唐 盈，林佩萱，陳 翊，鐘家禹，謝嘉慧，朱 冰

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心a.中心實(shí)驗(yàn)室；b.計(jì)劃生育科，廣州 510120)

泌尿生殖道感染是全球范圍內(nèi)危害嚴(yán)重的重要性傳播疾病之一，沙眼衣原體(chlamydiatrachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(neisseriagonorrhoeas，NG)、解脲脲原體(ureaplasmaurealyticum，UU)和生殖支原體(mycoplasmagenitalium，MG)是引起人類泌尿生殖道疾病常見的4種病原微生物，其主要通過性接觸被感染，易造成女性泌尿生殖道炎癥、流產(chǎn)、不孕不育和異位妊娠等不良結(jié)局，嚴(yán)重威脅女性生殖健康[1]。廣州屬于經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)，人口流動(dòng)規(guī)模較大，是疾病感染和傳播的高發(fā)地。近年來，由于CT，NG，UU和MG發(fā)病率逐年增加并且存在著多種病原體混合感染，病原體的多樣性和耐藥性的產(chǎn)生給臨床診療帶來極大的挑戰(zhàn)。由于傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法存在著一定的局限性，采用新一代技術(shù)實(shí)時(shí)熒光核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測技術(shù)(simultaneous amplification and testing，SAT)能更快速、精準(zhǔn)地檢出各種生殖道病原體[2-3]。為了解廣州地區(qū)女性泌尿生殖道患者4種病原體的感染情況，對廣州市婦女兒童醫(yī)療中心近2年門診女性患者進(jìn)行CT，MG，NG和UU檢測，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2017年1月～2018年12月首次在我院婦科、計(jì)劃生育科、泌尿科、生殖免疫科等門診就診的女性患者的宮頸分泌物或尿液標(biāo)本共計(jì)2 388份。患者年齡15～70歲，平均年齡31.66±6.45歲，首診通常表現(xiàn)為尿頻、尿急、腹痛、白帶增多等泌尿生殖道感染癥狀或月經(jīng)不規(guī)則、流產(chǎn)、不孕不育等其他病癥。

1.2 試劑和儀器 CT，MG，NG，UU實(shí)時(shí)熒光核酸等溫?cái)U(kuò)增檢測試劑盒由上海仁度生物科技有限公司提供，采用美國ABI-7500型和ABI-7300型熒光定量 PCR儀進(jìn)行測定。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集和保存：宮頸分泌物2 357份，尿液31份。宮頸分泌物標(biāo)本由婦科醫(yī)生采集，用無菌棉拭子伸入宮頸口內(nèi)旋轉(zhuǎn)1周，停留10 s后取出放入1 ml生理鹽水中密封送檢；尿液標(biāo)本由患者自行留取首段尿液，送檢后吸取標(biāo)本1 ml加入1 ml尿液保存液，于3天內(nèi)檢測。

1.3.2 檢測方法：采用新一代病原體RNA檢測技術(shù)SAT法進(jìn)行擴(kuò)增。具體擴(kuò)增條件為42℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)，熒光通道為FAM；每批檢測均設(shè)立陰、陽性對照及質(zhì)控。根據(jù)擴(kuò)增曲線和循環(huán)數(shù)判讀結(jié)果，dt≤35為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Excel 2007和SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CT，MG，NG和UU感染情況分析 見表1。兩年間4種病原體均有陽性檢出率，UU的陽性檢出率最高，其陽性率明顯高于其他3種病原體，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3 561.6，P<0.01)。MG檢出率2018年略高于2017年，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.752，P>0.05)。

表12017～2018年四種病原體檢測結(jié)果[n(%)]

年份nCTMGNGUU2017年2018年合 計(jì)1 0461 3422 38871(6.79)86(6.41)157(6.57)12(1.15)21(1.56)33(1.38)8(0.76)7(0.52)15(0.63)569(54.40)714(53.20)1 283(53.73)

2.2 CT，MG，NG和UU感染類型分布 見表2。4種病原體總檢出率為55.78%，1 332份陽性病例中共檢出12種不同感染類型，以單一UU感染率最高，其次分別為CT+UU混合感染，單獨(dú)CT感染。感染1種病原體的女性患者有1 186例，合并感染2種病原體的有137例，合并感染3種病原體的有8例，發(fā)現(xiàn)1例女性患者同時(shí)感染4種病原體。CT，MG，NG及UU的陽性患者中混合感染率分別為75.16%(118/157)，81.82%(27/33)，86.67%(13/15)和11.22%(144/1 283)。

表22 388例女性患者不同感染類型陽性率及構(gòu)成比

感染類型陽性數(shù)陽性率(%)構(gòu)成比(%)單獨(dú)UUCT+UU單獨(dú)CTMG+UUNG+UU單獨(dú)MGCT+MG+UUCT+NG+UU單獨(dú)NGCT+MGCT+NGCT+MG+NG+UU1 13910739208653211147.704.481.630.840.340.250.210.130.080.040.040.0485.518.032.931.500.600.450.380.230.150.080.080.08

2.3 不同年齡段女性患者CT，MG，NG及UU感染情況 見表3。21～40歲年齡組送檢樣本數(shù)最多，21～40歲女性為泌尿生殖系統(tǒng)疾病高危人群。UU在各年齡組均有較高的檢出率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.928，P<0.05)。15～20歲年齡段4種病原體陽性檢出率均最高，但樣本含量較少。

2.4 不同臨床癥狀女性患者病原體檢測情況 見表4。診斷為泌尿生殖系統(tǒng)炎癥(包括尿道炎、宮頸炎、盆腔炎等)、不孕癥或月經(jīng)不調(diào)的女性患者病原體的檢出率高于其他臨床診斷患者，各組檢出率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=173.2，P<0.01)。

表3 不同年齡段女性患者CT，MG，NG及UU感染情況

表4 不同臨床癥狀女性患者檢測結(jié)果

3 討論

CT，NG，MG和UU是通過性接觸感染的4種病原體，國際上被列為性傳播疾病，簡稱性病。我國從上世紀(jì)九十年代開始，以淋病為代表的性病逐漸轉(zhuǎn)變成以CT，UU和MG引起的泌尿生殖系統(tǒng)感染為主。自2011年以來，我國淋病發(fā)病率呈現(xiàn)下降趨勢，非淋菌性病原體的發(fā)病有所增加。本研究對2 388例泌尿生殖系統(tǒng)疾病患者分別檢測了CT，MG，NG和UU，總檢出率為55.78%，符合國內(nèi)性病的流行現(xiàn)狀。其中，CT和UU的陽性率均高于方偉禎等[4]報(bào)道的廣州地區(qū)2015～2016年女性CT陽性率(4.49%)和UU陽性率(45.10%)，說明CT和UU的感染率呈現(xiàn)增長趨勢，但不能排除不同時(shí)期的人群特點(diǎn)和年齡分布不同等因素造成的差異。檢測結(jié)果均低于王敬仁等[5]報(bào)道的柳州地區(qū)CT陽性率(12.20%)、UU陽性率(64.97%)和NG陽性率(3.47%)，原因除了與地域不同有關(guān)外，很大可能是本研究采用了新一代病原體RNA檢測技術(shù)，與傳統(tǒng)的 PCR 法相比，該方法檢測的是活的病原體中的RNA，RNA在環(huán)境中比較容易降解從而有效避免了假陽性。

MG是人類泌尿生殖道感染的重要病原菌之一。早在1981年，Tully從13例非淋菌性尿道炎的男性病人中分離出2株MG。在美國和加拿大等國家醫(yī)院的婦科、性病等門診就診女性患者中，MG的發(fā)病率已超過CT和NG[7-8]。MG可引發(fā)多種疾病[9]，是可能比UU危害更大的生殖健康殺手。WHO性傳播疾病診斷指南(2013)中將核酸擴(kuò)增技術(shù)作為MG唯一的診斷方法。本文對MG采用SAT法檢測，結(jié)果提示MG多為并發(fā)感染。目前，SAT法檢測MG僅在國內(nèi)少數(shù)機(jī)構(gòu)開展，由于MG的致病機(jī)制和耐藥性仍不清楚，臨床上缺乏MG患病率的數(shù)據(jù)，建議臨床上將MG作為高風(fēng)險(xiǎn)人群的常規(guī)篩查項(xiàng)目之一。

由表1可見，UU在廣州地區(qū)女性泌尿生殖道疾病中的檢出率最高，這與國內(nèi)外諸多報(bào)道一致。有學(xué)者報(bào)道[6]UU在女性感染中更多見，其原因可能由于一方面UU在女性泌尿生殖道有高度定居性，其中相當(dāng)一部分支原體感染者都是沒有自覺癥狀不接受診療；另一方面，由于女性泌尿生殖系統(tǒng)的特征，支原體更容易侵犯女性泌尿生殖道。表2中，混合感染共146例，占陽性檢出人群的10.96%(146/1 332)，以CT+UU居多。泌尿生殖道病原體混合感染是患者臨床治療不徹底、易反復(fù)發(fā)作的原因之一。臨床上不能忽視這幾種病原體的協(xié)同感染，建議醫(yī)生在為患者診治前，應(yīng)同時(shí)檢測CT，MG，UU和NG，一方面可以防止某種病原體的漏診，另一方面可以為臨床用藥提供治療依據(jù)，提高治愈率。

表3提示，UU是本地區(qū)女性主要的流行病種。病原體感染主要集中在21～40歲組，可能與此年齡段的女性性生活活躍有關(guān)。15～20歲年齡段女性由于抵抗力低下加上缺乏正確的性健康知識(shí)、容易受感染造成陽性檢出率最高，不排除此年齡段檢測病例數(shù)較少，存在統(tǒng)計(jì)誤差。不同臨床癥狀女性患者病原體檢測結(jié)果顯示排在前三位的癥狀分別為泌尿生殖道炎癥、月經(jīng)不調(diào)和不孕癥。女性泌尿生殖道感染臨床上除了表現(xiàn)為尿道炎、宮頸炎、盆腔炎等之外遠(yuǎn)期還可造成流產(chǎn)、輸卵管性不育、異位妊娠等嚴(yán)重的不良結(jié)局。后續(xù)應(yīng)對年輕女性開展流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室篩查，同時(shí)加大宣傳教育力度，進(jìn)行早期預(yù)防和干預(yù)。

SAT技術(shù)是將新一代核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光檢測技術(shù)結(jié)合起來的一種新型核酸檢測技術(shù)，SAT技術(shù)檢測UU-RNA，CT-RNA和NG-RNA已被廣泛應(yīng)用于臨床[4]，SAT的優(yōu)點(diǎn)同樣適用于MG篩查，由于SAT技術(shù)以RNA 為目標(biāo)，其靈敏度高且特異度好，一份標(biāo)本可以同時(shí)檢測4種病原體，尿液采集簡便，減輕了患者取材的痛苦。

目前，國家推行“二孩”政策，人口政策從原來的計(jì)劃生育逐漸轉(zhuǎn)向優(yōu)生優(yōu)育，較多育齡夫婦有再生育要求，建議地方政府將CT，NG，MG和UU納入孕前、產(chǎn)前及不孕癥檢查的篩查項(xiàng)目，對控制疾病的傳播具有重要意義。