茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠腸道黏膜屏障及肝損傷的保護(hù)作用研究

左高隆，陳美艷，林勇,3*，林海燕,3，劉仲華,3，吳文亮

茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠腸道黏膜屏障及肝損傷的保護(hù)作用研究

左高隆1,2，陳美艷1,2，林勇1,2,3*，林海燕1,2,3，劉仲華1,2,3，吳文亮1,4

1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)茶學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2. 國(guó)家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128；3. 湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128；4. 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125

為探討茯磚茶對(duì)高脂誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝?。∟on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）大鼠腸黏膜屏障及肝損傷的保護(hù)作用，將SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組、NAFLD組、茯磚茶低、高劑量組，每組8只。通過(guò)分析大鼠的采食量、體重變化、血脂指標(biāo)、肝臟指標(biāo)及病理切片來(lái)評(píng)估NAFLD大鼠模型的構(gòu)建情況及茯磚茶的干預(yù)作用。通過(guò)分析空腸與結(jié)腸病理及PAS染色切片、絨毛高度/隱窩深度值（V/C值）、血清二胺氧化酶（DAO）和脂多糖（LPS）活力評(píng)估腸道完整性和通透性；通過(guò)分析空腸上皮間淋巴細(xì)胞（JIL）數(shù)量和血清腫瘤壞死因子（TNF-α）活力評(píng)估腸道相關(guān)炎癥。結(jié)果表明，茯磚茶能減少NAFLD大鼠的采食量和體重，降低血脂水平，減少血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活力，并抑制肝臟的脂質(zhì)聚集和炎細(xì)胞浸潤(rùn)。茯磚茶還降低了血清炎癥因子TNF-α和血清LPS的水平，并使血清DAO活力上升。同時(shí)，茯磚茶抑制了NAFLD大鼠空腸和結(jié)腸絨毛中發(fā)生的炎細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象，減少了空腸絨毛脫落、斷裂、稀疏和紊亂現(xiàn)象，增加了空腸絨毛V/C值，降低了空腸上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量，增加了空腸和結(jié)腸的杯狀細(xì)胞數(shù)量。這些結(jié)果說(shuō)明，茯磚茶能夠有效的改善高脂飲食誘導(dǎo)的腸道黏膜屏障及肝損傷，起到防治NAFLD的作用。

茯磚茶；非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）；腸道屏障

非酒精性脂肪肝?。∟on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）表現(xiàn)為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)貯積和脂肪變性，與肥胖、胰島素抵抗等代謝綜合癥密切相關(guān)[1]。據(jù)報(bào)道，全球NAFLD的患病率約為24%[2]，Day等[3]提出的“二次打擊”學(xué)說(shuō)是目前被廣泛接受的NAFLD發(fā)病機(jī)制。然而，越來(lái)越多的研究表明腸道穩(wěn)態(tài)與NAFLD的發(fā)生和發(fā)展有著緊密聯(lián)系，特別是“腸-肝軸”理論的提出為研究腸道與NAFLD之間的關(guān)系提供了依據(jù)[4]。NAFLD患者普遍存在腸道屏障損傷，當(dāng)腸道功能被破壞時(shí)，會(huì)增加腸道通透性，導(dǎo)致促炎性細(xì)菌成分如脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）易位，刺激toll樣受體4（TLR4），并通過(guò)門(mén)靜脈進(jìn)入肝臟，引起肝臟炎癥應(yīng)激反應(yīng)和全身的胰島素抵抗，進(jìn)而促使NAFLD發(fā)生和發(fā)展[5]。已有大量研究表明，茶葉可以調(diào)節(jié)腸道菌群，并能夠很好地改善胰島素抵抗、肝臟脂質(zhì)聚集和炎癥等與肥胖相關(guān)的代謝綜合征[6-7]。茯磚茶是湖南極具特色的黑茶，經(jīng)過(guò)冠突散囊菌發(fā)酵，促進(jìn)了茶葉中有機(jī)成分的轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生了大量氧化產(chǎn)物、水解產(chǎn)物和有機(jī)酸等物質(zhì)[8]。我們之前的研究表明茯磚茶能夠調(diào)節(jié)高脂血癥小鼠的脂質(zhì)代謝紊亂并減輕肝臟的氧化應(yīng)激[9]。也有文獻(xiàn)報(bào)道，喂食茯磚茶能夠降低高脂飲食大鼠的體重和肝臟脂肪變性，并抑制高脂血癥的發(fā)展[10]；茯磚茶能夠?qū)δc道病原菌產(chǎn)生抑制作用，并改變腸道菌群的構(gòu)成[11-12]?；诖?，我們推測(cè)茯磚茶能夠?qū)AFLD大鼠的腸道黏膜屏障損傷起到保護(hù)作用，從而能改善NAFLD相關(guān)癥狀。本文從體重、器官指數(shù)、炎癥因子、內(nèi)毒素水平、腸肝損傷等角度，探究茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠腸道黏膜屏障及肝損傷的保護(hù)作用。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 茶葉樣品

茯磚茶（700?g包裝）由湖南中茶茶業(yè)有限公司安化茶廠提供，經(jīng)黑毛茶緊壓發(fā)花干燥后制成（生產(chǎn)日期：2013年10月28日，批號(hào)：051）。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SD雄性大鼠由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，體質(zhì)量為(100±20)?g，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002。

1.1.3 飼料配方

高脂飼料：參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范-輔助降血脂功能評(píng)價(jià)方法》（2012年修訂），配方為基礎(chǔ)飼料63.6%、蔗糖20.0%、豬油15.0%、膽固醇1.2%、膽酸鈉0.2%。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑

總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-c）、高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein cholesterol，HDL-c）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST）、二胺氧化酶（Diamine oxidase，DAO）測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor，TNF-α）、脂多糖（LPS）Elisa測(cè)定試劑盒購(gòu)自卡邁舒（上海）生物科技有限公司。

1.2.2 儀器

LC10AT-VP Plus高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司）、MIKRO 22R冷凍離心機(jī)（德國(guó)Hettich公司）、Modulyod-230冷凍干燥機(jī)（美國(guó)Thermo公司）、Thermo Scientific Varioskan Flash酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）、UV-2550紫外分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）、AEU-210湘儀電子天平（長(zhǎng)沙湘儀天平儀器公司）、Allegra X-22R臺(tái)式離心機(jī)（美國(guó)貝克曼公司）、移液槍（美國(guó)Thermo公司）、壓力蒸汽滅菌鍋（上海中安醫(yī)療器械廠）、病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）、石蠟包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 茶樣干粉制備

取適量茯磚茶樣品，按料液比1∶10，沸水浸提3次，每次浸提20?min，濾紙過(guò)濾，合并浸提液，減壓濃縮至一定體積，于–20℃預(yù)凍12?h，放入冷凍干燥機(jī)干燥24?h，收集茶粉后于–20℃保存。

1.3.2 茯磚茶感官審評(píng)和生化成分測(cè)定

茶葉審評(píng)采用密碼審評(píng)方法，稱取3?g茶樣，150?mL開(kāi)水沖泡5?min。從外形、湯色、香氣、滋味、葉底5項(xiàng)因子進(jìn)行兩次感官審評(píng)；水浸出物測(cè)定：依據(jù)GB/T 8305—2013方法；茶多酚總量測(cè)定：依據(jù)GB/T 8313—2018；游離氨基酸總量測(cè)定：依據(jù)GB/T 8314—2013；可溶性糖總量測(cè)定：蒽酮-硫酸比色法；咖啡堿含量測(cè)定：高效液相色譜法（HPLC）。

1.3.3 動(dòng)物模型的構(gòu)建和給藥標(biāo)準(zhǔn)

參照已有研究[13]建立動(dòng)物模型和給藥標(biāo)準(zhǔn)，取體質(zhì)量為(100±10)?g的SPF級(jí)雄性SD大鼠，在溫度(25±2)℃和濕度40%~60%的環(huán)境中自由飲食基礎(chǔ)飼料和飲用水。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，將大鼠隨機(jī)平均分為4組：正常組、NAFLD模型組、茯磚茶低劑量組（233?mg·kg-1）、茯磚茶高劑量組（700?mg·kg-1），每組8只。每日上午9點(diǎn)對(duì)茯磚茶組大鼠灌胃不同劑量的茯磚茶水提物，均用蒸餾水配置2?mL，正常組和NAFLD組大鼠灌胃相同體積的蒸餾水。其中正常組大鼠喂食基礎(chǔ)飼料，其余組大鼠喂食高脂飼料，共持續(xù)56?d。最后一次灌胃后禁食不禁水24?h，將大鼠麻醉，主動(dòng)脈取血，解剖收集肝臟、脾臟和腸道，迅速稱重后于–80℃保存。給藥標(biāo)準(zhǔn)：選擇茶葉人體推薦量（成人60?kg每日飲用10?g干茶，即166.7?mg·kg-1）的5、15倍為茯磚茶組的低、高劑量濃度。每只大鼠每日給予茶粉劑量（mg·kg-1）=166.7×倍數(shù)×浸提率（28%）。

1.3.4 大鼠體質(zhì)量和采食量的測(cè)定

大鼠體質(zhì)量每7?d稱取一次。每日給各組大鼠定量添加350?g飼料，定期回收并稱取當(dāng)日剩余飼料，計(jì)算采食量。

1.3.5 血清指標(biāo)的測(cè)定

主動(dòng)脈取血后，放入EP管中，在4℃靜置2?h后，于4℃下3?500?r·min-1離心15?min，取上清液。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作步驟檢測(cè)血清TG、TC、HDL-c、LDL-c、ALT、AST、LPS、DAO和TNF-α含量。

1.3.6 器官指數(shù)測(cè)定

將大鼠各器官用4℃生理鹽水洗凈血漬，濾紙吸干表面水分后稱其濕重。器官指數(shù)=器官濕質(zhì)量（g）/大鼠體質(zhì)量（g）×100%。

1.3.7 大鼠組織病理學(xué)觀察

大鼠肝臟和腸道病理切片制備：分別取每只大鼠肝臟、空腸和結(jié)腸組織的相同部位，在10%福爾馬林液下固定，固定后經(jīng)流水沖洗數(shù)小時(shí)。制備石蠟切片，HE染色，顯微鏡下拍照觀察。另對(duì)空腸和結(jié)腸組織進(jìn)行PAS染色，顯微鏡下拍照觀察。組織切片倍數(shù)為100×和200×。

1.3.8 大鼠空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度和上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定

利用Caseviewer圖像分析軟件對(duì)大鼠的空腸絨毛高度和隱窩深度進(jìn)行測(cè)定。每組隨機(jī)選取4只大鼠的空腸HE染色切片，每張切片選取2根形態(tài)結(jié)構(gòu)完整的絨毛，計(jì)算絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度（Villus height/Crypt depth，V/C）的比值；統(tǒng)計(jì)絨毛上每100個(gè)空腸細(xì)胞間分布的上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量。

1.3.9 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 茯磚茶感官審評(píng)及主要化學(xué)成分分析

本次試驗(yàn)使用的茯磚茶樣品菌花較多，湯色橙黃，葉底黑褐，香氣和滋味純正；圖1表明，其水浸出物、茶多酚、咖啡堿、可溶性糖含量和氨基酸總量分別為28.94%、11.02%、5.28%、5.49%和0.97%。其結(jié)果與已有文獻(xiàn)報(bào)道[14]相近，基本符合茯磚茶的主要內(nèi)含物質(zhì)品質(zhì)特征。

2.2 茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠體重和采食量的影響

表1表明，與正常組比較，NAFLD組體重從第28天開(kāi)始顯著增加（<0.05），這說(shuō)明喂食高脂飲食一定時(shí)間后能夠明顯增加大鼠體重；與NAFLD組比較，茯磚茶高劑量組從第7天到第56天體重顯著減少（<0.05），茯磚茶低劑量組在第7、21、35、42、49、56天體重顯著減少（<0.05），接近甚至低于正常值。這些表明茯磚茶能夠有效降低NAFLD大鼠的體重。此外，采食量方面，正常組、NAFLD組、茯磚茶低劑量組相差不大，而茯磚茶高劑量組采食量下降明顯。

2.3 茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠血清指標(biāo)的影響

表2表明，與正常組比較，NAFLD組血清TG、TC和LDL-c水平都極顯著增加（<0.01），HDL-c水平極顯著降低（<0.01），這說(shuō)明喂食高脂飲食能夠明顯改變大鼠血脂水平；與NAFLD組比較，茯磚茶組血清TG、TC和LDL-c水平都極顯著降低（<0.01），HDL-c水平極顯著升高（<0.01）。此外，與正常組比較，茯磚茶低劑量組血清TG、LDL-c和茯磚茶高劑量組血清TG、TC、HDL-c、LDL-c水平無(wú)顯著性差異（>0.05）。這說(shuō)明茯磚茶能夠有效改善NAFLD大鼠的血脂水平，使其接近于正常水平。

圖1 茯磚茶主要化學(xué)成分分析結(jié)果

2.4 茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠肝臟損傷的影響

表3表明，與正常組比較，NAFLD組肝體比、脾體比、血清AST和ALT活力極顯著增加（<0.01），這說(shuō)明高脂飲食能夠引起肝臟損傷；與NAFLD組比較，茯磚茶低劑量組的肝體比和血清ALT活力以及茯磚茶高劑量組的肝體比和脾體比顯著降低（<0.05），茯磚茶低劑量組的脾體比和血清AST活力以及茯磚茶高劑量組的血清AST和ALT活力極顯著降低（<0.01）；此外，與正常組比較，茯磚茶低劑量組脾體比、血清ALT活力和茯磚茶高劑量組血清AST、ALT活力無(wú)顯著性差異（>0.05）。這說(shuō)明茯磚茶能夠有效減輕NAFLD大鼠的肝臟損傷。

表1 茯磚茶對(duì)大鼠體重和采食量的影響（n=8）

注：與NAFLD組比較，*<0.05，**<0.01；與正常組比較，#<0.05，##<0.01。下同

Note: Compared with NAFLD group,*<0.05,**<0.01. Compared with normal group,#<0.05,##<0.01. The same below

表2 茯磚茶對(duì)大鼠血清指標(biāo)的影響（n=8）

表3 茯磚茶對(duì)大鼠器官指數(shù)和肝臟指標(biāo)的影響（n=8）

2.5 茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

圖2表明，與正常組比較，NAFLD組肝臟肥大，顏色泛白。油紅染色切片顯示，NAFLD組肝臟有大量脂質(zhì)聚集。HE染色切片顯示，NAFLD組黑色箭頭處存在炎細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象，紅色箭頭處存在脂質(zhì)聚集現(xiàn)象。這說(shuō)明高脂飲食會(huì)引起大鼠肝臟產(chǎn)生炎癥和發(fā)生脂質(zhì)紊亂；與NAFLD組比較，茯磚茶組肝臟較瘦小，顏色紅潤(rùn)。油紅染色切片顯示，茯磚茶組尤其高劑量條件下肝臟脂質(zhì)聚集現(xiàn)象明顯減少。HE染色切片顯示，茯磚茶組無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和脂質(zhì)聚集現(xiàn)象。這說(shuō)明茯磚茶能夠減輕NAFLD大鼠肝臟炎癥并改善脂質(zhì)代謝紊亂。

注：A：正常組；B：NAFLD組；C：茯磚茶低劑量組；D：茯磚茶高劑量組；PH：照片；OR：油紅染色切片；HE：HE染色切片。下同

2.6 茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠炎癥的影響

表4表明，與正常組比較，NAFLD組血清DAO活力極顯著降低（<0.01），血清LPS、TNF-α活力和空腸上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量極顯著增加（<0.01），這說(shuō)明高脂飲食會(huì)破壞大鼠腸道黏膜完整性，增加腸道通透性和引發(fā)炎癥；與NAFLD組相比，茯磚茶組血清DAO活力極顯著增加（<0.01），血清LPS活力和空腸上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量均極顯著降低（<0.01），而TNF-α活力在茯磚茶低高劑量組中分別顯著和極顯著降低（<0.05和<0.01）；此外，與正常組比較，茯磚茶組血清DAO、TNF-α活力和空腸上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量無(wú)顯著性差異（>0.05）。這說(shuō)明茯磚茶能夠有效保護(hù)NAFLD大鼠腸道黏膜完整性，降低腸道通透性和減輕炎癥。

2.7 茯磚茶對(duì)NAFLD大鼠腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

表5表明，與正常組比較，NAFLD組空腸絨毛高度和V/C值極顯著減少（<0.01），隱窩深度極顯著增加（<0.01），這說(shuō)明高脂飲食會(huì)破壞大鼠的腸道完整性及吸收功能；與NAFLD組比較，茯磚茶組空腸絨毛高度和V/C值極顯著增加（<0.01），隱窩深度極顯著減少（<0.01）；此外，與正常組比較，茯磚茶組空腸絨毛高度、隱窩深度和V/C值基本無(wú)顯著性差異（>0.05）。這說(shuō)明茯磚茶能夠改善NAFLD大鼠的腸道完整性及吸收功能，并使其接近于正常狀態(tài)。大鼠腸道病理組織切片表明（圖3），與正常組比較，NAFLD組空腸絨毛大量斷裂，排列紊亂，有明顯從腸黏膜上脫落的現(xiàn)象，空腸與結(jié)腸黑色箭頭處存在炎細(xì)胞浸潤(rùn)。這說(shuō)明高脂飲食會(huì)破壞大鼠腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，增加腸道炎癥；與NAFLD組比較，茯磚茶組的空腸絨毛排列整齊，緊密，絨毛完整性高，且空腸和結(jié)腸都未產(chǎn)生炎癥，無(wú)病理特征。這說(shuō)明茯磚茶能夠?qū)AFLD大鼠的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)完整性起到保護(hù)作用，并減輕腸道炎癥。大鼠腸道PAS染色切片表明（圖4），與正常組比較，NAFLD組空腸和結(jié)腸黑色箭頭處杯狀細(xì)胞數(shù)量較少，稀疏且分布不均。這說(shuō)明高脂飲食會(huì)破壞腸道的黏液屏障；與NAFLD組比較，茯磚茶組杯狀細(xì)胞數(shù)量豐富，分布緊密且均勻。這說(shuō)明茯磚茶能夠保護(hù)腸道的黏液屏障。

表4 茯磚茶對(duì)大鼠腸道黏膜屏障損傷指標(biāo)的影響（n=8）

表5 茯磚茶對(duì)大鼠空腸絨毛的影響（n=8）

3 討論

NAFLD是全球一個(gè)嚴(yán)重的健康問(wèn)題，然而目前針對(duì)于NAFLD的防治措施僅限于飲食調(diào)節(jié)和體重控制。因此，尋求能有效防治NAFLD的植物資源是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。許多研究表明，綠茶中兒茶素等物質(zhì)對(duì)于高脂飲食動(dòng)物的體重調(diào)節(jié)、脂質(zhì)代謝紊亂、葡萄糖代謝等具有十分有益的作用[15]。與綠茶相比，茯磚茶不僅能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，且降低血清TG含量的能力更強(qiáng)[16]，這可能是由于茯磚茶真菌發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生了類異戊二烯糖酐、黃芪甙和異牡荊黃素等新化合物[17]。Gangarapu等[18]發(fā)現(xiàn)，對(duì)腸道屏障功能保護(hù)可作為一種防治NAFLD及其相關(guān)疾病的新手段。之前有研究證明茯磚茶能夠改變高脂飲食大鼠腸道菌群并保護(hù)大鼠肝臟，但并未對(duì)其保護(hù)腸道黏膜屏障方面展開(kāi)研究[11-12]。我們旨在從腸道黏膜屏障的角度探究茯磚茶對(duì)于NAFLD的保護(hù)作用。

通過(guò)給NAFLD大鼠灌胃茯磚茶，我們發(fā)現(xiàn)茯磚茶能夠有效降低其體重，且高劑量茯磚茶對(duì)于體重的減輕效果更加顯著，這與Foster等[12]的結(jié)果一致。然而，大鼠的采食量隨茯磚茶劑量增加而逐漸降低，這可能是由于茶葉中的咖啡堿、兒茶素以及膳食纖維進(jìn)入胃腸道后影響了飽腹感信號(hào)激素的分泌從而使飽腹感上升[19]。血脂升高提示可能存在脂質(zhì)代謝紊亂[20]。茯磚茶顯著降低了NAFLD大鼠的血脂水平，這對(duì)于調(diào)節(jié)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝紊亂起到了重要作用，除茶多酚和茶多糖等物質(zhì)外，還可能與茯磚茶經(jīng)冠突散囊菌為優(yōu)勢(shì)微生物發(fā)酵后產(chǎn)生的降脂類物質(zhì)有關(guān)[21]。ALT和AST是肝損傷的敏感指標(biāo)，茯磚茶顯著降低了NAFLD大鼠血清中ALT和AST水平。此外，大鼠病理組織切片表明，茯磚茶減少了NAFLD大鼠肝臟炎癥和脂質(zhì)聚集，這可能與茯磚茶內(nèi)含茶多酚和茶多糖等物質(zhì)密切相關(guān)[22]。這些現(xiàn)象說(shuō)明，茯磚茶能夠?qū)AFLD大鼠肝臟損傷起到保護(hù)作用。

圖4 大鼠腸道PAS染色切片（100×）

腸道黏膜屏障損傷后，LPS易位進(jìn)入體循環(huán)并通過(guò)TLR4/核因子-kB（NF-kB）通路介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，同時(shí)降低瘦素水平，誘發(fā)胰島素抵抗，這也是NAFLD產(chǎn)生的重要原因[5]。我們發(fā)現(xiàn)茯磚茶降低了NAFLD大鼠血清LPS和TNF-α水平，這可能是由于茯磚茶的攝入降低了腸道革蘭氏陰性細(xì)菌數(shù)量，而發(fā)揮這種功效的物質(zhì)可能為茶多酚[7]。DAO主要存在于小腸黏膜，其活性是小腸黏膜完整性和成熟度的指標(biāo)[23]，茯磚茶增加了NAFLD大鼠血清中的DAO水平。同時(shí)腸道PAS染色表明，茯磚茶增加了腸道杯狀細(xì)胞數(shù)量。杯狀細(xì)胞分泌的黏蛋白構(gòu)成了腸道的黏液屏障，能夠避免有害細(xì)菌和物質(zhì)與小腸黏膜上皮接觸并減少腸道機(jī)械損傷[24]。小腸上皮間淋巴細(xì)胞是腸道免疫系統(tǒng)最先發(fā)生免疫反應(yīng)的細(xì)胞[25]，茯磚茶顯著減少了NAFLD大鼠空腸的上皮間淋巴細(xì)胞數(shù)量，表明茯磚茶能夠減少病原微生物對(duì)腸道屏障的入侵，這可能是因其富含的茶多糖等物質(zhì)對(duì)腸道菌群失調(diào)起到了調(diào)節(jié)作用[26]。小腸絨毛的V/C值是小腸絨毛完整性及消化吸收功能的重要指標(biāo)[27]。茯磚茶抑制了由高脂飲食引起的V/C值降低，表明其能夠改善NAFLD大鼠的腸道完整性及消化吸收功能。腸道HE染色切片顯示茯磚茶保護(hù)了NAFLD大鼠腸道黏膜屏障的完整性并減少腸道炎癥，可能是由于茯磚茶內(nèi)含兒茶素等物質(zhì)通過(guò)NF-kB途徑抑制了腸道炎癥[28]。此外，茶多糖經(jīng)腸道微生物發(fā)酵后產(chǎn)生的短鏈脂肪酸也有利于抑制炎癥和脂質(zhì)代謝紊亂[29]。因此，我們認(rèn)為茯磚茶能夠有效保護(hù)NAFLD大鼠腸道黏膜屏障，這也可能是減少腸道LPS進(jìn)入體循環(huán)的一個(gè)重要原因。

綜上所述，本研究表明茯磚茶能夠?qū)Ω咧嬍痴T導(dǎo)的NAFLD起到防治作用。這主要是因?yàn)檐虼u茶能夠?qū)AFLD大鼠腸道黏膜屏障損傷起到保護(hù)作用，減少LPS進(jìn)入體循環(huán)，降低血清炎癥因子，改善肝臟脂質(zhì)代謝紊亂和炎癥損傷。我們的研究從腸道黏膜屏障的角度完善了茯磚茶對(duì)于NAFLD的防治作用，然而具體的分子機(jī)制還有待進(jìn)一步探究。

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Protective Effect of Fu Brick Tea on Intestinal Mucosal Barrier and Liver Injury in NAFLD Rats

ZUO Gaolong1,2, CHEN Meiyan1,2, LIN Yong1,2,3*, LIN Haiyan1,2,3, LIU Zhonghua1,2,3, WU Wenliang1,4

1. Key Lab of Tea Science of Ministry of Education, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China; 2. National Research Center of Engineering Technology for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Changsha 410128, China; 3. Hunan Collaborative Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Changsha 410128, China; 4. Tea Research Institute, Hunan Academy of Agricultural Sciences, Changsha 410125, China

To explore the protective effect of Fu brick tea on intestinal mucosal barrier and liver injury in rats with high-fat induced non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).SD male rats were randomly divided into normal, NAFLD, low-dose and high-dose Fu brick tea groups, 8 rats each group. The establishment of NAFLD rat model and the intervention effect of Fu brick tea were evaluated by analyzing the feed intake, weight change, blood lipid index, liver index and pathological section of rats. Intestinal integrity and intestinal permeability was assessed by pathological and PAS staining sections of jejunum and colon, villus height/crypt depth (V/C value) serum diamine oxidase (DAO) activity and lipopolysaccharide (LPS) activity. Intestinal-related inflammation was assessed by the number of jejunum intraepithelial lymphocytes (JIL) and the activity of serum tumor necrosis factor-alpha (TNF-α). The results show that Fu brick tea could reduce the feed intake andbody weight of NAFLD rats, decrease blood lipid levels, reduce the activity of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) in serum, and inhibit lipid accumulation and inflammation in the liver. Fu brick tea also reduced the levels of serum inflammatory factors TNF-α and serum LPS and increased the activity of serum DAO. Moreover, Fu brick tea inhibited inflammatory cell infiltration in jejunum and colon villi of NAFLD rats, reduced the jejunum villus shedding, fracture, sparse and disorder, increased the jejunum villus V/C value, and decreased the number of jejunum intraepithelial lymphocytes, and increased the number of goblet cells in the jejunum and colon. These data indicate that Fu brick tea could effectively improve the intestinal mucosal barrier and liver injury induced by high-fat diet, which could be used to prevent and treat NAFLD.

Fu brick tea, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), intestinal barrier

TS272.5+4；R574

A

1000-369X(2019)06-631-10

2019-04-08

2019-07-08

湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目（CX20190518）、作物種質(zhì)創(chuàng)新與資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放研究項(xiàng)目（15KFXM14）

左高隆，男，碩士研究生，主要從事茶葉功能成分利用相關(guān)研究。

ly2005306@163.com