史朝斌

（濟(jì)源市漁業(yè)技術(shù)推廣站 河南濟(jì)源459000 ）

由于人們對食品安全越來越重視，所以水產(chǎn)養(yǎng)殖中殘留的抗生素也受到了社會(huì)的廣泛關(guān)注。殘留在水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)的抗生素，容易對生態(tài)環(huán)境造成破壞，而且危害人體健康。研究的目的，在于了解水產(chǎn)養(yǎng)殖的抗生素分布情況，為水產(chǎn)品的食用安全提供參考依據(jù)。

1 獲取抗生素含量的方法

1.1 采集樣品

選擇水網(wǎng)密布、養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)的區(qū)域作為研究范圍，在定區(qū)域采集一定的樣品，樣品包括水體、魚類、飼料、沉積物等。對于所采集的魚類，要放在曝氣培養(yǎng)箱內(nèi)；在采集的水樣中添加甲醇、硫酸，抑制微生物的活性。所有的采樣點(diǎn)采集3份沉積物，再將其混合為一個(gè)沉積物樣，放在車載冰柜內(nèi)[1]。樣品采集完畢后，沉積物和飼料樣品在-19℃的環(huán)境下保存；魚樣采用一次性注射器獲取魚尾靜脈血后，通過手術(shù)刀取3 g的肝臟、背部去皮肌肉，在-10℃的環(huán)境下保存。

1.2 主要儀器設(shè)備和試劑

設(shè)備美國的Agilent 1200高分離度快速高效液相色譜儀、Agilent 6460三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、冷凍離心設(shè)備、超純水設(shè)備、氮吹儀等。試劑包括色譜純甲醇、乙腈、硫酸、氫氧化鈉、乙二酸四乙酸二鈉、強(qiáng)弱陰離子交換小柱等[2]?？股貥?biāo)品則包括三十多種，如磺胺砒啶、磺胺醋酰、磺胺二甲嘧啶、磺胺噻唑等等、氧氟沙星、林可霉素等。

先制備脫水紅霉素甲醇溶解紅霉素，通過添加4 mol/LH2SO4調(diào)整酸堿度，將其放置四個(gè)小時(shí)。內(nèi)標(biāo)物包括了磺胺甲惡唑、紅霉素、環(huán)丙沙星等。

1.3 樣品制備

4L水樣通過0.7 um的濾膜進(jìn)行過濾，再借助4 mol/L硫酸來調(diào)整其酸堿度，在其中添加2 g的依地酸二鈉。通過HLB過濾系統(tǒng)進(jìn)行獲取。過濾之后的濾膜，在冷凍干燥之后稱重，減去濾膜的重量，得到顆粒物的質(zhì)量。將飼料和沉淀物進(jìn)行冷凍之后，再研磨和過篩。取2 g，放置于50 ml的離心管內(nèi)，添加酸堿度為3.0的檸檬酸緩沖物質(zhì)、乙腈各10 ml。超聲提取15 min之后進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)移至平底燒瓶中，此過程重復(fù)兩次。在55℃取上清液，促使提取液進(jìn)行蒸發(fā)，然后用超純水定容到200 ml，添加0.2 g的依地酸二鈉，攪拌均勻之后充分利用萃取設(shè)備來獲得樣品。

魚類的肝臟、肌肉中含有基質(zhì)效應(yīng)的脂肪，在采集樣品時(shí)，要采用凈化柱去掉其中的脂肪。對于血液樣品，靜置取100 uL的上清液，放入500 ml的玻璃管中，添加0.5 g/L的依地酸二鈉。通過4 mol/LH2SO4來調(diào)整酸堿度，采用萃取設(shè)備來獲得樣品。對于肌肉、肝臟樣品，取2 g，放進(jìn)15 ml的0.1mol/L的檸檬緩沖液中，再加15 ml甲醇，置于50 ml離心管內(nèi)，超聲提取15 min。整個(gè)提取過程重復(fù)兩次，取上清液至平底燒瓶中，超純水定容到200 ml，添加0.2 g依地酸二鈉，攪拌均勻后萃取[3]。

在進(jìn)行萃取時(shí)，用甲醇以及超純水對HLB柱進(jìn)行激化。萃取結(jié)束之后，采用10 ml超純水淋洗HLB柱，采用甲醇以及乙酸乙酯來對HLB柱進(jìn)行清洗。定容完成后還要通過針頭式過濾設(shè)備對定容后的樣品進(jìn)行篩選，放進(jìn)容器中，準(zhǔn)備分析和檢測。

1.4 配置標(biāo)準(zhǔn)品溶液

將10 mg抗生素標(biāo)品放入100 ml的甲醇中, 在含有0.5%的1 mol/L氫氧化鈉的甲醇中，放入氟喹諾酮。同時(shí)在100 ml的超純水內(nèi)放入β-內(nèi)酰胺物質(zhì)，保存環(huán)境為5℃，7 d換一次，另外的儲(chǔ)備液則在-20℃環(huán)境下保存。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在對樣品進(jìn)行研究時(shí)，要采用兩種不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線，一種是高濃度的，一種是低濃度的。前者的范圍是10-200 ug/L,R2＞0.995，后者的范圍是。對于回收的數(shù)據(jù)，要對養(yǎng)殖場的飼料、魚類、水體等進(jìn)行加標(biāo)，其中加標(biāo)的范圍是100 ng/L,100 ng/g,100 ug/g。水體、血液、肝臟、肌肉中抗生素回收率范圍則在60%～180%之間，其種類達(dá)到了32、38、35、33種。分析樣品時(shí)，每7種樣品進(jìn)行一次抗生素檢測，標(biāo)樣濃度變化范圍不能大于±21%，設(shè)備也不能波動(dòng)太大[4]。

2 檢測結(jié)果

2.1 顆粒物、水體、飼料、沉積物中的抗生素分布

在通過上述方法進(jìn)行檢測之后，得出了水體、飼料、沉積物中的抗生素分布情況。其中總共檢測出35種抗生素中的7種，比如林可霉素、諾氟沙星、磺胺嘧啶、北里霉素等。殘留量最高的是脫水紅霉素，因?yàn)檫@是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最常用的一種抗生素。

表1 非生物樣品內(nèi)的抗生素分布

2.2 魚體組織中的抗生素殘留

魚體抗生素含量的殘留情況如下表所示，共檢測出35種抗生素中的9種，包括了恩諾沙星、林可霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星等。

表2 魚體組織中的抗生素情況

從上表可以看出魚體組織中的抗生素分布情況，脫水紅霉素的殘留量最高，魚肝臟、魚血液、魚肌肉中均檢測出了大量脫水紅霉素。因?yàn)榧t霉素藥效好，成本低，所以被廣泛使用在水產(chǎn)養(yǎng)殖中。含量較高的還有環(huán)丙沙星、諾氟沙星、甲氧咔啶等，這些抗生素流入人口密集的流域，造成了環(huán)境污染。

2.3 水產(chǎn)品的飲食風(fēng)險(xiǎn)

以上水產(chǎn)品含有大量的抗生素，容易給人們的健康帶來威脅[5]。因?yàn)槿藗兂３Ｊ秤敏~體肌肉部分，所以這次研究中主要針對的是魚體。其中檢測出含量超過50%的抗生素有脫水紅霉素、甲氧咔啶、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、培氟沙星。體重正常的成人在食用了這些魚類產(chǎn)品之后，間接攝入大量抗生素，甚至超過了每日允許值。這些魚類產(chǎn)品未達(dá)到安全食用的標(biāo)準(zhǔn)，有的甚至超過允許殘留量的20%，極有可能給人的健康帶來一定的風(fēng)險(xiǎn)[6]。

3 討論

抗生素作為水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗菌性藥物，由于抗生素特有的藥留和耐藥性，已經(jīng)嚴(yán)重影響水產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，為防止抗生素耐藥性的產(chǎn)生，應(yīng)科學(xué)合理用藥，下一步應(yīng)研發(fā)新一代替代品，希望有關(guān)職能部門做到嚴(yán)格的監(jiān)控和限制,減輕抗生素殘留危害,嚴(yán)格執(zhí)行休藥期制度,嚴(yán)格檢測和限制藥殘超標(biāo)水產(chǎn)品進(jìn)入市場,確保市民吃上安全的水產(chǎn)品。