血清外泌體miR-92a在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤康艾注射液聯(lián)合化療治療監(jiān)測(cè)中的臨床意義

王妃菲 張宇 吳筱蓮

[摘要] 目的 探討血清外泌體miR-92a在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤康艾注射液聯(lián)合化療治療監(jiān)測(cè)中的臨床意義。 方法 選取42例彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者為觀察對(duì)象，按照治療方法不同平均分為對(duì)照組和研究組。對(duì)照組患者采用CHOP方案化療，研究組患者在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合康艾注射液治療。采用realtime PCR法檢測(cè)所有患者在治療前后血清中外泌體miR-92a的表達(dá)水平;收集不同時(shí)間點(diǎn)血清評(píng)估m(xù)iR-92a與治療效果的關(guān)系。 結(jié)果 與對(duì)照組相比，研究組患者總有效率明顯升高，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;研究組患者降低血清外泌體miR-92a的程度更為明顯，組間比較差異具有顯著性（P<0.05）。與化療前相比，對(duì)照組和研究組均能明顯降低患者血清外泌體miR-92a的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-92a與c-MYC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.451，P<0.001）。血清外泌體miR-92a區(qū)分緩解與非緩解患者的效能較強(qiáng)。 結(jié)論 血清外泌體miR-92a在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者中表達(dá)升高，其檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè)康艾注射液聯(lián)合化療治療的臨床療效。

[關(guān)鍵詞] miR-92a;彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤;臨床意義;康艾注射液

[中圖分類號(hào)] R733.1 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-9701（2019）30-0042-04

Clinical significance of serum exosome miR-92a in the monitoring of Kangai injection combined with chemotherapy for diffuse large B-cell lymphoma

WANG Feifei ? ZHANG Yu ? WU Xiaolian

Department of Hematology， the First Affiliated Hospital of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou ? 310000， China

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of serum exosome miR-92a in the monitoring of Kangai injection combined with chemotherapy for diffuse large B-cell lymphoma. Methods 42 patients with diffuse large B-cell lymphoma were enrolled in the study. They were divided into control group and study group according to different treatment methods. The control group was treated with CHOP chemotherapy， and the patients in the study group were treated with Kangai injection on the basis of treatment in the control group. The expression levels of exosome miR-92a in serum of all patients before and after treatment were detected by realtime PCR. The relationship between serum miR-92a and therapeutic effect was evaluated at different time points. Results Compared with that of the control group， the total effective rate of the study group was significantly higher， and the difference between the groups was statistically significant（P<0.05）. Patients in the study group were more likely to reduce serum exosome miR-92a， and the difference between the two groups was significant（P<0.05）. Compared with that before chemotherapy， both the control group and the study group significantly reduced the expression level of serum exosome miR-92a in patients after chemotherapy， and the difference was statistically significant（P<0.05）. There was a negative correlation between miR-92a and c-MYC in patients with diffuse large B-cell lymphoma（r=-0.451， P<0.001）. Serum exosome miR-92a had strong performance in distinguishing between patients with remission and non-remission. Conclusion The expression of serum exosome miR-92a is high in patients with diffuse large B-cell lymphoma. The detection can be used to monitor the clinical efficacy of Kangai injection combined with chemotherapy.

[Key words] miR-92a; Diffuse large B-cell lymphoma; Clinical significance; Kangai injection

細(xì)胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤最常見的一種病理類型，病理形態(tài)學(xué)主要表現(xiàn)為B淋巴細(xì)胞呈彌漫性生長(zhǎng)，細(xì)胞的大小為正常淋巴細(xì)胞的2倍，被稱為彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤[1-2]。目前，臨床主要通過(guò)制定合適的化療方案來(lái)治療此疾病，加以康艾注射液對(duì)化療患者進(jìn)行輔助治療，具有清熱解毒、消瘀散結(jié)之功效，臨床上常用于肺癌、惡性淋巴瘤及惡性腫瘤等疾病[3-4]。彌漫大B淋巴瘤的治療藥物價(jià)格較為昂貴，也存在一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)，給患者帶來(lái)了極大的經(jīng)濟(jì)壓力和心理負(fù)擔(dān)，大部分患者難以接受，進(jìn)一步探尋有檢測(cè)意義的分子標(biāo)記物對(duì)于化療過(guò)程而言十分重要[5-6]。有文獻(xiàn)調(diào)查顯示：血清外泌體miR-92a與癌癥的發(fā)展及檢測(cè)存在一定的意義[7]。國(guó)內(nèi)對(duì)于血清外泌體miR-92a在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤治療檢測(cè)中的作用的相關(guān)研究較少，本研究對(duì)血清外泌體miR-92a在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤康艾注射液聯(lián)合化療治療監(jiān)測(cè)中的臨床意義進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月～2019年2月我院就診并經(jīng)臨床檢查確診為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤[9]患者42例作為研究對(duì)象，按照治療方案不同平均分為兩組，即研究組和對(duì)照組。兩組一般資料比較無(wú)明顯差異（P>0.05），具有可比性。見表1。男23例，女19例，平均年齡（55.09±10.21）歲;AnnArbor分期Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期23例;有B癥狀者18例，伴隨大包塊者9例，乳酸脫氫酶（LDH）升高16例，正常26例;無(wú)肝腎功能障礙、無(wú)身體其他臟器疾病、既往無(wú)化療治療史。

表1 ? 兩組患者基本情況比較

1.2方法

對(duì)照組患者接受標(biāo)準(zhǔn)CHOP方案[環(huán)磷酰胺600 mg/m2（第1天），長(zhǎng)春新堿1.4 mg/m2（第1天），阿霉素25 mg/m2（第1天），和強(qiáng)的松60 mg/d持續(xù)5 d（第1～5天）]?；熋?周重復(fù)1次，6個(gè)療程。研究組患者在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上聯(lián)合康艾注射液（長(zhǎng)白山制藥股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026868，50 mL溶于250 mL 10%葡萄糖溶液，靜脈滴注，1次/d，3周為1個(gè)療程，共6個(gè)療程治療。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)于納入研究的患者分別在化療前、化療中及化療后收集患者靜脈血5.5 mL，健康體檢人群與體檢時(shí)收集靜脈血5.5 mL，置于4℃左右保存，離心15 min，吸出上層血清，然后再離心15 min，吸取上層無(wú)細(xì)胞血清，分裝至無(wú)酶EP管中，放置在-80℃下備用。按試劑盒（購(gòu)自美國(guó)SBI公司）說(shuō)明書操作步驟提取外泌體miR-92a。使用納米粒徑分析鑒定miR-92a大小，實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)血清中miR-92a mRNA（引物均購(gòu)自美國(guó)Qiagen公司），采用2-ΔΔCt表示miR-92a相對(duì)表達(dá)量，重復(fù)3次。采用免疫組化法檢測(cè)c-MYC蛋白。

1.4 療效評(píng)價(jià)

根據(jù)臨床醫(yī)師及《惡性淋巴瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》[8]對(duì)其療效進(jìn)行評(píng)估，分為完全緩解（CR），病灶徹底消失，且持續(xù)時(shí)間至少1個(gè)月;部分緩解（PR），腫瘤最大直徑×最大垂直直徑減少超過(guò)50%，其余病變并無(wú)明顯擴(kuò)大，且持續(xù)1個(gè)月以上;疾病穩(wěn)定（SD），腫瘤最大直徑×最大垂直直徑減少或提高在50%及以下，且持續(xù)1個(gè)月時(shí)間;疾病進(jìn)展（PD），腫瘤最大直徑×最大垂直直徑擴(kuò)大25%及以上，或發(fā)現(xiàn)新病灶?？傆行?[（CR+PR）/總例數(shù)]×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS24.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。以各組患者近期療效的狀態(tài)作為治療后療效分類指標(biāo)，以血清外泌體miR-92a表達(dá)水平作為療效評(píng)估敏感度指標(biāo)進(jìn)行ROC曲線繪制。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 兩組患者近期療效評(píng)價(jià)

與對(duì)照組相比，研究組患者總有效率明顯升高，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.2 血清外泌體miR-92a與c-MYC相關(guān)性分析

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-92a與c-MYC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.451，P<0.001）。

2.3 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者化療后血清外泌體miR-92a水平變化

與化療前相比，對(duì)照組和研究組均能明顯降低患者血清外泌體miR-92a的表達(dá)水平，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與對(duì)照組相比，研究組患者降低血清外泌體miR-92a的程度更為明顯，組間比較差異具有顯著性（P<0.05）。見表3。

2.4 血清外泌體miR-92a治療效果評(píng)估

以化療療效為狀態(tài)變量，血清外泌體miR-92a水平為測(cè)試變量繪制ROC曲線，結(jié)果顯示AUC為0.856（95%CI：0.726～0.948）（P<0.05），表明血清外泌體miR-92a區(qū)分緩解與非緩解患者的效能較強(qiáng)。見封三圖8。

3 討論

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤是成人常見的非霍奇金淋巴瘤亞型，具有高度異質(zhì)性和侵襲性，臨床治療通常以聯(lián)合化療方案為主[9，10]，但仍有約35%患者會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，雖然目前有中西藥的聯(lián)合化療，如聯(lián)合康艾注射液輔助治療，康艾注射液主要由人參、黃芪等中藥材組成，具有增加機(jī)體免疫力及抑制實(shí)體瘤生長(zhǎng)等作用，增強(qiáng)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能，與化療聯(lián)合作用，可以降低毒副反應(yīng)，提高治療效果[11-12];雖然近期療效對(duì)提高患者機(jī)體免疫能力有益，但遠(yuǎn)期效果仍不容樂(lè)觀。彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤具有極大的病程異質(zhì)性，生存期短則1年，多則數(shù)十年，加強(qiáng)對(duì)疾病病程的監(jiān)測(cè)，對(duì)于判斷患者的療效狀態(tài)、改進(jìn)治療方案、延長(zhǎng)患者生命而言是至關(guān)重要的[13-14]。目前，對(duì)于此疾病臨床療效的判斷，多見于影像學(xué)檢查，費(fèi)用較高且不良影響較大[15]。近年來(lái)，外泌體等液體活檢成為臨床研究的熱門[16-17]，而對(duì)于血清外泌體miR-92a用于腫瘤診斷及療效檢測(cè)的臨床作用研究較少，近些年的研究證實(shí)miR-92a在多種腫瘤細(xì)胞株中表達(dá)異常，推測(cè)檢測(cè)miR-92a的表達(dá)量可能與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展有密切聯(lián)系，但目前對(duì)miR-92a的研究靶點(diǎn)、靶基因作用機(jī)制、其表達(dá)量在不同腫瘤發(fā)展階段的關(guān)聯(lián)等機(jī)制尚未闡明，本研究主要對(duì)血清外泌體miR-92a在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤康艾注射液聯(lián)合化療治療監(jiān)測(cè)中的臨床意義進(jìn)行探討。

本研究顯示：血清外泌體miR-92a在癌癥患者的體內(nèi)水平表達(dá)升高，而治療后水平有降低的趨勢(shì)[18]，推斷血清外泌體miR-92a可能是潛在的彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤診斷標(biāo)志物。然后，本研究分析顯示miR-92a和c-MYC存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，有研究報(bào)道，miR-92a的基因族簇與c-MYC相近，而c-MYC則與EF2家族二者具有一個(gè)負(fù)反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)，在正常生理狀態(tài)時(shí)各因子的含量保持平衡狀況，在病理狀態(tài)時(shí)，平衡狀態(tài)被破壞，所以當(dāng)機(jī)體產(chǎn)生彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤時(shí)，miR-92a水平上調(diào)，參與疾病的發(fā)展[19-20]。本研究對(duì)化療前、化療后的miR-92a水平變化進(jìn)行檢測(cè)，以評(píng)估其治療效果，對(duì)于完全緩解組和部分緩解組，其化療后的miR-92a水平已明顯恢復(fù)，提示血清外泌體miR-92a水平可在一定水平反映化療效果，相較于傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查而言，該監(jiān)測(cè)手段簡(jiǎn)便快捷且相對(duì)價(jià)廉，并可避免相關(guān)的放射損傷。

綜上所述，血清外泌體miR-92a水平變化在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床檢測(cè)中具有一定意義，其水平變化與治療效果相關(guān)。治療效果較好患者中血清外泌體miR-92a水平逐漸降低至正常水平，而治療效果較差患者血清外泌體miR-92a水平變化不明顯，可作為治療效果評(píng)估的檢查標(biāo)志物。但本研究所納入的研究樣本量較少，且隨訪時(shí)間短，應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量并延長(zhǎng)隨訪時(shí)間加以驗(yàn)證。

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（收稿日期：2019-06-21）