劉勝男 楊 丹 馬宵雁 陳美華

藥學(xué)院，山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)， 山東 泰安 271016

酒精是一種中樞神經(jīng)抑制劑，長(zhǎng)期反復(fù)飲酒容易導(dǎo)致抑郁，酗酒者出現(xiàn)判斷力下降，情感麻木，洞察力變?nèi)?，社交退縮，這些表現(xiàn)類似于抑郁癥的表現(xiàn)[1-2]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，酒精依賴及戒斷的患者常表現(xiàn)為興奮、躁動(dòng)、敵對(duì)攻擊、傷人毀物，并出現(xiàn)幻覺，隨著依賴程度的加深及戒斷次數(shù)的增多，患者可能出現(xiàn)焦慮、抑郁等伴隨癥狀[3-4]。本實(shí)驗(yàn)探究連續(xù)強(qiáng)迫飲酒和雙瓶自由選擇飲酒2種飲酒模式下，小鼠焦慮抑郁樣行為學(xué)的變化，為酒精依賴機(jī)制的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

C57BL/6J小鼠，體重18～22 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng)于潔凈的層流動(dòng)物房?jī)?nèi)，自由進(jìn)食，室內(nèi)溫度控制在20～22℃，濕度50%～60%，明暗交替12 h。

1.2 試劑和儀器

無水乙醇，天津市永大化學(xué)制劑公司；高架十字迷宮、曠場(chǎng)系統(tǒng)，美國(guó) CSI，TopScan行為分析系統(tǒng)；懸尾系統(tǒng)、強(qiáng)迫游泳系統(tǒng)，美國(guó) CSI，DepressionScan行為分析系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1分組及建立模型

小鼠30只隨機(jī)分為3組，正常組、連續(xù)飲酒組、自由飲酒組，每組10只。正常組只飲水不飲酒，連續(xù)飲酒組連續(xù)飲用10%酒精，只飲酒不飲水，自由飲酒組放置2個(gè)水瓶，1瓶是純凈水，另1瓶是10%酒精，每天交換水瓶和酒瓶的位置，防止形成位置偏愛。每天記錄小鼠的飲用量，每隔7天時(shí)間記錄小鼠的體重。酒精戒斷后24 h，依次進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。

1.3.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)由4個(gè)開口盒子放在一起,均開口向上,在4個(gè)盒子的中間有攝像頭,連接到記錄系統(tǒng)，觀察時(shí)間為5 min。記錄中央4個(gè)方格中小鼠的穿場(chǎng)中心次數(shù)和穿場(chǎng)中心時(shí)間。

1.3.3高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

高架十字迷宮由一對(duì)開臂和一對(duì)閉臂組成，將小鼠放在開臂和閉臂的中間,朝著同一開臂，記錄小鼠5 min內(nèi)的活動(dòng)，并計(jì)算5 min內(nèi)小鼠在開臂進(jìn)入次數(shù)百分率[開臂進(jìn)入次數(shù)/(開臂進(jìn)入次數(shù)+閉臂進(jìn)入次數(shù))]及開臂停留時(shí)間百分率[開臂滯留時(shí)間/(開臂滯留時(shí)間+閉臂滯留時(shí)間)]。

1.3.4懸尾實(shí)驗(yàn)

將小鼠尾尖部1/3處懸掛于懸尾裝置上，使其頭部離地面約10 cm，記錄小鼠6 min內(nèi)的絕望行為，分析后4 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

1.3.5強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

將小鼠放入直徑為17 cm的圓柱形容器中進(jìn)行強(qiáng)迫游泳，系統(tǒng)自動(dòng)記錄小鼠6 min內(nèi)的絕望行為，分析后4 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

1.3.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，連續(xù)飲酒小鼠穿場(chǎng)次數(shù)增加，穿場(chǎng)中心時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)，雙瓶自由選擇小鼠穿場(chǎng)次數(shù)減少，穿場(chǎng)中心時(shí)間縮短(P<0.01)。結(jié)果見表1。

表1 各組小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)

與正常組相比，連續(xù)飲酒小鼠高架十字迷宮中開臂進(jìn)入次數(shù)百分率和開臂進(jìn)入時(shí)間百分率增加，自由選擇組小鼠與正常組比較，開臂進(jìn)入時(shí)間百分率減少(P<0.05)。結(jié)果見表2。

表2 各組小鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 懸尾實(shí)驗(yàn)

懸尾實(shí)驗(yàn)中，連續(xù)飲酒小鼠4 min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間縮短，自由選擇組小鼠不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 各組小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：與正常組比較，*P<0.05。

2.4 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

與正常組比較，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中連續(xù)飲酒小鼠4 min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間縮短，自由選擇組小鼠不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01)。結(jié)果見表4。

表4 各組小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3 討 論

酒精成癮動(dòng)物模型的建立應(yīng)與人類攝入酒精方式接近，并且在戒斷后出現(xiàn)與人體相似的戒斷癥狀[5]。連續(xù)飲酒是一種被動(dòng)性飲酒模式，自由飲酒屬于主動(dòng)性酒精攝入，更接近人類的飲酒方式。酒精依賴戒斷綜合征主要表現(xiàn)為不同程度的焦慮抑郁樣癥狀[6]，特別是在戒酒初期，焦慮癥狀尤其突出[7-8]。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察動(dòng)物在新奇環(huán)境中的活動(dòng)能力和探索行為[9]。本實(shí)驗(yàn)中連續(xù)飲酒小鼠戒斷后活動(dòng)能力增強(qiáng)，穿場(chǎng)中心次數(shù)和時(shí)間增加，自由選擇小鼠戒斷24 h后的探索能力減弱，穿場(chǎng)中心次數(shù)和時(shí)間縮短，說明戒斷后小鼠出現(xiàn)焦慮樣行為。高架十字迷宮是抗焦慮研究中應(yīng)用最廣泛的模型之一，開放臂停留時(shí)間比和開放臂進(jìn)入次數(shù)是測(cè)試中的經(jīng)典指標(biāo)[10]，與焦慮程度直接相關(guān)。在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，自由飲酒小鼠戒斷后開放臂停留時(shí)間百分率明顯減少，也說明小鼠出現(xiàn)了焦慮樣行為。這與以往報(bào)道相一致[11]。抑郁行為也是酒精戒斷后常見的精神癥狀，懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)抑郁情緒常用的有效方法[12]。在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，自由飲酒小鼠戒斷后不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)，說明小鼠出現(xiàn)了抑郁樣行為，而連續(xù)飲酒小鼠戒斷后的不動(dòng)時(shí)間縮短，并未產(chǎn)生抑郁樣行為。

綜上所述，自由飲酒小鼠戒斷后出現(xiàn)了明顯的焦慮抑郁樣行為，連續(xù)飲酒小鼠戒斷后未出現(xiàn)焦慮抑郁樣行為，自由飲酒模式更接近于人類飲酒行為，是研究酒精依賴的一種較為合適的模型。