王曉龍 陶飛
【摘 要】我國(guó)在建立市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)體制之后,逐漸出現(xiàn)了較多藥品生產(chǎn)企業(yè),也相應(yīng)加劇了藥品生產(chǎn)企業(yè)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。為了確保藥品生產(chǎn)質(zhì)量,必須反復(fù)檢驗(yàn)藥物安全性和治療效果,無(wú)菌檢驗(yàn)方法能夠?qū)λ幤焚|(zhì)量安全進(jìn)行驗(yàn)證。此次研究主要是探討分析藥品生產(chǎn)企業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)方法,希望能夠?qū)ο嚓P(guān)人員起到參考性?xún)r(jià)值。
【關(guān)鍵詞】藥品生產(chǎn)企業(yè);無(wú)菌檢驗(yàn)方法;驗(yàn)證方法
【中圖分類(lèi)號(hào)】R256.21【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019(2019)23--01
1、無(wú)菌檢驗(yàn)的樣品與設(shè)備
準(zhǔn)備左氧氟沙星樣品,在準(zhǔn)備之前需要對(duì)檢驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行消毒處理,包括振蕩儀、HTY-K性培養(yǎng)器皿、智能集菌儀,保證檢驗(yàn)設(shè)備的無(wú)菌效果和性能穩(wěn)定性,滿(mǎn)足無(wú)菌檢驗(yàn)的要求,嚴(yán)格控制整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程,以此維護(hù)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,之后需要控制樣品規(guī)格和質(zhì)量,確保滿(mǎn)足試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求。在采集和存儲(chǔ)樣品時(shí)應(yīng)當(dāng)滿(mǎn)足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,之后準(zhǔn)備試驗(yàn)菌株[3]。在選擇試驗(yàn)菌株時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮到藥品,確保試驗(yàn)菌株的有效性和針對(duì)性。同時(shí),為了確保整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作的有效性,必須確保檢驗(yàn)操作人員具備專(zhuān)業(yè)化知識(shí)與技能,能夠確保整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作的科學(xué)性。
2、制備試驗(yàn)菌液
現(xiàn)階段,在驗(yàn)證無(wú)菌檢驗(yàn)方法時(shí)主要應(yīng)用白色念珠菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、生孢梭菌等。對(duì)于以上菌株的制備方法主要有接種新型菌株培養(yǎng)物至培養(yǎng)基中,在30攝氏度溫度下培養(yǎng)20h左右,選取1ml培養(yǎng)物,添加9ml無(wú)菌氯化鈉溶液(0.9%),稀釋至1ml菌株含量低于100CFU的菌懸液。對(duì)于白色念珠菌來(lái)說(shuō),接種新型菌株培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中,在30攝氏度溫度下培養(yǎng)20h左右,添加9ml無(wú)菌氯化鈉溶液(0.9%),稀釋至1ml菌株含量低于100CFU的菌懸液。但是生孢梭菌的制備方法比較特殊,需要選取新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中,在30攝氏度溫度下培養(yǎng)20h左右[4]。選取1ml培養(yǎng)物添加9ml無(wú)菌氯化鈉溶液(0.9%),稀釋至1ml菌株含量低于100CFU的菌懸液。
3、驗(yàn)證方法與驗(yàn)證結(jié)果/
3.1 驗(yàn)證方法 按照薄膜過(guò)濾法將左氧氟沙星放置于管內(nèi),并且泵入培養(yǎng)基中,將100CFU試驗(yàn)菌置入于管內(nèi),作為試驗(yàn)管Ⅰ組;之后按照薄膜過(guò)濾法將樣品置入到另外一管中,清洗劑氯化鈉-蛋白緩沖液,進(jìn)行三次沖洗,每次泵入100ml,并且在兩管內(nèi)接入100CFU試驗(yàn)菌作為試驗(yàn)管Ⅱ組。按照薄膜過(guò)濾法將樣品過(guò)濾到另一管中,使用氯化鈉-蛋白緩沖液進(jìn)行五次沖洗,泵入100ml于培養(yǎng)基中,將相同培養(yǎng)基分別與管進(jìn)行連接,在兩管內(nèi)接入100CFU試驗(yàn)菌作為試驗(yàn)管Ⅲ組,選取改良馬丁培養(yǎng)基與硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基,將另外兩管集菌器泵入至培養(yǎng)基中,將其作為陰性對(duì)照組,以上試管都需要培養(yǎng)3d以上。
3.2 試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)管Ⅰ組結(jié)果:霉菌生長(zhǎng),金黃色葡萄球菌、細(xì)菌、銅綠假單胞菌以及枯草芽孢桿菌不能正常生長(zhǎng)。提示樣品乙酯效果會(huì)影響無(wú)菌檢查結(jié)果判斷,此時(shí)需要應(yīng)用清洗劑將干擾消除。試驗(yàn)管Ⅱ組結(jié)果:銅綠假單胞菌在48h內(nèi)正常生長(zhǎng),金黃色葡萄球菌于5d后生長(zhǎng),生孢梭菌、枯草芽孢桿菌均無(wú)法正常生長(zhǎng),提示樣品抑菌效果未徹底消除,還需要增加清洗劑使用劑量。試驗(yàn)管Ⅲ組結(jié)果:按照試驗(yàn)溫度進(jìn)行培養(yǎng),樣品試驗(yàn)管均清澈,且陽(yáng)性管呈良好生長(zhǎng)態(tài)勢(shì),供試品滿(mǎn)足相關(guān)規(guī)定[5]。根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法所建立的無(wú)菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證,能夠作為左氧氟沙星的無(wú)菌檢查方法。
4、微生物酶發(fā)酵
利用微生物技術(shù),通過(guò)高度工程化的新型綜合技術(shù),以利用微生物反應(yīng)過(guò)程為基礎(chǔ),依賴(lài)于微生物機(jī)體在反應(yīng)器內(nèi)的生長(zhǎng)繁殖及代近程來(lái)合成一定產(chǎn)物,通過(guò)分離納進(jìn)行提取精制,并最終制劑成型來(lái)實(shí)現(xiàn)藥物產(chǎn)品的生產(chǎn)各種酶制劑糖化酶、-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等天冬酰胺酶:抗癌;納豆激酶、鏈激酶:治療血栓青霉素酰化酶:青霉素生產(chǎn)需要誘導(dǎo)或遭受阻遏、抑制等調(diào)控作用,在菌種選育、培養(yǎng)基配制以及發(fā)酵條件等方面需注意。
5、藥品生產(chǎn)企業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的實(shí)例分析
本次研究主要是圍繞甘草提取物粉微生物限度檢查方法為案例進(jìn)行分析討論。
5.1 儀器與材料 選擇高壓滅菌器、細(xì)菌培養(yǎng)箱、生物安全柜、微波爐以及生化培養(yǎng)箱為主要操作儀器。試劑包括甘草提取物粉。培養(yǎng)基:膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、膽鹽乳糖增菌液、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基等試驗(yàn)用菌種:金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、大腸埃希菌。
5.2 方法 第一,制備試驗(yàn)菌株菌液。分別選擇1ml枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌,添加至9ml氯化鈉溶液(0.9%)中進(jìn)行稀釋?zhuān)谱骶鷳乙?。選取1ml白色念珠菌培養(yǎng)物,添加至9ml氯化鈉溶液(0.9%)中進(jìn)行稀釋?zhuān)谱骶鷳乙骸_x取黑曲霉菌培養(yǎng)物,添加至4ml氯化鈉溶液(0.9%)中進(jìn)行洗滌,之后置入空管內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)比濁處理之后,選取1ml溶液于9ml氯化鈉溶液(0.9%)中進(jìn)行稀釋?zhuān)谱骶鷳乙骸5诙?,制備供試液。選取10g樣品,添加至100ml緩沖液中,制作為1:10濃度的供試液。第三,常規(guī)法。選取1ml供試液,加入75cfu試驗(yàn)菌,之后注入到20ml培養(yǎng)基中,制備兩個(gè)平皿,待至培養(yǎng)基凝固后置于常溫進(jìn)行培養(yǎng)觀察,菌落數(shù)計(jì)算結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組,將相應(yīng)添加的菌數(shù)作為菌液組,供試品作為對(duì)照組,對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算。第四,培養(yǎng)基稀釋法。選取供試液,添加75cfu試驗(yàn)菌,按照“常規(guī)法”開(kāi)展試驗(yàn)。結(jié)果如表1所示。
7、結(jié)束語(yǔ)
綜上所述,對(duì)于藥品生產(chǎn)企業(yè)來(lái)說(shuō),必須在無(wú)菌環(huán)境下觀察藥物的抑菌活性效果,通過(guò)驗(yàn)證無(wú)菌檢驗(yàn)方法,可以有效驗(yàn)證此種檢驗(yàn)方法的效果和結(jié)論,充分展現(xiàn)出試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性,加強(qiáng)醫(yī)療檢驗(yàn)的科學(xué)性。使用無(wú)菌檢驗(yàn)法對(duì)藥物質(zhì)量與藥效進(jìn)行檢驗(yàn),能夠有效提升藥品安全性。同時(shí)有助于加強(qiáng)藥品生產(chǎn)企業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)實(shí)力,規(guī)范整個(gè)藥品生產(chǎn)行業(yè),增加藥物治療效果。
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朱天虹,王小喬,許曉輝,等.在食品藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室引入6S管理機(jī)制的探討[J].農(nóng)業(yè)科技與信息,2019(09):54-55+66.