熒光定量PCR法檢測食管癌中Livin基因特征分析

張娜娜

【摘 要】目的：分析熒光定量PCR法檢測食管癌中Livin基因特征，探究其臨床意義。方法：選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者作為研究對(duì)象，采用熒光定量PCR法分別對(duì)患者的癌組織以及癌旁（距離>6cm）的正常組織中的Livin基因進(jìn)行檢測，探究其表達(dá)與食管癌之間的關(guān)系。結(jié)果：采用熒光定量PCR法進(jìn)行檢測后，食管癌患者的癌組織中Livin基因表達(dá)水平明顯高于正常組織中的Livin基因表達(dá)水平，其中P<0.05，差異性顯著。結(jié)論：通過熒光定量PCR法對(duì)食管癌患者的癌組織和正常組織中Livin基因特征進(jìn)行分析后，可以明確得出Livin基因的表達(dá)水平與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性，為食管癌的預(yù)防和檢測提供有力的參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR法;食管癌;Livin基因;相關(guān)性

【中圖分類號(hào)】R691.4【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2019）20--02

食管癌屬于一種多發(fā)性消化道腫瘤，具有極高的死亡率，給患者的生命健康造成嚴(yán)重的威脅。食管癌患者早期癥狀不明顯，因此食管癌被確診后往往已經(jīng)為中晚期，延誤了最佳治療時(shí)期[1]。因此，探究食管癌癌組織與正常組織中某些基因表達(dá)的差異對(duì)于食管癌的早期診斷具有重要的意義。我院為了探究Livin基因特征與食管癌的相關(guān)性，進(jìn)行了本次研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者作為研究對(duì)象，取患者癌組織和正常組織各86例離體制成標(biāo)本，置于超低溫下冷凍保存。86例患者中男性為56例，女性為30例，年齡在38-75歲，平均年齡為（57.21±3.54）歲，病程在1-5年，平均病程為（2.53±1.24）年，其中腺鱗癌患者為12例，食管鱗癌患者為74例。本次研究所選患者均被確診為食管癌，臨床資料完整，手術(shù)前均未進(jìn)行放化療治療。本次研究經(jīng)過倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，且經(jīng)過患者和家屬的知情且同意。

1.2 方法

1.2.1 材料和設(shè)備 該研究選用RNA提取劑和qPCR試劑均為熒光定量PCR檢測專用試劑，cDNA 第一鏈合成試劑盒、引物以及探針均購自中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因有限公司，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測儀器（ 型號(hào)： Piko-Real 96 Real - Time PCR System） 購自美國賽默飛世爾公司[2]。

1.2.2 樣品RNA提取和cDNA的制備 分別取患者癌組織和正常組織樣品研磨后加入1mlRNA提取劑，混勻靜置5min，按照標(biāo)準(zhǔn)提取方法提取組織中的RNA，提取后采用紫外分光光度計(jì)和1%甲醛變性凝膠電泳對(duì)其進(jìn)行定量分析，選取純度和濃度均合格的RNA備用。采用標(biāo)準(zhǔn)cDNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，制備cDNA，取2 μg上述制得的RNA樣品為模板，加無RNase 水定容至6 μL，加入1 μL 50 μmol/L Oligo（ dT），5 μL純水，混勻后，置于65℃條件下反應(yīng)5 min，迅速冰浴后依次加入緩沖液及其他試劑后混勻，置于42℃ 反應(yīng)60 min，最后將其70℃反應(yīng)10min，即得。將制備的cDNA冷凍保存后，備用[3]。

1.2.3 熒光定量PCR檢測 采用熒光定量PCR檢測法對(duì)上述制得的cDNA進(jìn)行基因定量檢測，反應(yīng)條件為：50℃條件下反應(yīng)10s，升溫至95℃反應(yīng)10min，之后維持同溫度反應(yīng)15s，之后溫度降至60℃反應(yīng)反應(yīng)1min，按照這個(gè)反應(yīng)為一次，共反應(yīng)42次，反應(yīng)結(jié)束后，觀察輸出的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對(duì)含量[4]。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 采用熒光定量PCR檢測患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對(duì)表達(dá)量，對(duì)患者癌組織和正常組織中Livin基因水平進(jìn)行比較，探究Livin基因特征與食管癌發(fā)生的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本次食管癌患者的研究結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，運(yùn)用t檢驗(yàn)方法，并采用進(jìn)行檢驗(yàn)，采用重復(fù)多次的實(shí)驗(yàn)方法計(jì)算兩組患者的Livin基因水平。當(dāng)P<0.05時(shí)，表示兩組數(shù)據(jù)之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌患者癌組織和正常組織中Livin基因水平對(duì)比情況

采用熒光定量PCR檢測患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對(duì)表達(dá)量水平后，得出：食管癌患者的癌組織中Livin基因水平明顯高于正常組織中的Livin基因水平，其中t=6.212，P=0.021，差異性顯著，詳細(xì)數(shù)據(jù)見表1。

3 討論

Livin基因所表達(dá)的蛋白為一種人類凋亡抑制蛋白，該種蛋白具有抗細(xì)胞凋亡的特性，能夠使得腫瘤細(xì)胞獲得不死性。大量的研究表明，該種基因的存在與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展均具有一定的關(guān)系[5]。

我院為了探究食管癌與Livin基因特征之間的相關(guān)性，選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者，采用熒光定量PCR法分別對(duì)患者的癌組織以及正常組織中的Livin基因進(jìn)行檢測后得出：食管癌患者的癌組織中Livin基因表達(dá)水平明顯高于正常組織中的Livin基因表達(dá)水平，其中P<0.05，差異性顯著。

綜上所述，通過熒光定量PCR法對(duì)食管癌患者的癌組織和正常組織中Livin基因特征進(jìn)行分析后，可以明確得出Livin基因的表達(dá)水平與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性，為食管癌的預(yù)防和檢測提供有力的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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李娜，李勇，高洪波，郭淑霞，楊鑫磊，王冬慧，鞏平.凋亡抑制蛋白Livin在食管癌中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2011，5148：85-86+120.

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錢志英，何流，潘良熹，何曉松，張成陽.熒光定量PCR法檢測食管癌中Survivin基因的臨床研究[J].腫瘤研究與臨床，2005，02：86-88.