采用顯微鑒別方法對(duì)柴胡藥材質(zhì)量的分析研究

河南省新鄉(xiāng)市中醫(yī)院（453000）韓麗新

柴胡在中醫(yī)學(xué)上屬于一類常用的中藥，其性味涼且苦，可發(fā)揮解熱、抗菌、鎮(zhèn)靜、抗病毒(流感病毒)、抗肝損傷等功效[1]。據(jù)《中國(guó)藥典》記載，柴胡一般類型為狹葉柴胡或傘形科植物柴胡的干燥根[2]。目前，在化學(xué)成分分析、醫(yī)學(xué)、栽培技術(shù)等領(lǐng)域?qū)Σ窈难芯肯鄬?duì)比較集中[3]，但鮮有報(bào)道通過(guò)顯微鑒別方法對(duì)不同產(chǎn)地柴胡的藥材質(zhì)量進(jìn)行研究，本文通過(guò)收集來(lái)自不同產(chǎn)地的柴胡樣品，以期通過(guò)顯微鑒別方法來(lái)評(píng)價(jià)柴胡藥材質(zhì)量，為臨床上提供判定依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 材料 試驗(yàn)設(shè)備器材：切片機(jī)(生產(chǎn)商：石家莊現(xiàn)代儀器儀表公司)，DGF-4A型立式電熱鼓風(fēng)干燥箱(生產(chǎn)商：天津市泰斯特儀器公司)，電熱恒溫水浴鍋(生產(chǎn)商：北京科偉永興儀器公司)，萬(wàn)用電爐(生產(chǎn)商：石家莊現(xiàn)代儀器儀表公司)，解剖刀，毛筆，鑷子，染色缸，酒精燈，玻片架。

1.2 試驗(yàn)試劑 石蠟，二甲苯、無(wú)水乙醇、甲醛、冰乙酸，蕃紅染液、樹膠、固綠染液。

1.3 試驗(yàn)藥材 于2017年1月～2018年1月收集了24個(gè)柴胡樣品。見附表1。

2 方法

（1）取材：洗凈收集的藥材，并去除雜質(zhì)，以溫水將其軟化（約1h），最后切成段備用（約0.5～1cm）。（2）制蠟片：①軟化：先將小瓶編號(hào)，再將備好的藥材放入小瓶中，并記錄下來(lái)，之后倒入軟化劑封上（軟化24h）。②固定：再將固定液FAA倒入裝有材料的小瓶中（固定24h）。③脫水：先后以50%、70%和90%的酒精對(duì)其脫水2h、2h和1.5h，最后再以無(wú)水乙醇脫水1.5h。④透明：先后以25%和75%二甲苯(酒精稀釋)將藥材透明1h和0.5h，之后，再以無(wú)水二甲苯透明20min。⑤滲蠟：分別在37、45和55℃下進(jìn)行滲蠟處理5h，2h和3h，保持在62℃時(shí)，2h換蠟1次。⑥包埋：使蠟盒中的蠟維持固態(tài)，將滲蠟處理完成的藥材放入蠟盒，靜置，直至蠟自然凝固。⑦切片和拷片：用切片機(jī)對(duì)樣品切橫切片（厚度9um），并將其在60℃拷2h。⑧染色：拷片過(guò)后的藥材先后在二甲苯(20min)，無(wú)水乙醇(15min)，95%乙醇(10min)，85%乙醇(8min)，70%乙醇(5min)中浸泡，最后將其置入翻紅染液中（浸泡一夜），之后再在酸性酒精（15min），85%乙醇（10min），95%乙醇（8min），固綠染液（2s），無(wú)水酒精(20min)和二甲苯（25min）中依次浸泡。⑨封片：染色完成后以樹膠對(duì)其封片。（3）在光學(xué)顯微鏡下對(duì)其顯微特征進(jìn)行觀察記錄，并簡(jiǎn)易繪制出其結(jié)構(gòu)圖。

附表1 柴胡樣品

3 結(jié)果

顯微鑒別特征：產(chǎn)地為河北的柴胡大部分油管分布密集，排列較整齊，其中以石家莊市靈壽縣南營(yíng)鄉(xiāng)的油管分布最密集；而產(chǎn)地為甘肅的部分市縣的柴胡油管分布相對(duì)較多，如甘肅隴西縣菜子鎮(zhèn)、甘肅策底米家梁和甘肅漳縣；產(chǎn)地為河南的柴胡的油管大部分分布比較疏散。山西產(chǎn)地的柴胡僅有部分市縣的油管分布多。

此外，柴胡產(chǎn)地在甘肅和河北的柴胡皂苷含量較高，而河南和山西所產(chǎn)的柴胡皂苷含量比較少。因此，我們認(rèn)為甘肅和河北生產(chǎn)的柴胡質(zhì)量較好，具體見附表2。

4 討論

在中藥鑒定中，顯微鑒定是一種常用手段，其能通過(guò)對(duì)藥材細(xì)胞形狀、組織構(gòu)造、和成分特征進(jìn)行觀察，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)藥材真?zhèn)魏推焚|(zhì)的鑒定[4][5]。該方法的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確且快捷，并且可以配合其它鑒定分析方法，有效的將中藥鑒定質(zhì)量提高[6]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地的柴胡藥材進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)了從顯微、性狀，再到成分的多重指標(biāo)控制，較傳統(tǒng)單一成分控制，有了新的突破，其在對(duì)中藥材質(zhì)量的控制方面有著較強(qiáng)的合理性。本實(shí)驗(yàn)在現(xiàn)有的樣品中得出柴胡質(zhì)量與其纖維和油管數(shù)相關(guān)，但考慮到本研究樣品有限，研究?jī)?nèi)容僅僅考慮了柴胡的顯微和化學(xué)成分，因此需要結(jié)合藥理做進(jìn)一步研究。