覃惠明 黃杰 羅福廣 文衍紅 易弋

摘要：為給水產(chǎn)養(yǎng)殖戶使用二氧化氯進(jìn)行池塘消毒提供科學(xué)依據(jù)，以大腸桿菌和無(wú)乳鏈球菌為測(cè)試對(duì)象，研究了二氧化氯在不同濃度和不同時(shí)間下的殺菌效果。結(jié)果表明：使用真實(shí)含量為6%左右的二氧化氯片，用量在6.0kg/hm2時(shí)（按1m水深計(jì)）有非常好的殺菌效果，殺菌率超過(guò)90%。此外，二氧化氯殺菌時(shí)間較快，在合理的濃度下，處理30～45min左右就能夠達(dá)到較好的效果。

關(guān)鍵詞：二氧化氯;消毒;細(xì)菌;水產(chǎn)養(yǎng)殖

二氧化氯（ClO2）是一種黃綠色到橙黃色的氣體，是國(guó)際上公認(rèn)的安全、無(wú)毒的綠色消毒劑，無(wú)“三致”效應(yīng)（致癌、致畸、致突變），同時(shí)在消毒過(guò)程中也不與有機(jī)物發(fā)生氯代反應(yīng)生成可產(chǎn)生“三致作用”的有機(jī)氯化物或其他有毒類物質(zhì)[1]。由于其安全性和高效性，二氧化氯已成為繼第一代消毒劑漂白粉、第二代優(yōu)氯精、第三代強(qiáng)氯精后的第四代消毒劑，是世界公認(rèn)并得到世界衛(wèi)生組織確認(rèn)的A1級(jí)廣譜、安全、高效消毒劑[2]。1983年，美國(guó)的環(huán)保部門和食品藥品管理部門以及農(nóng)林牧漁管理部門等先后批準(zhǔn)二氧化氯可作為消毒劑在農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)等領(lǐng)域使用[3]。

近年來(lái)，在國(guó)內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，二氧化氯作為治療和預(yù)防疾病的消毒劑，因其對(duì)魚(yú)、蝦、蟹、貝類等具有療效好、毒性低、刺激性小，以及對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物致病菌以及芽胞等具有較強(qiáng)的殺滅能力等優(yōu)點(diǎn)，已得到廣泛應(yīng)用[4]。但目前市面上的二氧化氯消毒劑質(zhì)量參差不齊，使用方法也差異巨大[5]。比如，標(biāo)注有效含量均為10%的產(chǎn)品，各廠家在使用說(shuō)明上推薦的用量也從750～3000g/hm2（即50～200g/畝，按1m水深計(jì)，下同）不盡相同，這給養(yǎng)殖戶們正確使用二氧化氯造成了巨大的困惑。要確定水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用二氧化氯進(jìn)行池塘消毒的準(zhǔn)確用量，就必須對(duì)二氧化氯的殺菌效果進(jìn)行詳細(xì)研究。國(guó)內(nèi)也有研究者開(kāi)展了相關(guān)的工作[6-8]，但其是按照商品標(biāo)注的二氧化氯含量計(jì)算的工作狀態(tài)下的二氧化氯濃度，而沒(méi)有考慮商品本身的含量是否達(dá)標(biāo)。而且這些研究中的濃度是以mg/L為單位，而不是養(yǎng)殖戶習(xí)慣的g/畝。這樣的結(jié)果對(duì)于指導(dǎo)養(yǎng)殖戶科學(xué)使用二氧化氯意義不大。因此，筆者采購(gòu)了市面上2種不同價(jià)位的水產(chǎn)用二氧化氯消毒劑，實(shí)測(cè)了其含量，并以養(yǎng)殖戶熟悉的g/畝的用量測(cè)試了其抑菌效果，以期為水產(chǎn)養(yǎng)殖戶使用二氧化氯進(jìn)行池塘消毒提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1二氧化氯

本研究中使用的2個(gè)品牌的一元二氧化氯消毒劑均從廣西柳州市本地市場(chǎng)購(gòu)買，品牌A零售價(jià)20元/kg，品牌B售價(jià)26元/kg，商品標(biāo)注二氧化氯含量均為10%。

1.2菌種和培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)所使用的大腸桿菌為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)大腸桿菌JM109，無(wú)乳鏈球菌分離自羅非魚(yú)[9]，均由廣西科技大學(xué)微生物研究室提供。培養(yǎng)細(xì)菌所用腦心浸液肉湯（BHI）培養(yǎng)基購(gòu)自北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.3化學(xué)試劑

本研究中所使用到的NaCl、KI等化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2方法

2.1二氧化氯含量測(cè)定

二氧化氯含量測(cè)定采用國(guó)標(biāo)GB/T20783-2006和改良五步碘量法進(jìn)行。改良五步碘量法具體操作步驟參考文獻(xiàn)[10]。最后根據(jù)所取二氧化氯片的質(zhì)量和溶解體積換算成固體產(chǎn)品中二氧化氯的含量。

2.2細(xì)菌培養(yǎng)

按說(shuō)明書(shū)制備BHI液體和固體培養(yǎng)基，分別取10μL大腸桿菌和無(wú)乳鏈球菌甘油種于50mLBHI液體培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)12h（此時(shí)菌體濃度約為109CFU/mL左右）。然后用滅菌生理鹽水逐級(jí)稀釋200000倍備用（此時(shí)菌體濃度估計(jì)在103～104CFU/mL左右）。

2.3二氧化氯母液制備

準(zhǔn)確稱取1片一元二氧化氯片劑的質(zhì)量，分別按15、30、45和60kg/hm2（即1000、2000、3000和4000g/畝，按1m水深計(jì)）的用量換算需要用多少體積的水溶解二氧化氯片。如果換算出來(lái)需要的水體積太多，可以減少水的體積，先配制高濃度的溶液，再進(jìn)行稀釋（為保證濃度準(zhǔn)確，每次稀釋最多按10倍進(jìn)行）。

2.4不同用量二氧化氯消毒劑殺菌試驗(yàn)

取2.2中制備的稀釋后的菌液4.5mL，分別取2.3中制備的二氧化氯母液0.5mL混合均勻，此時(shí)二氧化氯工作濃度分別為1.5、3.0、4.5和6.0kg/hm2（即按1m水深計(jì)，分別為100、200、300、和400g/畝，與水產(chǎn)養(yǎng)殖中二氧化氯的常規(guī)用量一致），同時(shí)設(shè)置不處理組作為對(duì)照。室溫放置1h后取100μL涂布BHI固體平板（每個(gè)濃度涂布3個(gè)平板），37℃培養(yǎng)12h后，對(duì)長(zhǎng)出的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，再計(jì)算不同濃度二氧化氯的殺菌率。為便于計(jì)數(shù)和提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，不處理組平板的菌落數(shù)控制在200～500個(gè)左右為宜，若菌落數(shù)太少或太多，則改變2.2中稀釋的倍數(shù)。

2.5不同處理時(shí)間下二氧化氯消毒劑的殺菌試驗(yàn)

根據(jù)2.4的試驗(yàn)結(jié)果，選擇一個(gè)合理的二氧化氯濃度，按2.4的方法混合菌液和二氧化氯母液，分別處理15、30、45、60、90和120min后涂布平板，37℃培養(yǎng)12h后平板計(jì)數(shù)，并計(jì)算不同處理時(shí)間下的殺菌率。

3結(jié)果與分析

3.1二氧化氯含量測(cè)定

采用國(guó)標(biāo)GB/T20783-2006和改良五步碘量法分別對(duì)2個(gè)品牌的二氧化氯消毒劑的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

6.1從國(guó)標(biāo)法的測(cè)定結(jié)果可以看出品牌A二氧化氯有效含量為3.2%，品牌B為6.3%，均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于包裝袋上標(biāo)注的10%。國(guó)標(biāo)法的測(cè)定結(jié)果略高于五步碘量法，但差別不大，與趙巧玲等人的研究一致[1]。

3.2不同用量二氧化氯消毒劑的殺菌效果

根據(jù)2.2和2.3所述，我們對(duì)不同用量二氧化氯的殺菌效果進(jìn)行了測(cè)試，結(jié)果見(jiàn)表2。

從表2可以看出殺菌率與二氧化氯的實(shí)際含量明顯正相關(guān)，品牌A實(shí)際含量3%左右，在3.0kg/hm2的用量下殺菌率不到50%，而品牌B實(shí)際含量6%左右，在3.0kg/hm2的用量下殺菌率超過(guò)了90%。另外，不同細(xì)菌對(duì)二氧化氯的敏感性不同，二氧化氯對(duì)大腸桿菌的滅殺效果要明顯優(yōu)于無(wú)乳鏈球菌。