HPLC-MS/MS檢測琯溪蜜柚中乙唑螨腈殘留量及套袋對(duì)殘留的影響

賴添財(cái)

（漳州市農(nóng)業(yè)檢驗(yàn)監(jiān)測中心，福建漳州363000）

0 引言

乙唑螨腈(SYP-9625)是沈陽中化農(nóng)藥化工研發(fā)有限公司自主研發(fā)的新型高效殺螨劑，主要用于防治柑橘紅蜘蛛及多種葉螨[1-4]。目前，對(duì)乙唑螨腈檢測方法的研究主要集中在高效液相色譜方法[5-8]上，而采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)其殘留進(jìn)行分析的報(bào)道非常少，僅高艷[9]研究表明乙唑螨腈在棉葉及土壤中的半衰期分別為1.5～7.0天和3.0～12.0天，但乙唑螨腈在蜜柚上的殘留檢測方法及殘留動(dòng)態(tài)研究還未見報(bào)道。

套袋因具有降低農(nóng)殘[10-16]、改善果實(shí)外觀及提高果實(shí)品質(zhì)等[13-18]優(yōu)點(diǎn)，已成為生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)、綠色果品的重要技術(shù)措施。本研究以琯溪蜜柚為研究對(duì)象，建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測乙唑螨腈殘留量的方法，同時(shí)研究了套袋對(duì)蜜柚中乙唑螨腈殘留量的影響，探討套袋對(duì)減少農(nóng)藥使用量及降低農(nóng)殘的作用，以期為指導(dǎo)蜜柚優(yōu)質(zhì)安全生產(chǎn)及柚農(nóng)科學(xué)用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

田間試驗(yàn)于2018 年7—9 月在漳州市平和縣小溪鎮(zhèn)厝丘村蜜柚園進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 供試農(nóng)藥 30%乙唑螨腈懸浮劑。供試作物為琯溪蜜柚。

1.2.2 供試標(biāo)準(zhǔn)品及試劑 乙唑螨腈標(biāo)準(zhǔn)品（99.1%，沈陽化工研究院）。PSA、甲醇、乙腈和甲酸均為色譜純；NaCl、無水Na2SO4和無水MgSO4均為分析純。

1.2.3 儀器與設(shè)備 HPLC-MS/MS 聯(lián)用儀[DIONEX Ultimate 3000-Thermo TSQ Quantum Ultra（美國ThermoFisher公司，配 ESI 源）]；3K15 高速離心機(jī)（德國Sigma公司）；T-18 basic ULTRA TURRAX高速勻漿機(jī)（德國IKA公司）。

1.3 殘留檢測方法

1.3.1 樣品前處理 參照蔡恩興[19]建立的QuEChERS方法 ：取(10±0.01) g 樣品于 50 mL 離心管中 ，加入20.0 mL 乙腈、4.0 g 無水 MgSO4和 1.0 g NaCl，勻漿提取2 min，4500 r/min 離心 5 min，取 5.0 mL 上清液于離心管中，加入0.75 g 無水MgSO4和0.25 g PSA 后渦旋1 min，經(jīng)0.22 μm微孔膜過濾，待測。

1.3.2 檢測條件

（1）色譜條件。色譜柱為Thermo Scientific Hypersll GOLD (50 mm×2.1 mm×1.9 μm)；柱溫35℃；進(jìn)樣量為4 μL。采用梯度洗脫模式（見表1），保留時(shí)間為6.7 min。

表1 流動(dòng)相及洗脫條件

（2）質(zhì)譜條件。電離源模式：電噴霧離子化；電離源極性：正模式；噴霧電壓4000 V；霧化溫度270℃；鞘氣壓為20 psi，輔助氣壓為6 arb，碰撞氣體（氬氣）為1.5 mTorr；具體選擇反應(yīng)監(jiān)測條件見表2。

表2 選擇反應(yīng)監(jiān)測條件

1.4 田間試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)地設(shè)在漳州市平和縣小溪鎮(zhèn)厝丘村蜜柚園。田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)參照NY/T 788—2004[20]。蜜柚試驗(yàn)分套袋和非套袋處理，每個(gè)濃度處理6株，設(shè)3個(gè)重復(fù)；設(shè)不施藥區(qū)為空白對(duì)照(CK)。施藥后2天內(nèi)無降雨過程。

1.4.2 方法 2018年7月8日噴藥1次（施藥處理具體見表3，此時(shí)蜜柚果實(shí)約為成熟時(shí)的一半大小），按常規(guī)方法整株均勻噴施。套袋處理在噴藥后果實(shí)表面藥液干燥時(shí)進(jìn)行套袋包裹。采樣時(shí)間為施藥后約2 h（0天，蜜柚果實(shí)表面藥液已干）和1、3、7、15、30天；取樣方式為每棵果樹每次各摘2 個(gè)果實(shí)，采集的樣品密封于惰性塑料袋中，及時(shí)帶回實(shí)驗(yàn)室搗碎勻漿后保存于-20℃冰箱中，供殘留檢測。

表3 30%乙唑螨腈在蜜柚上的施藥處理

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

在ESI+模式下對(duì)乙唑螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化，確定以m/z 394.1 作為母離子進(jìn)入二級(jí)質(zhì)譜；然后在SRM 模式下自動(dòng)優(yōu)化，確定m/z 310.1 子離子作為定量離子，m/z 254.0 作為定性離子，其碰撞能量分別為23、31 eV。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限、回收率及精密度

采用QuEChERS 方法凈化處理，配制系列蜜柚基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求回歸方程。結(jié)果表明乙唑螨腈在0.4～400 μg/L 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=531565x+528651，決定系數(shù)(r2)為0.9997。以信噪比(S/N)的3倍和10倍分別計(jì)算檢出限和定量限，該方法的檢出限為0.06 μg/kg，定量限為0.2 μg/kg。在蜜柚基質(zhì)中添加1、10和100 μg/kg的乙唑螨腈進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，回收率為84.2%～90.0%，RSD為5.6%～8.4%。

2.3 乙唑螨腈在蜜柚上的殘留動(dòng)態(tài)及降解規(guī)律

2.3.1 乙唑螨腈在蜜柚上的殘留動(dòng)態(tài) 30%乙唑螨腈懸浮劑在蜜柚上的殘留動(dòng)態(tài)試驗(yàn)結(jié)果（見表4）顯示：不同施藥處理原始沉積量存在一定差異，推薦劑量（3000倍液）和加倍劑量（1500倍液）處理在蜜柚上的原始沉積 量 分 別 在 0.3919～0.4052 mg/kg 和 0.7325～0.7536 mg/kg之間。施藥后1、3、7、15、30天，套袋處理的降解率分別為14.8%～27.4%、42.4%～47.5%、74.0%～80.7%、91.5%～95.3%和98.7%～99.7%，未套袋處理的降解率分別為19.2%～28.2%、49.7%～59.7%、83.0%～87.6%、95.2%～97.7%和99.8%～99.9%；相同劑量和時(shí)間下，未套袋處理的降解率稍微高于套袋處理，但4 種處理在施藥后30 天的降解率均接近99%。

2.3.2 乙唑螨腈在蜜柚上的殘留降解規(guī)律 對(duì)乙唑螨腈的殘留降解動(dòng)態(tài)進(jìn)行回歸分析后得出（見表5），其降解規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(︱r︱)在0.9923～0.9990 之間。4 個(gè)不同處理的降解系數(shù)(k)在0.1444～0.2271 之間，屬于易降解農(nóng)藥；采用套袋時(shí)的半衰期(T1/2)為3.56～4.80天，降解99%(T0.99)所需要的時(shí)間為23.6～31.8天；未采用套袋時(shí)的T1/2為3.05～3.50天，T0.99為20.2～23.2 天。相同劑量下，未采用套袋處理的半衰期小于套袋的半衰期。

2.3.3 乙唑螨腈在蜜柚上的最終殘留量 按推薦劑量及加倍劑量各施藥1 次，在蜜柚成熟時(shí)測定乙唑螨腈的最終殘留量，結(jié)果（見表5）顯示套袋和非套袋等4個(gè)處理在施藥65天后均未檢出乙唑螨腈殘留。

表4 乙唑螨腈在蜜柚上的殘留量與降解率

表5 乙唑螨腈在蜜柚上的殘留降解規(guī)律

3 結(jié)論與討論

本研究采用QuEChERS方法凈化，對(duì)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，建立了HPLC-MS/MS檢測蜜柚中乙唑螨腈殘留量的方法；該方法檢出限為0.06 μg/kg，定量限為0.2 μg/kg，回收率和精密度均符合相關(guān)檢測要求。

本研究結(jié)合當(dāng)?shù)孛坭植∠x害防治方式，在套袋前充分施藥然后及時(shí)進(jìn)行套袋，不但可以加快果實(shí)上色及提前上市，而且從套袋到蜜柚采摘期間不需要繼續(xù)施藥，可以減少農(nóng)藥使用次數(shù)，這與其他采用套袋后再多次施藥等研究[10-16]有很大區(qū)別。結(jié)果表明，乙唑螨腈在蜜柚上的降解規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)關(guān)系，屬于易降解農(nóng)藥；套袋處理的半衰期為3.56～4.80 天，未采用套袋處理的半衰期為3.05～3.50 天。套袋處理的半衰期大于未采用套袋處理的半衰期，這可能與套袋后減少淋溶、揮發(fā)及光解有關(guān)。而高艷[9]在山東、安徽及河北等棉花地研究則表明，乙唑螨腈在棉葉中的半衰期為1.5～7.0天，在土壤中的半衰期為3.0～12.0天，其不同地區(qū)間的結(jié)果差異較大。

目前，GB 2763—2016[21]尚未對(duì)乙唑螨腈的MRL值做出規(guī)定，本研究假定乙唑螨腈的MRL為0.1 mg/kg，然后對(duì)其安全間隔期進(jìn)行推算（見表5），在推薦劑量和加倍劑量下，套袋處理的安全間隔期分別為6.6 天和13.1天，未采用套袋處理的安全間隔期分別為5.1天和9.1天。本研究在蜜柚成熟收獲后（藥后65天）同時(shí)測定其最終殘留量，套袋和非套袋等4 個(gè)處理均未檢出乙唑螨腈。所以按琯溪蜜柚常規(guī)生產(chǎn)操作，套袋不僅能減少農(nóng)藥使用次數(shù)，而且能確保乙唑螨腈最終殘留安全。