鄔劼 王曉琳 黃潔雪 刁春友 閆曉陽 吉沐祥

摘要：為篩選有效控制草莓炭疽病和灰霉病的新型殺菌劑，采取菌絲生長速率法，測定7種新型殺菌劑對2種病菌的抑菌活性。結(jié)果表明，四霉素、氟啶胺、吡唑醚菌酯對膠孢炭疽菌的抑制作用較強，其中四霉素的EC50最小，為0.130 6 μg/mL，毒力最強;氟啶胺的毒力次之，EC50為0.145 8 μg/mL;多抗霉素B最弱，EC50為 44.845 5 μg/mL。氟啶胺、腈苯唑、四霉素均對草莓灰霉病菌抑制作用較強，其中氟啶胺抑制活性最高，EC50為 0.039 6 μg/mL;腈苯唑、四霉素抑菌活性相對較高，EC50分別為0.077 3 μg/mL、0.221 9 μg/mL;多抗霉素B抑菌效果最弱，EC50為3.691 0 μg/mL。因此，供試藥劑中四霉素對膠孢炭疽菌病病菌最敏感，氟啶胺對草莓灰霉病病菌最敏感。說明生物藥劑四霉素和化學藥劑氟啶胺可同時防治炭疽病和灰霉病，腈苯唑更適用于控制灰霉病。

關(guān)鍵詞：草莓;膠孢炭疽菌;灰霉病菌;殺菌劑;毒力測定

中圖分類號： S436.68?文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2019）20-0129-04

草莓（Fragaria×ananassa Duch.）為薔薇科草莓屬聚合果，是多年生草本植物。草莓果實呈心形，色澤鮮紅，飽滿多汁，酸甜適度，香味宜人，有“水果皇后”的美譽，深受消費者歡迎[1]。隨著經(jīng)濟發(fā)展，鮮食草莓的需求量增大，我國草莓種植面積也不斷擴大，隨之而來的病害問題也日益嚴重，其中灰霉病、炭疽病是草莓生產(chǎn)中的2種重要真菌病害。

草莓炭疽病主要發(fā)生在苗期和定植初期，是典型的高溫高濕性病害，也是危害嚴重、防治難度較大的病害之一。草莓炭疽病主要是由膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）、尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum）、草莓炭疽病菌（Colletotrichum fragariae）引起的，主要危害匍匐莖、葉柄、葉片，花、果實及根部也會受害。發(fā)病嚴重時，病菌侵染短縮莖，導致植株凋萎死亡[2]。草莓灰霉病是全世界范圍內(nèi)的主要病害之一，在我國發(fā)生較嚴重。灰霉病主要是由灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.）引起的，其具有寄主范圍廣、遺傳變異快、繁殖能力強等特點[3]，癥狀主要發(fā)生在草莓花器、果實、葉片和葉柄，病菌主要從植株傷口和枯死部位侵入，花器和果實染病后腐爛。灰葡萄孢能夠隨空氣、灌溉水、農(nóng)具以及人員走動傳播，其傳播能力強和速度快是造成草莓發(fā)病廣、發(fā)病快的主要原因，其導致的草莓爛果使得草莓減產(chǎn)率普遍在 10%～20%，嚴重時達到50%以上[4]。由于目前主栽品種抗病性較差、種植規(guī)模擴大以及長期連作等原因，草莓灰霉病的發(fā)生日趨嚴重。

目前，化學方法仍是防治草莓炭疽病、灰霉病常用且有效的措施之一，主要采用苯并咪唑類、甲氧基丙烯酸酯（QoIs）類和甾醇脫甲基抑制劑類（DMIs）等殺菌劑進行防治。生產(chǎn)上防治炭疽病常用的殺菌劑有多菌靈、代森錳鋅、甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯、嘧菌酯、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑等;防治灰霉病的常規(guī)殺菌劑有腐霉利、嘧霉胺、啶酰菌胺、百菌清、異菌脲、嘧菌環(huán)胺等。然而，隨著殺菌劑頻繁使用與劑量的增加，草莓炭疽病病菌和灰霉病病菌已對多種殺菌劑產(chǎn)生抗藥性。有研究表明，杭州市草莓炭疽病病菌已存在高比例的乙霉威和多菌靈雙抗菌系[5];江蘇草莓灰霉病病菌對多菌靈、異菌脲、乙霉威和嘧霉胺均已產(chǎn)生抗藥性[6];多菌靈、嘧菌酯、吡唑醚菌酯對上海地區(qū)草莓灰霉病病菌種群已基本無效[7];江蘇丘陵地區(qū)草莓灰霉病病菌以高抗QoIs類藥劑的種群為主導[8];徐州草莓灰霉病病菌對嘧霉胺已產(chǎn)生抗藥性[9];湖南省草莓灰霉病病菌已對多菌靈、嘧霉胺和腐霉利產(chǎn)生抗藥性，造成實際防治效果并不理想[10]。

因此，為豐富藥劑品種，延緩抗藥性的產(chǎn)生，本研究開展防治草莓炭疽病和灰霉病的新藥劑篩選工作。本研究選擇7種相對新型的低毒低殘留殺菌劑進行室內(nèi)毒力測定，以期篩選出適用于目前已產(chǎn)生抗藥性病菌的防治藥劑，為生產(chǎn)上有效防治草莓炭疽病和灰霉病提供科學依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?供試菌株

分別引起草莓炭疽病和灰霉病的膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）、灰霉病病菌（Botrytis cinerea Pers.）由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學研究所生態(tài)農(nóng)業(yè)研究室分離，并保存于4 ℃冰箱中備用。

1.2?供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）用于膠孢炭疽菌、灰霉病病菌的分離、保存以及毒力測定。

1.3?供試藥劑

25%吡唑醚菌酯懸浮劑（suspensionconcentrates，簡稱SC）（江蘇東臺東南化工有限公司）、500 g/L氟啶胺SC（寧波石原金牛農(nóng)業(yè)科技有限公司）、24%腈苯唑SC（美國陶氏益農(nóng)公司）、41.7%氟吡菌酰胺SC（拜耳生物科技有限公司）、40%酚菌酮水乳劑（emulsion in water，簡稱EW）（江蘇騰龍生物藥業(yè)有限公司）、0.3%四霉素（aqueous solutions，簡稱AS）（遼寧微科生物工程股份有限公司），16%多抗霉素B[興農(nóng)藥業(yè)（中國）公司]。各藥劑均用無菌水配制成10 000 μg/mL的母液。

1.4?試驗時間與地點

于2018年9月10—18日于江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學研究所中心實驗室開展本試驗。

1.5?含藥培養(yǎng)基的制備

分別將上述7種供試藥劑的母液依次稀釋至一定濃度，再將1 mL藥液與9 mL PDA培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿內(nèi)混勻，制成含系列梯度濃度藥劑的PDA培養(yǎng)基（表1），以無菌水作空白對照（CK），各處理重復3次。

草莓生產(chǎn)中的病害種類多，發(fā)生情況復雜，科學合理的防治成為草莓生產(chǎn)中的關(guān)鍵點[13]?；瘜W防治仍是控制草莓炭疽病、灰霉病發(fā)生和減少損失的主要途徑，但由于可選藥劑有限，殺菌劑單劑重復和過量使用造成病原菌對殺菌劑產(chǎn)生抗性，導致使用量無限擴大的惡性循環(huán)，因此迫切需要篩選防治草莓灰霉病和炭疽病的殺菌劑來減緩殺菌劑的抗藥性。

氟啶胺為二甲基苯胺類殺菌劑，中國農(nóng)藥信息網(wǎng)顯示氟啶胺登記在馬鈴薯晚疫病、番茄灰霉病、辣椒疫病等，在發(fā)病前或者發(fā)病初期用藥。科研工作者在灰霉病的防治方面做了一些研究，汪漢成等研究氟啶胺、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅等4種殺菌劑對煙草灰霉病病菌的毒力試驗，發(fā)現(xiàn)氟啶胺和咪鮮胺對煙草灰霉病菌菌絲生長活性抑制最強[14]。趙楊等在海城地區(qū)進行溫室蔬菜灰霉病種菌試驗發(fā)現(xiàn)，6種殺菌劑對蔬菜灰霉病病菌效果最好的是氟啶胺，EC50范圍為0.013～0.066 μg/mL[15]。劉妍等試驗發(fā)現(xiàn)，氟啶胺對湖南地區(qū)草莓灰霉病菌的EC50為0.028 3 μg/mL[16]，與本研究結(jié)果相似，氟啶胺對句容地區(qū)草莓灰霉病病菌的EC50為 0.039 6 μg/mL。

四霉素為不吸水鏈霉菌梧州亞種的發(fā)酵代謝產(chǎn)物，目前在花生根腐病、水稻立枯病、小麥赤霉病和白粉病等作物病害上登記，四霉素通過抑制菌絲體的生長，誘導作物產(chǎn)生抗性而達到防治作物病害的目的[17]。宋瑩瑩采用菌絲生長速率法測得四霉素對山東165灰霉菌株的EC50分布范圍為 0.04～1.09 μg/mL[18]，四霉素對句容地區(qū)草莓灰霉病病菌的EC50為0.221 9 μg/mL，在山東地區(qū)的測定結(jié)果范圍內(nèi)，說明四霉素對草莓灰霉病病菌具有很好的抑制效果。在膠孢炭疽菌的抑制方面還未見氟啶胺與四霉素的報道，因此，建議進一步開展氟啶胺和四霉素及其相關(guān)復配產(chǎn)品在防治草莓炭疽病、灰霉病的試驗研究和農(nóng)藥開發(fā)登記，對于緩解目前草莓上登記農(nóng)藥品種少和防止抗藥性風險等具有積極意義。此外，培養(yǎng)皿內(nèi)的抑菌活性不能完全代表田間防治效果，下一步將開展氟啶胺和四霉素的田間防治效果試驗。

參考文獻：

[1]張國珍，鐘?珊. 草莓灰霉病研究進展[J]. 植物保護，2018，44（2）：1-10.

[2]徐?英，馬?森，楊?奎，等. 40%戊唑醇懸浮劑對草莓炭疽病的毒力測定及田間防效[J]. 農(nóng)藥，2017，56（11）：853-855.

[3]Leroux P，F(xiàn)ritz R，Debieu D，et al. Mechanisms of resistance to fungicides in field strains of Botrytis cinerea[J]. Pest Management Science，2002，58（9）：876-888.

[4]Cordova L G，Amiri A，Peres N A . Effectiveness of fungicide treatments following the Strawberry Advisory System for control of Botrytis fruit rot in Florida[J]. Crop Protection，2017，100：163-167.

[5]韓國興，禮?茜，孫飛洲，等. 杭州地區(qū)草莓炭疽病病原鑒定及其對多菌靈和乙霉威的抗藥性[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學，2009（6）：1169-1172.

[6]潘以樓，朱桂梅，郭?建. 江蘇草莓灰霉病菌對5種殺菌劑的抗藥性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學報，2013，29（2）：299-304.

[7]肖?婷，成?瑋，顏偉中，等. 上海地區(qū)草莓灰霉病病菌種群抗藥性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2018，46（20）：117-120.

[8]肖?婷，許?媛，陳宏州，等. 江蘇丘陵地區(qū)草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）對QoIs類殺菌劑的抗藥性研究[J]. 果樹學報，2017，34（5）：603-610.

[9]白耀博，陳學進，鳳舞劍，等. 徐州市草莓灰霉病菌對嘧霉胺的抗藥性[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2016，44（35）：162-164.

[10]張?亞，王?翀，劉雙清，等. 湖南省草莓灰霉病菌對4種殺菌劑的抗藥性檢測[J]. 植物保護，2016，42（5）：181-187.

[11]朱春雨，吳文平，張?弘，等. 農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準則（殺菌劑）：第2部分抑制病原真菌菌絲生長試驗平皿法[S]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[12]黃彰欣. 植物化學保護實驗指導[M]. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1993：57.

[13]陸?丹，曹婷婷，黃耀亮，等. 草莓炭疽病、灰霉病、白粉病發(fā)生規(guī)律的調(diào)查[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學，2018，59（12）：2177-2178.

[14]汪漢成，李麗翠，張之礬，等. 四種殺菌劑對煙草灰霉病菌的毒力及對煙草灰霉病的抑制作用[J]. 植物保護學報，2019，46（2）：377-384.

[15]趙?楊，孫柏欣，陳?樂，等. 海城地區(qū)溫室蔬菜灰霉病菌對6種藥劑的抗藥性檢測[J]. 遼寧農(nóng)業(yè)科學，2019（1）：42-44.

[16]劉?妍，張?亞，項雅琴，等. 啶酰菌胺與氟啶胺復配物對水稻紋枯病菌和草莓灰霉病菌的增效作用研究[J]. 植物保護，2018，44（2）：235-240.

[17]劉?剛. 四霉素登記產(chǎn)品和防治對象繼續(xù)增加[J]. 農(nóng)藥市場信息，2018（22）：36.

[18]宋瑩瑩. 山東省灰霉病菌對常用殺菌劑的抗性監(jiān)測及對吡唑萘菌胺和四霉素的敏感性[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2016：36-38.