性，20min時有最大活性，且抗菌活性呈溫度依賴性，活性在15℃以下有明顯下降.表明鱷魚血清的抗菌活性可能與血清補(bǔ)體系統(tǒng)調(diào)節(jié)有關(guān)[13]。

Leelawongtawon R等[14]對30種鱷魚血液樣本進(jìn)行了抗菌敏感性評估，結(jié)果顯示，新鮮血清（80mg/mL）和凍干血清（100mg/mL）對產(chǎn)氣腸桿菌ATCC 13048、大腸桿菌ATCC 25922、肺炎克雷伯氏菌ATCC 27736、傷寒沙門菌ATCC 13311、銅綠假單胞菌ATCC 27853等革蘭氏陰性菌均有抑制作用，新鮮血清的敏感率分別為23.30%、10.00%、40.00%、70.00%和86.67%;凍干血清的敏感率分別為30.00%、10.00%、43.33%、76.67%和90.00%。新鮮血清和凍干血清對新生隱球菌250309和黑曲霉也有抑制作用，新鮮血清的敏感率分別為90.00%和80.00%，凍干血清的敏感率分別為100.00%和83.33%。表明鱷魚的新鮮血清和凍干血清具有潛在的抗菌和抗真菌活性。

Kommanee J等[15]研究表明，由鱷魚的全血制備的粗血漿對金黃色葡萄球菌，傷寒沙門氏菌，大腸桿菌，霍亂弧菌，銅綠假單胞菌和表皮葡萄球菌等6種參考菌株均有顯著的抗菌活性，其生長抑制率超過40%，以及對4種臨床分離的表皮葡萄球菌，銅綠假單胞菌，傷寒沙門氏菌和霍亂弧菌也表現(xiàn)出明顯的抗菌活性。并且傷寒沙門氏菌，霍亂弧菌和表皮葡萄球菌的參考菌株以及傷寒沙門氏菌和霍亂弧菌的臨床分離株的生長抑制率超過了80%。粗血漿對傷寒沙門氏菌細(xì)菌細(xì)胞的影響可能逐漸滲透到細(xì)胞質(zhì)空間，擾亂和破壞細(xì)菌膜。從鱷魚中提取的粗制血漿通過損傷靶細(xì)胞的細(xì)胞膜對病原菌和參考菌株有明顯的抗菌活性。

3 抗病毒活性

鱷魚血清具有良好的抗病毒活性，特別是針對人類的艾滋病毒，其免疫系統(tǒng)表現(xiàn)出了超強(qiáng)的抵御病毒的能力，利用鱷魚血制成的藥品或食品可提高人體免疫力，從而抵御病毒。

田鈺琪等[16]研究了人工養(yǎng)殖鱷魚血清及血漿對甲型流感病毒、乙肝病毒表面抗體抗原HBsAg及乙肝e抗原HBeAg的分泌均有抑制作用，白細(xì)胞提取物在很低濃度對乙肝病毒表面抗體抗原HBsAg的分泌有明顯的抑制作用，結(jié)果表明，人工養(yǎng)殖鱷魚血液中存在某些可以體外抗甲型流感病毒及乙肝病毒的活性物質(zhì)[16]。

鱷魚血液中含有能夠有效抑制和殺滅金黃葡萄球菌和艾滋病毒的蛋白活性物質(zhì)[17]。Merchant M等[18]研究表明，鱷魚血清有抗阿米巴變形蟲活性和抗病毒活性，用細(xì)胞分析法檢測野生鱷魚血清對3種包膜病毒的抗生素活性，結(jié)果表明，鱷魚血清對Ⅰ型人類免疫缺陷病毒（HIV-1;IC50=0.9%）、西尼羅河病毒（WNV;IC50=4.3%）和Ⅰ型單純皰疹病毒（HSV-1;IC50=3.4%）均顯示出抗病毒活性。抑制濃度（IC50）定義為抑制病毒50%活性的血清濃度，由于用于檢測病毒活性的哺乳動物細(xì)胞的固有毒性，因此，在高濃度下很難評估鱷魚血清的抗病毒作用。在HIV-1、WNV 和HSV-1檢測中，血清TC50（降低細(xì)胞活力至50%的血清濃度）值分別為32.8%、36.3%和39.1%。經(jīng)56℃熱處理30min血清后顯示，HIV-1、WNV和HSV-1病毒的IC50值分別大于50%、9.8%和14.9%。此外，相對于未處理的血清，使用熱處理的血清的TC50值在3種測定中顯著升高。在這些條件下，證明鱷魚血清補(bǔ)體活性是不耐熱的。抗HIV-1病毒作用是熱敏性的，可能與血清補(bǔ)體調(diào)節(jié)有關(guān)，而抗WNV和抗HSV-1的活性對溫度表現(xiàn)相對穩(wěn)定，因此可能不是補(bǔ)體介導(dǎo)的[19]。

Kozlowski H N等[20]研究發(fā)現(xiàn)，鱷魚血漿含有有效的HIV-1IIIB感染抑制劑，被鑒定為組蛋白，重組人組蛋白H1和H2A能顯著降低HIV-1感染。鱷魚血漿、重組H1或重組H2A對HIV-1感染的抑制作用發(fā)生在病毒轉(zhuǎn)錄過程中或轉(zhuǎn)錄后。結(jié)果表明，鱷魚血中的循環(huán)組蛋白可能是中性粒細(xì)胞胞外陷阱釋放的，是體外HIV-1感染的重要抑制劑。細(xì)胞外重組蛋白對HIV-1轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達(dá)有不同的影響，在HIV-1感染過程中，循環(huán)組蛋白可能是一種新的抵抗因子，應(yīng)該作為未來調(diào)節(jié)病毒轉(zhuǎn)錄的HIV-1治療方法加以探索。

4 抗氧化活性

鱷魚血液中存在一種生理活性十分獨(dú)特的活性肽，是鱷魚體內(nèi)一種新型的抗菌素，通過破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜可以殺死不能被其他類型抗生素完全殺死的致病菌[21-22]?，F(xiàn)有的研究證實(shí)，這種活性肽不僅能夠殺滅細(xì)菌、抑制腫瘤，還可以抗氧化，這是由于鱷魚血紅蛋白有抗氧化的效果[23]，這種特征也是鱷魚血和人血在很多地方存在區(qū)別的主要原因。抗氧化肽是目前為止研究較多的一種生物活性肽，可以抑制體內(nèi)的脂質(zhì)氧化、減少自由基的含量[24]。相比較于天然抗氧化劑，抗氧化肽更穩(wěn)定、安全、高效[24-25]，將鱷魚血蛋白酶解制備抗氧化肽，并將其利用到食品或藥品中，可大大增強(qiáng)鱷魚血的使用價值[26]。

Phosri S等[27]從鱷魚血液中發(fā)現(xiàn)其具有抗氧化和抗炎活性。采用2，2′-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸自由基清除、一氧化氮清除、羥基自由基清除和亞油酸過氧化試驗(yàn)研究了鱷魚血的抗氧化活性，結(jié)果表明，鱷魚血成分具有抗氧化活性，尤其是血紅蛋白、粗白細(xì)胞提取物和血漿。此外，將小鼠巨噬細(xì)胞作為模型，研究了鱷魚血的抗炎活性，結(jié)果表明，血紅蛋白、粗白細(xì)胞提取物和血漿對小鼠巨噬細(xì)胞無毒性。此外，還通過降低脂多糖刺激細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮和白細(xì)胞介素6來顯示抗炎活性，結(jié)果顯示，血紅蛋白、粗白細(xì)胞提取物和血漿的NO抑制率分別為31.9%、48.24%和44.27%，然而只有粗白細(xì)胞提取物才能抑制白細(xì)胞介素6的產(chǎn)生。血紅蛋白、粗白細(xì)胞提取物和暹羅血血漿具有抗氧化和抗炎作用，可作為醫(yī)藥產(chǎn)品中的輔助劑。

5 結(jié)語

現(xiàn)有的研究顯示，鱷魚血表現(xiàn)出了良好的抗癌、抗菌、抗病毒和抗氧化的作用。目前，隨著鱷魚在越來越多的國家被廣泛地養(yǎng)殖，鱷魚除了食用等價值外，其保健、藥用價值也正在被廣泛利用。外國科學(xué)家已經(jīng)對鱷魚血開展了很多的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)鱷魚血具有多種生理活性。近年來，我國也針對鱷魚血進(jìn)行許多實(shí)驗(yàn)研究，有了很多關(guān)于鱷魚血可以提高免疫力的報道。所有的研究結(jié)果都將會對鱷魚血產(chǎn)品的深度開發(fā)和應(yīng)用產(chǎn)生積極的作用，隨著對鱷魚血進(jìn)行越來越多的研究，鱷魚血未來將會對人類的健康與長壽作出重大的貢獻(xiàn)，必將擁有較大的實(shí)用價值和廣闊的應(yīng)用空間。

參考文獻(xiàn)

[1]肖琨.養(yǎng)殖暹羅鱷肉品質(zhì)評價及肌原纖維蛋白功能特性研究[D].上海：上海海洋大學(xué)，2015.

[2]謝妍.暹羅鱷肌肉營養(yǎng)評價及其肌原纖維蛋白凝膠特性的研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2013.

[3]Ou Yuqian，Ho Wing Shing.Crocodile blood extract induces the apoptosis of lung cancer cells through PTEN activity[J].Oncology reports，2016，36（3）：1457-1466.

[4]賡迪，段玉龍，徐曉琳，等.人工養(yǎng)殖暹羅鱷血體內(nèi)、外抗腫瘤活性研究[J].中藥材，2012，35（12）：1901-1904.

[5]許東暉，馬海萍，梅雪婷，等.鱷魚的活性物質(zhì)及其藥理作用、保健功效研究進(jìn)展[J].中國海洋藥物，2007，26（06）：44-47.

[6]許東暉，馬海萍，梅雪婷，等.鱷魚血漿的抗腫瘤活性研究[C].//第九屆全國中藥藥理學(xué)術(shù)交流會論文集.中山大學(xué)，2005：133-137.

[7]Patathananone S，Thammasirirak S，Daduang J，et al.Inhibition of HeLa cells metastasis by bioactive compounds in crocodile （Crocodylus siamensis） white blood cells extract[J].Environmental Toxicology，2016，31（11）：1329-1336.

[8]Phosri S，Jangpromma N，Chang L C .Siamese crocodile white blood cell extract inhibits cell 1 proliferation and promotes autophagy in multiple cancer cell lines[J].Biotechnology & Applied Biochemistry，2018，28（6）：1007-1021.

[9]Pornsuda M，Sompong K，Patcharee B，et al.Antitumor activity of RT2 peptide derived from crocodile leukocyte peptide on human colon cancer xenografts in nude mice[J].Environmental Toxicology，2018，33（9）：972-977.

[10]Theansungnoen T，Maijaroen S，Jangpromma N，et al.Cationic Antimicrobial Peptides Derived from Crocodylus siamensis Leukocyte Extract，Revealing Anticancer Activity and Apoptotic Induction on Human Cervical Cancer Cells[J].Protein Journal，2016，35（3）：202-211.

[11]Lueangsakulthai J，Jangpromma N，Temsiripong T，et al.A novel antibacterial peptide derived from Crocodylus siamensis hemoglobin hydrolysate induces membrane permeabilisation causing iron dysregulation，oxidative stress and bacterial death[J].Journal of Applied Microbiology，2017，123（4）：819-831.

[12]Barksdale S M，Hrifko E J，Van Hoek M L .Cathelicidin antimicrobial peptide from Alligator mississippiensis has antibacterial activity against multi-drug resistant Acinetobacter baumanii and Klebsiella pneumoniae[J].Developmental & Comparative Immunology，2017，70：135-144.

[13]Merchant M E，Prudhomme J，Roche C，et al.Antibacterial properties of serum from the American alligator （Alligator mississippiensis）.[J].Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol，2003，136（3）：505-513.

[14]Leelawongtawon R，Siruntawineti J，Chaeychomsri W，et al.Antibacterial and antifungal activities from Siamese crocodile blood[J].J Med Assoc Thai，2010，93：S58-64.

[15]Kommanee J，Preecharram S，Daduang S，et al.Antibacterial activity of plasma from crocodile （Crocodylus siamensis） against pathogenic bacteria[J].Annals of General Psychiatry，11，1（2012-07-30），2012，11（1）：22-22.

[16]田鈺琪，王鳳林，陳斌，等.人工養(yǎng)殖暹羅鱷的抗病毒活性研究[J].特產(chǎn)研究，2018，40（2）：27-30.

[17]鄒黎黎.暹羅鱷（Crocodylus siamensis）組織細(xì)胞中抗菌活性物質(zhì)的提取與效果研究[D].重慶：西南大學(xué)，2008.

[18]Merchant M，Thibodeaux D K，Elsey R M.Amoebacidal effects of serum from the American alligator （Alligator mississippiensis）[J].Journal of Parasitology，2004，90（6）：1480-1483.

[19]Merchant M E，Pallansch M，Paulman R L，et al.Antiviral activity of serum from the American alligator（Alligator mississippiensis）[J].Antiviral Research，2005，66（1）：35-38.

[20]Kozlowski H N，Lai E T L，Havugimana P C，et al.Extracellular histones identified in crocodile blood inhibit in vitro HIV-1 infection[J].Aids，2016，30（13）：2043-2052.

[21]李海航，羅嘉玲，倪賀.鱷魚資源開發(fā)和生物活性物質(zhì)研究進(jìn)展[J].華南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2014，46（03）：10-17.

[22]陳弘培，趙慧，董詩婷，等.鱷魚綜合加工與高值化利用研究進(jìn)展[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2017（10）：62-67.

[23]Jandaruang J，Siritapetawee J，Thumanu K，et al.The Effects of Temperature and pH on Secondary Structure and Antioxidant Activity of Crocodylus siamensis Hemoglobin[J].Protein Journal，2012，31（1）：43-50.

[24]張暉，唐文婷，王立，等.抗氧化肽的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報，2013，32（07）：673-679.

[25]潘忠星，馮志彪.乳源性ACE抑制肽和抗氧化肽結(jié)構(gòu)與生理活性關(guān)系的研究[J].食品工業(yè)科技，2012，33（22）：436-440.

[26]黃和平，陳孫福，羅永康.鱷魚血蛋白酶解產(chǎn)物抗氧化特性和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性研究[J].漁業(yè)現(xiàn)代化，2014，41（05）：44-48.

[27]Phosri S，Mahakunakorn P，Lueangsakulthai J，et al.An Investigation of Antioxidant and Anti-inflammatory Activities from Blood Components of Crocodile （Crocodylus siamensis）[J].The Protein Journal，2014，33（5）：484-492.

（責(zé)編：張宏民）