家蠅蛹的營養(yǎng)成分分析及抗氧化肽制備工藝研究

■孫婷婷 楊文哲 張思晨 趙志敏 何國瑞 楊得坡*

（1.中山大學(xué)藥學(xué)院生藥與天然藥化實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510006；2.廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司，廣東廣州510006；3.廣東省現(xiàn)代中藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心，廣東廣州510006)

自由基是細(xì)胞正常代謝的一類產(chǎn)物，在體內(nèi)具有雙重作用，在中低濃度時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞分化、增殖和遷移；參與防御感染因子，屬于先天免疫系統(tǒng)的重要部分；同時(shí)還是多種細(xì)胞信號通路的信號分子[1]。但當(dāng)體內(nèi)的氧化還原體系失去平衡，累積大量極不穩(wěn)定的自由基時(shí)，它們又會損傷核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及各種細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而誘發(fā)細(xì)胞凋亡，甚至壞死，嚴(yán)重時(shí)則引起各種疾病，包括癌癥[2]、心血管疾病[3]、關(guān)節(jié)炎[4]、神經(jīng)退行性疾病等年齡依賴性疾病[5-7]。研究表明，體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)也與衰老存在著密切的聯(lián)系[8-9]。近些年來，人們對這些慢性疾病的密切關(guān)注為抗氧化劑的應(yīng)用提供了廣大的平臺。目前常用的抗氧化劑主要包括化學(xué)合成的抗氧化物質(zhì)[如叔丁基對羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）等]和天然來源的抗氧化物質(zhì)[如抗壞血酸（VC）、谷胱甘肽（GSH）以及一些酶類[10]]。由于化學(xué)合成的抗氧化劑存在潛在的急性毒性和發(fā)育毒性[11]，天然抗氧化劑的應(yīng)用得以擴(kuò)大。過去的二十年間，從可食用動植物中發(fā)現(xiàn)新的抗氧化肽成為研究的熱點(diǎn)[12]，抗氧化肽具有低毒高效，容易吸收的特點(diǎn)，目前主要從水產(chǎn)品和可食用植物中得到，對昆蟲資源的開發(fā)十分匱乏。

家蠅（Musca Domestica）是一種完全變態(tài)的資源型昆蟲，分布廣泛，常見于垃圾堆、糞池中，以腐爛的動物殘骸、糞便、餐廚垃圾為食，具有強(qiáng)大的防御系統(tǒng)。因其生長周期短、繁殖能力強(qiáng)、幼蟲的營養(yǎng)成分豐富，已被開發(fā)成飼料及飼料添加劑[13-14]。臨床上使用家蠅幼蟲進(jìn)行清創(chuàng)治療，可減少傷口的感染，促進(jìn)傷口的愈合[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，蠅蛆體內(nèi)含有豐富的耐高溫抗氧化多肽[16]，蠅蛆酶解多肽具有清除自由基的能力[17]，蠅蛆粉可以通過調(diào)節(jié)UCP4 和CyclinD1 信號通路，以及調(diào)制JNK和P38信號通路來防御阿爾茲海默癥小鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激損傷[18]。但是目前對家蠅的研究主要集中在幼蟲階段，對蛹的研究幾乎空白。蛹是家蠅變態(tài)發(fā)育過程中的重要階段，對生存條件要求極低，含有十分豐富的生物質(zhì)，且其蛋白質(zhì)與幼蟲階段的蛋白質(zhì)存在一定差異，是開發(fā)新的生物活性物質(zhì)的一個重要來源。

研究以家蠅蛹為對象，分析其組成成分，并分別用水提醇沉法、熱變性法和酶解法這三種方法制備得到家蠅蛹抗氧化肽，通過對比得率、多肽含量、分子量分布以及抗氧化活性，比較三種方法制備抗氧化肽的特點(diǎn)及優(yōu)劣，為家蠅蛹的應(yīng)用開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

家蠅蛹由廣東盈亨生物科技有限公司提供，經(jīng)中山大學(xué)藥學(xué)院楊得坡教授鑒定為雙翅目蠅科家蠅的蛹。

堿性蛋白酶（20 萬U/g）購自北京索萊寶科技有限公司；1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）、氯化亞鐵（FeCl2）、菲洛嗪、鄰苯二甲醛、還原型谷胱甘肽（標(biāo)準(zhǔn)品）、VC（標(biāo)準(zhǔn)品）購自上海麥克林生化科技有限公司；二硫蘇糖醇（DTT）購自阿拉?。ㄉ虾＃┯邢薰?；總抗氧化能力檢測試劑盒（ABTS 法）、總抗氧化能力檢測試劑盒（FRAP 法）、Bradford 蛋白濃度測定試劑盒、SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒、快速銀染試劑盒購自碧云天生物技術(shù)公司；無水乙醇、硫酸亞鐵（Fe-SO4）、水楊酸、四硼酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉等分析純試劑購自天津大茂化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；低溫高速離心機(jī)，德國HERMLE 公司；集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；多功能酶標(biāo)儀，德國BMG 公司；pH 計(jì)，上海三信儀表廠；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；冷凍干燥機(jī)，德國Christ公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

收集家蠅鮮蛹，洗凈，低溫處死后烘干，粉碎后過24 目篩，得到家蠅蛹粉。采用索氏抽提法，正己烷為溶劑對家蠅蛹粉進(jìn)行脫脂，通風(fēng)櫥內(nèi)揮干溶劑，得到家蠅脫脂蛹粉，保存于4 ℃待用。

1.3.2 家蠅蛹的成分分析

總蛋白質(zhì)的含量用凱氏定氮法測定[19]；脂肪含量采用索氏抽提法測定[20]，正己烷作為提取溶劑；總糖含量采用硫酸-苯酚法測定[21]；灰分采用高溫灼燒法測定[22]。

將得到的家蠅蛹粉提供給華南理工大學(xué)測試中心進(jìn)行水解氨基酸測試。

1.3.3 水提醇沉法制備家蠅蛹抗氧化肽

根據(jù)王芙蓉等[23]的方法，準(zhǔn)確稱取家蠅脫脂蛹粉10 g，按料液比1∶20用雙蒸水低溫浸提30 min，于5 000 r/min 離心10 min，取上清液，重復(fù)浸提3 次，合并上清液，加入無水乙醇至終濃度為75%，在低溫中靜置2 h 以上，5 000 r/min 離心10 min，取上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后在冷凍干燥機(jī)中干燥，得到家蠅蛹抗氧化肽，稱重，計(jì)算得率。

1.3.4 熱變性法制備家蠅蛹抗氧化肽

根據(jù)王土連等[16]的方法，準(zhǔn)確稱取家蠅脫脂蛹粉10 g，按料液比1∶20 加入雙蒸水，在80 ℃中水浴處理30 min，于5 000 r/min離心10 min，取上清液，在冷凍干燥機(jī)中干燥，得到家蠅蛹抗氧化肽，稱重，計(jì)算得率。

1.3.5 酶解法制備家蠅蛹抗氧化

參考鄭榮等[24]的方法，并根據(jù)實(shí)際情況改進(jìn)部分條件，準(zhǔn)確稱取家蠅脫脂蛹粉10 g，加入20倍量的雙蒸水，混勻，在100 ℃中水浴10 min 使蛋白質(zhì)變性，冷卻至酶解的溫度，調(diào)pH值至9.5，加入8 000 U/g的堿性蛋白酶（按底物質(zhì)量計(jì)算），在55 ℃中恒溫油浴1 h，迅速放入100 ℃水浴中滅活10 min，冷卻至室溫，于5 000 r/min 離心10 min，取上清液，在冷凍干燥機(jī)中干燥，得到家蠅蛹抗氧化肽，稱重，計(jì)算得率。

1.3.6 OPA法檢測多肽的含量

游離的胺基與鄰苯二甲醛（OPA）反應(yīng)可生成黃色絡(luò)合物，在340 nm 處有特征吸收。本研究采用OPA 法檢測樣品中的多肽含量，OPA 試劑配制如下：準(zhǔn)確稱取1.905 g 硼砂，50 mg 十二烷基硫酸鈉，溶于30 ml 雙蒸水，配得溶液A；準(zhǔn)確稱取40 mg OPA，溶于1 ml 無水乙醇，轉(zhuǎn)移至溶液A 中；準(zhǔn)確稱取44 mg 1,4-二巰基蘇糖醇（DTT），加入溶液A 中溶解；最后用雙蒸水定容至50 ml，配得OPA 試劑。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品檢測：使用還原型谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，配制系列濃度（0.062 5、0.125、0.25、0.5、1 mg/ml）的還原型谷胱甘肽標(biāo)準(zhǔn)溶液。將20 μl 樣品溶液和150 μl 的OPA 試劑混勻，精確反應(yīng)2 min，在340 nm 波長處檢測吸光度，繪制濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣品配制成1 mg/ml 的溶液，實(shí)驗(yàn)步驟同上，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算多肽含量。

1.3.7 多肽的分子量分布

用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）-銀染的方法檢測多肽的分子量分布。考馬斯亮藍(lán)法測定樣品中的蛋白質(zhì)含量，每個泳道上樣20 μg，電泳完成后進(jìn)行銀染觀察。

1.3.8 DPPH自由基清除能力

取50 μl 0.4 mmol/l DPPH的乙醇溶液和50 μl樣品溶液加入96孔板，混勻后靜置30 min，于519 nm測得吸光度。VC 和谷胱甘肽作為陽性對照。DPPH 自由基的清除率按照下式計(jì)算：

清除率（%）=[1-(A2-A1）/A0]×100

式中：A0——空白組，以蒸餾水代替待測溶液量(ml)；

A1——對照組，以無水乙醇代替DPPH溶液量(ml)；

A2——試驗(yàn)組，即加入待測溶液量(ml)。

1.3.9 ABTS自由基清除能力

根據(jù)試劑盒的方法，在96 孔板中加入200 μl ABTS 工作液和10 μl 待測溶液，混勻后室溫孵育5 min，于740 nm 處檢測吸光度。維生素C 和谷胱甘肽作為陽性對照。ABTS 自由基清除率按照下式計(jì)算：

清除率（%）=（1-A1/A0）×100

式中：A0——空白組，以蒸餾水代替待測溶液量(ml)；

A1——試驗(yàn)組，即加入待測溶液量(ml)。

1.3.10 羥基自由基清除能力

采用水楊酸-硫酸亞鐵反應(yīng)體系，將8 μl 18 mmol/l水楊酸、52 μl 樣品溶液、8 μl 18 mmol/l FeSO4溶液混勻，加入32 μl 0.1% H2O2啟動反應(yīng)，靜置30 min，于510 nm處檢測吸光度。VC作為陽性對照。羥基自由基清除率按照下式計(jì)算：

清除率（%）=[1-(A2-A1）/A0]×100

式中：A0——空白組，以蒸餾水代替待測溶液量(ml)；

A1——對照組，以蒸餾水代替FeSO4溶液量(ml)；

A2——試驗(yàn)組，即加入待測溶液量(ml)。

1.3.11 FRAP法測試還原能力

標(biāo)準(zhǔn)曲線測定：配制系列濃度（0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/l）的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)FeSO4·7H2O，96 孔板的每個檢測孔中加入180 μl FRAP 工作液、5 μl待測溶液，37 ℃孵育3～5 min，于539 nm 測定吸光值，繪制濃度-吸光度曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的還原能力，表示為N mg/ml 樣品的還原能力為X mmol/l FeSO4·7H2O。VC 和谷胱甘肽作為陽性對照。

1.3.12 亞鐵離子螯合能力

亞鐵離子能與菲洛嗪絡(luò)合形成紫色絡(luò)合物，在562 nm 處有特征吸收，本文采用亞鐵離子-菲洛嗪體系檢測抗氧化肽的亞鐵螯合能力。將70 μl待測溶液、10 μl FeCl2溶液、20 μl 菲洛嗪溶液混合均勻，室溫孵育10 min，于562 nm 測得吸光度。EDTA-2Na 作為陽性對照。亞鐵離子螯合能力按照下式計(jì)算：

亞鐵離子螯合能力（%）=[1-(A2-A1）/A0]×100

式中：A0——空白組，以蒸餾水代替待測溶液量(ml)；

A1——對照組，以蒸餾水代替FeCl2溶液量(ml)；

A2——試驗(yàn)組，即加入待測溶液量(ml)。

1.3.13 單因素試驗(yàn)優(yōu)化酶解工藝

本文探索了酶解溫度、時(shí)間和加酶量三個因素對產(chǎn)物抗氧化能力的影響。a. 酶解溫度：在料液比為1∶20、pH 值9.5、時(shí)間30 min、加酶量8 000 U/g 的條件下，考察系列酶解溫度（45、50、55、60、65 ℃）對產(chǎn)物的DPPH 自由基清除能力的影響；b. 酶解時(shí)間：在料液比為1∶20、pH 值9.5、溫度55 ℃、加酶量8 000 U/g 的條件下，考察系列酶解時(shí)間（15、30、45、60、75 min）對產(chǎn)物的DPPH 自由基清除能力的影響；c. 加酶量：在料液比為1∶20、pH 值9.5、溫度55 ℃、時(shí)間30 min的條件下，考察系列加酶量（2 000、4 000、6 000、8 000、10 000 U/g）對產(chǎn)物的DPPH 自由基清除能力的影響。

1.4 數(shù)據(jù)分析

所有試驗(yàn)均重復(fù)3次，取“平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差”作為最終結(jié)果，用GraghPad Prism 5.0軟件處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 家蠅蛹的成分分析（見表1、表2）

表1 家蠅蛹的主要成分分析（n=3，%）

表2 家蠅蛹的氨基酸組成（g/100 g蛹粉）

如表1 所示，雞蛋、牛乳、大豆、柞蠶蛹和秘魯魚粉均是目前市場上高蛋白質(zhì)的食品或飼料，家蠅蛹的營養(yǎng)成分豐富，蛋白質(zhì)含量為63.13%，高于雞蛋、牛乳、大豆和柞蠶蛹，與秘魯魚粉的蛋白質(zhì)含量相當(dāng)。而脂肪含量低于雞蛋、牛乳和柞蠶蛹，略高于大豆，具有開發(fā)成高蛋白質(zhì)飼料添加劑的潛力。

家蠅蛹的氨基酸組成如表2，共檢測了17種氨基酸，合計(jì)約54.6 g/100 g蛹粉，其中必需氨基酸占總氨基酸（EAA/TAA）的36.26%，說明家蠅蛹具有較好的營養(yǎng)價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)[25]，肽中疏水氨基酸、芳香族氨基酸以及酸性氨基酸的含量與抗氧化活性具有密切的聯(lián)系。疏水氨基酸可與脂肪酸自由基結(jié)合，中斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；芳香族氨基酸是質(zhì)子供體，通過共振平衡，使吲哚自由基和苯氧自由基保持穩(wěn)定；酸性氨基酸側(cè)鏈結(jié)構(gòu)中的羧基殘基會對一些金屬離子（Fe2+、Cu+）具有鈍化作用。本研究的結(jié)果顯示，家蠅蛹中酸性氨基酸占總氨基酸的20.15%，疏水性氨基酸占總氨基酸的48.90%，芳香族氨基酸占總氨基酸的12.27%，這三類與抗氧化活性相關(guān)的氨基酸占總氨基酸的56.96%，表明家蠅蛹中極可能含有豐富的抗氧化肽段。

2.2 抗氧化肽的制備得率及多肽含量（見表3）

表3 三種方法制備抗氧化肽的產(chǎn)率及多肽含量對比(%)

表3的研究結(jié)果顯示，酶解法制備抗氧化肽的得率最高，達(dá)到70.80%，是熱變性法（25.11%）和水提醇沉法（18.35%）的兩倍以上。根據(jù)圖1 所示的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，采用還原型谷胱甘肽作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，檢測計(jì)算得到多肽的濃度與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線的相關(guān)系數(shù)較高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，酶解法得到的多肽類物質(zhì)最高，占終產(chǎn)物的66.50%，水提醇沉法和熱變性法的效率不及酶解法，分別提取到53.87%和43.33%的多肽。

圖1 OPA法測多肽含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 抗氧化肽的分子量分布

三種方法制備的抗氧化肽的SDS-PAGE-銀染結(jié)果如圖2，酶解法制備的抗氧化肽主要集中在10 kD及以下；熱變性法制備的抗氧化肽主要有三個分子段，包含分子量在60～70 kD的熱穩(wěn)定性蛋白、分子量在35～45 kD 的熱穩(wěn)定性蛋白質(zhì)以及分子量在10 kD及以下的肽段。對比來看，酶解法可以將大分子量的蛋白質(zhì)水解成較小的肽段，且肽類的含量豐富，熱變性法制備的不僅含有多肽，還存在大量蛋白質(zhì)，水提醇沉法能夠?qū)⒋蠓肿拥牡鞍踪|(zhì)除盡，但小分子量的肽段也會被部分除去。

圖2 三種方法制備的抗氧化肽的分子量分布

2.4 抗氧化肽的活性研究

圖3、圖4、圖5 為三種方法制備的抗氧化肽的自由基清除能力對比圖，VC 或谷胱甘肽為陽性對照。由圖可知，三種方法制備的抗氧化肽均具有DPPH自由基、ABTA自由基和羥基自由基清除能力，且都具有濃度依賴性。熱變性法制備的抗氧化肽的自由基清除能力最強(qiáng)，在0.25 mg/ml的濃度下，DPPH自由基清除率就達(dá)到了82.5%，超過了同等濃度的谷胱甘肽；在2 mg/ml 的濃度下，羥基自由基清除率達(dá)到了100%。酶解法制備的抗氧化肽的自由基清除能力也較強(qiáng)，在0.625 mg/ml 的濃度下，DPPH 自由基清除率達(dá)到82.3%；當(dāng)酶解物的濃度為4 mg/ml 時(shí)，羥基自由基清除率達(dá)到91.2%。相比之下，水提醇沉法制備的抗氧化肽活性最弱。三種方法制備的抗氧化肽的自由基清除能力的IC50值如下：①DPPH自由基清除能力的IC50：0.383（WAM）、0.108（TDM）、0.324 mg/ml（EHM）；②ABTS 自由基清除能力的IC50：1.924（WAM）、0.604（TDM）、0.971 mg/ml（EHM）；③羥基自由基清除能力的IC50：2.227（WAM）、0.704（TDM）、1.684 mg/ml（EHM）。

圖3 三種方法制備的抗氧化肽的DPPH自由基清除能力

圖4 三種方法制備的抗氧化肽的ABTS自由基清除能力

圖5 三種方法制備的抗氧化肽的羥基自由基清除能力

圖6是FRAP法檢測三種方法制備的抗氧化肽的還原能力的結(jié)果，從圖中的結(jié)果可知，三種方式制備的抗氧化肽的還原能力均大于谷胱甘肽，其中熱沉淀法的活性最好，水提醇沉法和酶解法制備的抗氧化肽的還原能力相似。

圖7 是三種方法制備的抗氧化肽的亞鐵離子螯合能力結(jié)果，EDTA-2Na作為陽性對照。圖中的結(jié)果顯示，酶解法和熱變性法制備抗氧化肽的亞鐵離子螯合能力較強(qiáng)，水提醇沉法制備的抗氧化肽的活性較弱，但都具有濃度依賴性。其中，酶解法的活性最強(qiáng)，在濃度為3 mg/ml時(shí)，螯合能力就達(dá)到了95%以上，其次為熱變性法，這兩種方法制備的多肽在6 mg/ml 的濃度時(shí)，螯合能力都趨近于100%。三種方法制備的抗氧化肽的亞鐵離子螯合能力的IC50值分別為：9.677（WAM）、0.994（TDM）、0.567 mg/ml（EHM）。

圖6 FRAP法檢測三種方法制備的抗氧化肽的還原能力

圖7 三種方法制備的抗氧化肽的亞鐵離子螯合能力

綜合來看，熱變性法和酶解法制備的多肽的抗氧化活性較好，而水提醇沉法的活性較弱，活性的高低可能與蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的打開程度以及活性肽段的暴露程度有密切聯(lián)系。但熱變性法制備的產(chǎn)物中多肽含量不高，含有較多的熱穩(wěn)定性蛋白質(zhì)，可能也貢獻(xiàn)了部分抗氧化活性[16]。結(jié)合上面的試驗(yàn)結(jié)果，熱變性法可制備得到熱穩(wěn)定性的抗氧化肽/蛋白質(zhì)，酶解法制備的產(chǎn)物中多肽類物質(zhì)含量豐富，抗氧化活性強(qiáng)，為發(fā)現(xiàn)家蠅蛹中新的抗氧化肽提供了技術(shù)手段支撐。

2.5 單因素試驗(yàn)優(yōu)化酶解工藝

單因素試驗(yàn)的結(jié)果如圖8 所示，圖8(A)：溫度對酶解物的活性影響較為明顯，當(dāng)溫度從45 ℃上升至60 ℃時(shí)，酶解物的DPPH 自由基清除率逐漸上升，酶解溫度為60 ℃時(shí)，清除率達(dá)到60.3%，當(dāng)酶解溫度繼續(xù)上升時(shí)，酶解物的自由基清除能力呈現(xiàn)下降的趨勢，可能與高溫破壞了堿性蛋白酶的活性有關(guān)；圖8(B)：當(dāng)酶解時(shí)間為30 min 時(shí)，酶解物的自由基清除能力達(dá)到最大值，為59.4%，之后隨著提取時(shí)間延長，活性呈緩慢降低趨勢，可能是水解過度的原因；圖8(C)：加酶量對酶解物的活性影響較弱，當(dāng)加酶量為6 000 U/g 時(shí)，酶解物的活性最好，再增加加酶量，酶解物的自由基清除能力趨于穩(wěn)定。

圖8 單因素試驗(yàn)優(yōu)化酶解工藝

綜上所述，確定最佳的酶解條件為溫度60 ℃、時(shí)間30 min、加酶量6 000 U/g，在此條件下，0.5 mg/ml的酶解物的DPPH自由基清除率為61.7%。

3 結(jié)論

本研究分析了家蠅蛹的基本成分，家蠅蛹含有豐富的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，且氨基酸成分中與抗氧化活性相關(guān)的芳香族氨基酸、疏水性氨基酸和酸性氨基酸含量較高，占總氨基酸成分的56.96%，為制備抗氧化肽提供了依據(jù)。隨后，用水提醇沉法、熱變性法和酶解法制備得到了家蠅蛹抗氧化肽，其中酶解法制備抗氧化肽的產(chǎn)率最高，達(dá)到70.80%，酶解物中的多肽含量最高，達(dá)到66.50%，且該方法制備的抗氧化肽主要集中在10 kD 及以下，不含大分子的蛋白質(zhì)，所以該方法制備多肽的效率最高。對比三種方法制備的抗氧化肽的活性可知，熱變性法制備的抗氧化肽（含有部分大分子的熱穩(wěn)定性蛋白質(zhì)）清除自由基的能力和對Fe3+還原能力最強(qiáng)，而酶解法制備的抗氧化肽的亞鐵離子螯合能力最強(qiáng)，說明以上兩種方法均可作為篩選抗氧化活性物質(zhì)的方案，結(jié)合家蠅蛹的氨基酸成分分析，也進(jìn)一步論證了家蠅蛹中含有豐富的抗氧化活性的肽類物質(zhì)。最后，本研究還進(jìn)一步優(yōu)化了酶解法的工藝條件，單因素結(jié)果顯示，在溫度60 ℃、時(shí)間30 min、加酶量6 000 U/g 的條件下，可以獲得自由基清除能力最強(qiáng)的酶解物。至于家蠅蛹中或家蠅蛹的酶解物中發(fā)揮抗氧化活性的具體成分，還有待進(jìn)一步的研究。