倪慧姝 付立波 馬銘陽(yáng)

摘要：為了探究中藥三七水煮液對(duì)炎癥痛模型大鼠的痛覺(jué)調(diào)節(jié)作用，從而為臨床中藥參與慢性痛的鎮(zhèn)痛作用研究提供理論依據(jù)。建立炎癥痛大鼠模型，對(duì)其用5、20、85 mg/mL三七水煮液灌胃，同時(shí)進(jìn)行熱板和壓板測(cè)試，分別測(cè)量5～60 min期間7個(gè)時(shí)間點(diǎn)上大鼠后爪縮爪反應(yīng)潛伏期（hindpaw withdrawal lantency，HWL），以大鼠HWL作為評(píng)判大鼠痛覺(jué)水平的指標(biāo)，將其與灌胃生理鹽水進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，注射三七水煮液后的炎癥大鼠的HWL顯著延長(zhǎng)，20 min 時(shí)藥效作用發(fā)揮最佳，且藥效隨水煮液濃度的變化發(fā)生變化，水煮液濃度為85 mg/mL時(shí)最為顯著。說(shuō)明三七水煮液在炎癥痛大鼠的痛覺(jué)調(diào)節(jié)中可能有較為明顯的鎮(zhèn)痛作用，且對(duì)藥劑劑量有依賴，在20 min時(shí)發(fā)揮最大療效，鎮(zhèn)痛效果達(dá)到最佳。

關(guān)鍵詞：三七;炎癥痛大鼠;痛覺(jué)調(diào)節(jié)作用;鎮(zhèn)痛作用;測(cè)痛儀;研究模型建設(shè)

中圖分類號(hào)： S865.1+2;S853.75 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2019）17-0180-03

三七是盛產(chǎn)于我國(guó)云南的一種傳統(tǒng)中藥材，尤以文山地區(qū)的三七聞名，故又被稱為文山三七、金不換，通常將其干燥的根或根莖入藥[1]。炎癥俗稱“發(fā)炎”，指因外界刺激而使機(jī)體發(fā)生紅、腫、熱、痛防御反應(yīng)，同時(shí)伴隨疼痛等功能發(fā)生障礙，機(jī)體外周神經(jīng)軸突或末梢的損傷會(huì)誘發(fā)一系列神經(jīng)感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)功能活動(dòng)異常最易被人察覺(jué)且最難以忍受的便是痛覺(jué)。病人的痛覺(jué)異常通常表現(xiàn)為自發(fā)性、隨機(jī)性和持久性的燒灼痛、絞痛、抽痛等異常感覺(jué);一些對(duì)正常神經(jīng)組織為非傷害性刺激如輕觸、溫?zé)岬却碳ひ部梢鸩∽儏^(qū)強(qiáng)烈疼痛的痛性感覺(jué)異常，同時(shí)會(huì)伴隨痛覺(jué)過(guò)敏[2]。這類疼痛在臨床上簡(jiǎn)稱為慢性痛，它的發(fā)作給患者帶來(lái)的痛楚會(huì)使人出現(xiàn)睡眠紊亂、食欲缺乏、精神崩潰甚至人格扭曲和家居不寧等后果，致使不少病人因無(wú)法忍受長(zhǎng)期的疼痛折磨而選擇自殺。本試驗(yàn)中所提及的炎癥痛為上述慢性痛中的一種。近年來(lái)，對(duì)三七活血化瘀功效的研究頗為完善，但對(duì)于三七鎮(zhèn)痛作用還有待考究，因此以此為研究目標(biāo)，通過(guò)注射鹿角菜（Sigma公司）引發(fā)大鼠炎癥，建立炎癥痛大鼠模型展開(kāi)試驗(yàn)探究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與儀器及藥品

1.1.1 動(dòng)物 本試驗(yàn)采用8只體質(zhì)量在180～250 g之間的成年雄性Wistar大鼠（由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供），試驗(yàn)期間大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水與進(jìn)食并給予自然光照，飼養(yǎng)溫度維持在16～24 ℃。

1.1.2 儀器 電子壓痛儀（LYS-3E）、智能熱板儀（YLS-6B），由濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)提供;灌胃針、注射器、電子天平、滴管、大小燒杯等。

1.1.3 藥品 三七（長(zhǎng)春站中藥房提供）、鹿角菜（Sigma公司生產(chǎn)）、生理鹽水（長(zhǎng)春豪邦藥業(yè)有限公司制造）等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)前期工作 依據(jù)孫衍剛等的方法[3]，對(duì)大鼠在試驗(yàn)開(kāi)始前進(jìn)行熱板和壓力的測(cè)試訓(xùn)練，使大鼠盡快熟悉實(shí)驗(yàn)室測(cè)試環(huán)境，以減小試驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的誤差，為之后的試驗(yàn)做準(zhǔn)備。測(cè)試訓(xùn)練持續(xù)5 d，每天重復(fù)9輪。經(jīng)過(guò)訓(xùn)練的大鼠后爪縮爪反應(yīng)潛伏期（hindpaw withdrawal lantency，HWL）將維持在穩(wěn)定范圍內(nèi)，使誤差有效減小。測(cè)試過(guò)程中將熱板測(cè)試時(shí)間控制在3～5 s，壓力測(cè)試時(shí)間控制在5～7 s[4]。

1.2.2 行為痛覺(jué)測(cè)試 訓(xùn)練結(jié)束后，向大鼠的左爪注射鹿角菜，以制備炎癥痛大鼠模型。在灌胃藥物前將完成訓(xùn)練的大鼠的1輪HWL作為基礎(chǔ)值，并將灌胃藥物后各時(shí)間點(diǎn)（5、10、20、30、45、60 min）的HWL以相對(duì)于基礎(chǔ)值的變化率來(lái)進(jìn)行記錄。設(shè)定測(cè)量時(shí)間應(yīng)不超過(guò)15 s，以避免對(duì)組織的損傷，在灌胃藥物后特定的時(shí)間點(diǎn)（5、10、20、30、45、60 min）對(duì)大鼠的HWL進(jìn)行測(cè)量記錄。

1.2.2.1 熱板測(cè)試 加熱熱板使其溫度維持在52 ℃（51.7～52.3 ℃），記錄從大鼠的待測(cè)后爪緊貼于已達(dá)到穩(wěn)定溫度的熱板上直至其后爪因感覺(jué)到疼痛而主動(dòng)回縮離開(kāi)熱板時(shí)的時(shí)間、注射不同濃度（5、20、85 mg/mL）三七水煮液和生理鹽水對(duì)照組大鼠的HWL。

1.2.2.2 壓力測(cè)試 使用壓力測(cè)痛儀對(duì)大鼠進(jìn)行壓力測(cè)試，測(cè)試時(shí)1只腳踩住開(kāi)關(guān)，記錄測(cè)痛儀上的小楔形有機(jī)玻璃壓于鼠爪的跗趾關(guān)節(jié)處，直至其因后爪感覺(jué)到疼痛而主動(dòng)往回收縮時(shí)的時(shí)間。記錄注射不同濃度（5、20、85 mg/mL）三七水煮液和注射生理鹽水對(duì)照組大鼠的HWL。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所得數(shù)據(jù)（即熱板壓板測(cè)定的時(shí)間）均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，每組之間對(duì)比用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)常用軟件）的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。數(shù)據(jù)后標(biāo)有*、* *、* * *分別表示統(tǒng)計(jì)結(jié)果在0.05、0.01、0.001 水平差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 5、20、85 mg/mL三七水煮液熱板測(cè)試對(duì)炎癥痛大鼠HWL的影響

與對(duì)灌胃生理鹽水的炎癥痛大鼠相比較，灌胃三七水煮液的炎癥痛大鼠的左爪、右爪熱板的HWL均明顯延長(zhǎng)。炎癥痛大鼠的左爪、右爪熱板HWL均在20 min時(shí)，三七水煮液對(duì)炎癥痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用最為顯著（表1、表2、表3、圖1）。灌胃5、20、85 mg/mL三七水煮液的炎癥痛大鼠左爪、右爪熱板的HWL差異均極顯著（P<0.01，表4、表5）。

2.2 5、20、85 mg/mL三七水煮液壓板測(cè)試對(duì)炎癥痛大鼠HWL的影響

與對(duì)炎癥痛大鼠灌胃生理鹽水相比較，灌胃三七水煮液的炎癥痛大鼠的左爪、右爪壓板的HWL均明顯延長(zhǎng)。炎癥痛大鼠的左爪、右爪壓板HWL均在20 min時(shí)，三七水煮液對(duì)炎癥痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用最為顯著（表1、表2、表3、圖1）。灌胃5、20、85 mg/mL三七水煮液的炎癥痛大鼠左爪、右爪壓板的HWL差異均極顯著（P<0.01，表6、表7）。

灌胃5、20、85 mg/mL三七水煮液時(shí)，熱板與壓力測(cè)痛均能延長(zhǎng)炎癥痛大鼠的HWL，表明三七可能對(duì)炎癥痛大鼠具有鎮(zhèn)痛作用，而且在20 min左右最為顯著，表明三七可能參與了慢性痛大鼠的痛覺(jué)調(diào)節(jié)作用。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)采用熱板和壓板的測(cè)試方式，記錄并測(cè)定炎癥痛大鼠對(duì)傷害性熱刺激和機(jī)械刺激引起的HWL，并以此作為衡量痛覺(jué)的指標(biāo)。筆者發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是85 mg/mL高濃度的三七水煮液，還是 5 mg/mL 低濃度的三七水煮液，均能延長(zhǎng)炎癥痛大鼠HWL，表明三七水煮液對(duì)炎癥痛大鼠可能具有一定的鎮(zhèn)痛作用。同時(shí)，隨著三七水煮液濃度的增加，炎癥痛大鼠對(duì)傷害性熱刺激和機(jī)械刺激的痛覺(jué)敏感程度逐漸降低，即有一定藥劑劑量的依賴性。在最初和最后的2個(gè)時(shí)間點(diǎn)的作用效果不是很明顯，但均在20 min左右時(shí)作用效果明顯，說(shuō)明在時(shí)間上有一定的規(guī)律性。

據(jù)研究，三七的根莖和花等部位均具有顯著的活血化淤、消腫止痛功效，在冠心病、心絞痛等心腦血管系統(tǒng)疾病領(lǐng)域被廣泛推廣利用研究并取得了成果[5-6]。已有研究表明，三七的主要藥用成分為皂苷類和一種非蛋白氨基酸成分三七素（三七的主要止血活性成分）[7]。已有學(xué)者通過(guò)硅膠柱層析制備性薄層色譜分離，從三七花蕾中分離得到22個(gè)黃酮化合物，依據(jù)理化性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù)鑒定為山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷（1）和山奈酚-3-O-（2″，3″-二反式對(duì)羥基桂皮酰基）-α-L-鼠李糖苷（2），這2個(gè)黃酮均是首次從該植物中分離得到的[8]。本試驗(yàn)雖然證明了三七對(duì)炎癥痛大鼠有明顯的鎮(zhèn)痛作用，表明其參與了慢性痛的痛覺(jué)調(diào)節(jié)作用，但三七中是否也由總苷和黃酮對(duì)正常大鼠起鎮(zhèn)痛作用以及鎮(zhèn)痛作用的生理機(jī)制尚待進(jìn)一步的研究與發(fā)現(xiàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]郭巧生. 藥用植物栽培學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，2009.

[2]謝益寬. 慢性痛的發(fā)生機(jī)理[J]. 科學(xué)通報(bào)，1999，44（22）：2353-2362.

[3]孫衍剛，于龍川. 甘丙肽參與痛覺(jué)調(diào)制的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2004，10（4）：108-110.

[4]付 華，王 穎，楊勝男，等. 降鈣素基因相關(guān)肽參與外側(cè)韁核對(duì)痛覺(jué)的調(diào)節(jié)作用[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志，2014，30（4）：449-453.

[5]魏均嫻，杜元沖. 三七現(xiàn)代科學(xué)與應(yīng)用[M]. 昆明：云南科技出版社，1996.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典（一部）[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

[7]夏鵬國(guó)，張順倉(cāng)，梁宗鎖，等. 三七化學(xué)成分的研究歷程和概況[J]. 中草藥，2014，45（17）：2564-2570.

[8]Huang J，Wang H，Yang X F，et al.Isolation and identification of flavonoids from buds of Panax notoginseng[J]. Nat Prod Res Dev，2012，24（8）：1060-1062.