周佳敏，胡 游，方朋超，蔣 博，袁志翔

0 引言

胃腸道生物黏附制劑(Gastrointestinal bioadhesion drug delivery System，GBDDS)是指利用聚合物與胃、腸黏膜黏液層/上層細(xì)胞表面之間的生物黏附，延長藥物制劑在胃腸道停留時間或特定部位作用時間的給藥系統(tǒng)[1]。戊己丸出自《太平惠民和劑周方》，為《中國藥典》收載方。由黃連、吳茱萸和炒白芍按6∶1∶6比例組成，具有辛開苦降、清肝和胃、降逆止嘔止瀉之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,其具有促進胃潰瘍愈合、鎮(zhèn)痛及抗腹瀉的藥效作用[2]。本研究首次將GBDDS和戊己丸中的有效成分相結(jié)合，選擇羥丙基甲基纖維素(HPMC)和卡波姆為生物黏附劑，根據(jù)前期研究基礎(chǔ)，制備了戊己丸胃黏附片，以期增加中藥有效成分在胃腸道吸收部位的滯留時間，增強局部治療效果，在減少給藥次數(shù)的同時，提高對消化性潰瘍的治療效果。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜(美國Agilent公司)； BS210S電子天平(德國Sartorius公司)；FW135中草藥粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)；ZRS-8C智能溶出試驗儀(天津大學(xué)無線電廠)；TDP型單沖壓片機(上海天和制藥機械廠)。

鹽酸小檗堿對照品(110713-201613，含量以86.8%計)、吳茱萸堿對照品(110802-201409，含量以99.4%計)以及芍藥苷對照品(110736-201741，含量以95.7%計)均購自中國藥品生物制品檢定所；戊己丸普通片(自制片，含有淀粉和糊精等輔料，批號：20170726，李時珍醫(yī)藥集團有限公司)、精制黃連提取物(批號：20170301，鹽酸小檗堿含量22.56%)、精制吳茱萸提取物(批號：20170301，吳茱萸堿含量1.65%)以及精制白芍提取物(批號20170301，芍藥苷含量7.53%)均為實驗室自制；羥丙基甲基纖維素(HPMC)(GB 1886.109-2015，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；卡波姆(GB/T 10533-2014，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；堿式碳酸鎂(GB 25587-2010，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；硬脂酸鎂(GB1886.91-2016，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 戊己丸胃釋藥黏附片的制備 根據(jù)前期的研究結(jié)果并加以改進[3]，分別按6∶1∶6的比例分別取精制黃連、吳茱萸、白芍提取物研磨混合均勻，取混合粉末15.0 g，以及過80目篩的HPMC(K15M)4.40 g、HPMC(E50)3.65 g、卡波姆934P 0.78 g、堿式碳酸鎂1.05 g，采用等量遞加法混勻，均勻噴灑95%乙醇制成軟材，過16目篩制粒，50 ℃干燥1 h后，整粒，然后加入硬脂酸鎂0.12 g混勻，壓制成100片，片重約為0.25 g/片。

2.2 黏附力大小的測定 黏附力的測定采用自制的測定裝置[3-4]：取新鮮豬胃黏膜組織，自來水沖洗除去胃腸內(nèi)容物，浸泡于無酶人工胃液溶液冷藏室放置2 h后備用。將黏附片用膠水固定于實驗裝置B表面，再取出黏膜，用濾紙吸干背面的水分，剪成1.0 cm×1.0 cm，固定于實驗裝置A 表面。取裝置B用無酶人工胃液浸潤藥片表面后與裝置A接觸，在裝置A上施加100 g壓力，維持一段時間后，解除壓力，在裝置B掛鉤上系一塑料袋，以15 ml/min的速度向塑料袋中加水，直至裝置A、B表面分開，立即停止加水。稱取塑料袋中水的重量，即為黏附片體外胃黏附力大小。結(jié)果如表1所示，戊己丸胃黏附片的胃黏附力為(71.98±2.89) g/cm2，而戊己丸普通片的胃黏附力為(15.11±3.47 )g/cm2，表明制成胃黏附片后其胃黏附力明顯增大。

2.3 黏附時間的測定 根據(jù)參考文獻(xiàn)的方法，選用《中國藥典》2015版四部通則溶出度與釋放度測定法中第二法(漿法)的裝置進行測定[5]。將處理好的豬胃黏膜，剪成1.0 cm×1.0 cm的小塊，用膠水固定在載玻片一側(cè)，用無酶人工胃液浸潤藥片表面后置于黏膜上，加外力維持1 min后解除。用防水膠布將載玻片固定在大杯中，載玻片上沿離杯口約2 cm，調(diào)節(jié)攪拌槳的高度，使槳葉的上沿與載玻片的下沿平齊。向杯中倒入一定溫度人工胃液600 ml，記時(t0)，并啟動攪拌槳(50 r/min)至黏附片完全從黏膜表面脫落，即為終止時間t。前后時間差即為黏附時間。結(jié)果如表1所示，戊己丸胃黏附片的胃黏附時間為(301.1±8.63) min，而戊己丸普通片的胃黏附時間為(0.47±0.16) min，表明制成胃黏附片后其胃黏附時間明顯延長。

表1 戊已丸胃黏附片、普通片的黏附力及黏附時間比較

2.4 含量測定及體外釋放

2.4.1 色譜條件 采用Hypersil ODS色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm，Thermo Scientific)，流動相為乙腈(A)-0.05 mol/L磷酸二氫鉀(B)為流動相，進行梯度洗脫(表2)，流速為1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測波長為225 nm，進樣體積10 μl[6]。芍藥苷的tR為11.2 min，鹽酸小檗堿的tR為21.3 min(圖1)。

表2 梯度洗脫設(shè)置

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及線性范圍 精密稱取芍藥苷對照品和鹽酸小檗堿對照品適量，用色譜甲醇配置成0.514 6 mg/ml以及0.497 5 mg/ml的溶液，得對照品儲備液。精密量取儲備液適量，分別置于同一10 ml量瓶中混合，用溶劑色譜乙腈稀釋至刻度，搖勻，得到不同濃度的混標(biāo)工作液，按上述色譜條件進樣測定。將峰面積(A)與樣品濃度(C)進行線性回歸。結(jié)果表明，芍藥苷在0.102 9～5.146 μg/ml范圍內(nèi)，峰面積(A)與藥物濃度(C)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=37.68 C+2.864 (R2=0.999 8)；鹽酸小檗堿在0.198 8～4.975 μg/ml范圍內(nèi)，峰面積(A)與藥物濃度(C)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=15.94 C+1.473 (R2=0.999 7)。

圖1 對照品 (A)和樣品(B)色譜圖

2.4.3 回收率及精密度 按處方比例稱取空白輔料適量，置于100 ml量瓶中，精密量取已知含量的芍藥苷對照品和鹽酸小檗堿對照品溶液9份，加乙腈-磷酸二氫鉀(1∶2)溶解后，定容，0.45 μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，分別得到高、中、低3種濃度的混標(biāo)對照品溶液，經(jīng)過測定，芍藥苷平均回收率分別為99.5%±1.84%、103.2%±1.23%、102.7%±2.00%，日內(nèi)精密度為1.78%，日間精密度為1.96%；鹽酸小檗堿平均回收率分別為104.5%±2.65%、99.7%±1.56%、98.7%±1.95%，日內(nèi)精密度為1.54%，日間精密度為1.86%，均符合要求。

2.4.4 樣品含量測定 按“2.1”項下方法制備3批戊己丸胃黏附片，各取10片，研細(xì)后精密稱取0.25 g置于100 ml容量瓶中，加乙腈-磷酸二氫鉀(1∶2)流動相溶解后，定容，0.45 μm的微孔濾膜過濾，得續(xù)濾液。采用“2.4.1”項下方法進行含量測定，結(jié)果見表3，每片戊己丸胃黏附片約含有芍藥苷5.0 mg，鹽酸小檗堿15.5 mg。

表3 戊己丸胃黏附片中芍藥苷、鹽酸小檗堿含量測定(mg/g)

2.4.5 體外釋藥研究 按照《中國藥典》2015版四部通則0931溶出度與釋放度測定法中第二法(漿法)，選用釋放介質(zhì)為含有0.8%的吐溫80的人工胃液900 ml，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度設(shè)定為(37±0.5)℃。分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12 h取樣2 ml 并補足等量同溫的溶出介質(zhì)，過0.45 nm微孔濾膜得到濾液，按“2.4.1”項下方法測定樣品中芍藥苷和鹽酸小檗堿的含量，三批制劑平行試驗，計算平均值，繪制累積溶出度曲線。結(jié)果如圖2所示，自制的戊己丸普通片不具備緩釋效果，在2 h內(nèi)基本完全釋放完畢，而戊己丸胃黏附片緩釋作用明顯，12 h實現(xiàn)完全釋放，基本符合研究預(yù)期。

圖2 戊已丸胃黏附片及普通片累積溶出度曲線比較(n=3)

2.4.6 釋放模型擬合 為了進一步探討戊己丸胃黏附片的釋藥機制，將釋放度曲線進行零級方程、一級方程、Higuchi方程、Ritger-Peppas方程等常用的釋放模型擬合，結(jié)果見表4?？梢?，用Ritger-Peppas方程能較好地對釋放度曲線進行擬合。

表4 戊己丸胃黏附片釋放度曲線擬合結(jié)果(n=3)

3 討論

關(guān)于戊己丸胃黏附片的體外釋放擬合中，用Ritger-Peppas方程能較好地對釋放度曲線進行擬合，其方程F=K×Tn。其中，K、n為常數(shù)。K為釋放速率常數(shù)，隨藥物、制劑處方和釋放條件變化而變化；n為釋放特征參數(shù)，與片劑形狀有關(guān)。對于圓柱型制劑而言，當(dāng)n≤0.45時，藥物釋放以Fick擴散為主；當(dāng)0.45

在前期研究中，筆者通過現(xiàn)代制劑技術(shù)，已經(jīng)成功構(gòu)建了包括左金丸、元胡止痛片等在內(nèi)的經(jīng)典名方中有效成分(或者有效部位群)胃內(nèi)釋藥系統(tǒng)，系統(tǒng)研究了這些中藥復(fù)方有效成分的不同胃內(nèi)釋藥制劑(如漂浮型、生物黏附型、漂浮與生物黏附協(xié)同型等)的制劑工藝技術(shù)、輔料應(yīng)用技術(shù)和質(zhì)量評價方法[3,7-9]。經(jīng)方“戊己丸”主治脾濕泄利，飲食不化、臍腹刺痛及小兒搶積下痢等證，但由于受劑型的局限和藥物本身性質(zhì)的影響，有效成分隨著胃的排空很快進入小腸，不能在胃潰瘍表面形成有效的藥物濃度，或達(dá)不到有效治療時間。本研究中，我們以戊己丸為研究目標(biāo)，在精提各中藥有效成分的基礎(chǔ)上，制備成胃黏附片，使藥物直達(dá)病灶并緩慢釋放，充分發(fā)揮了有效成分的作用時間與作用強度，為中藥創(chuàng)新藥物和新型給藥系統(tǒng)的研究提供新技術(shù)。