黃芪黃精配伍對多糖成分含量變化的影響

孫艷平，王榮，王娜娜，冶文靜

（西安醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710021）

黃芪是豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var.Mongholicus (Bge.) Hsiao]或膜莢黃芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.]的干燥根。研究發(fā)現(xiàn)[1-2]，其具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用。黃芪中主要活性成分為皂苷類、黃酮類和多糖類等，對缺血心肌細(xì)胞、心肌缺血-再灌注損傷及病毒感染致心肌損傷等有保護(hù)作用，能夠促進(jìn)合成胰島素信號蛋白、發(fā)揮抗糖尿病的作用，對于強(qiáng)化心臟收縮、緩解粥樣硬化、調(diào)節(jié)血壓等具有顯著作用[3]。

黃精包括黃精（Polygonatum sibiricum）、滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl）和多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）3種。黃精性平、味甘，歸脾、肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)腎益精、滋陰潤燥的功能，可用于滋補(bǔ)強(qiáng)身、肺虛燥咳及醫(yī)治腎虛精虧之癥；具有調(diào)節(jié)血糖、增強(qiáng)免疫力、抗病毒抗炎、延緩衰老、改善學(xué)習(xí)及記憶力等藥理作用；對于治療冠心病、代謝綜合癥、慢性支氣管炎、缺血性中風(fēng)等疾病具有一定療效[4-6]。

本研究通過實(shí)驗(yàn)測定芪精配伍對黃芪、黃精多糖類成分含量的影響，為闡明黃芪黃精配伍藥理學(xué)作用及物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

黃精購于藥材市場，批號20181106，產(chǎn)地陜西；黃芪購于藥材市場，批號20181106，產(chǎn)地甘肅。實(shí)驗(yàn)用試劑有碳酸鈉（天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠,分析純）、95%乙醇（天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠，分析純）、蒽酮（上?？曝S化學(xué)試劑有限公司，分析純），98%濃硫酸（四川西隴化工有限公司，分析純）和D(+)-無水葡萄糖（上海源葉生物科技有限公司，分析純）。

實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有精密分析電子天平（AX224ZH，OHAUS美國奧豪斯），Thermo超純水機(jī)（Micro Pure ，Thermo Scientific公司），全波長酶標(biāo)儀（Multiskan Go，Thermo Scientific公司）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 黃精、黃芪中多糖的提取

稱取適量干燥至恒重、過20目篩的黃精顆粒，用石油醚于80～90 ℃下回流脫脂后備用。按1∶15g/ml的固液比將脫脂黃精于90 ℃下用水浸提2次，提取時(shí)間為2 h，過濾所得濾液濃縮至一定體積后加入無水乙醇（使含醇量達(dá)80%左右），靜置過夜，過濾后沉淀用80%乙醇多次潤洗，即得黃精粗多糖[7-8]。粗多糖提取濃縮液中蛋白質(zhì)用氯仿-正丁醇（4∶1）多次萃取，直至萃取液澄清，再往水相中加入95%乙醇使含醇量達(dá)80%，靜置過夜后過濾，所得固體依次用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，烘干得精制黃精多糖[9-10]。

稱取適量干燥至恒重、過20目篩的黃芪顆粒，按照以上相同操作，可得黃芪多糖。

將黃芪與黃精按1∶1的比例進(jìn)行配伍，按照以上操作，即可得黃芪黃精配伍多糖。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33 mg，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得無水葡萄糖對照溶液（330 mg/L）。

精密量取對照溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.2 mL，分別置50 mL具塞錐形瓶中，用移液槍各加水稀釋至2.0 mL搖勻，在冰水浴中緩慢滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置于95 ℃水浴中保溫10 min，取出，立即置于冰水浴中冷卻10 min，取出，以0.2%蒽酮-硫酸為空白，在96孔板點(diǎn)樣200 μL，置于酶標(biāo)儀中，在582 nm波長處測定吸光度。

1.2.3 供試品的測定

稱取自制的黃精、黃芪及配伍樣品，溶解后取0.2 mL按“1.2.2”步驟測得吸光度并計(jì)算多糖含量。

1.2.4 方法學(xué)考察

（1）儀器精密度考察：取0.6 mL葡萄糖對照溶液連續(xù)測定6次，計(jì)算RSD值。

（2）方法穩(wěn)定性考察：分別吸取黃芪、黃精、芪精配伍0.1 mL供試品，按“1.2.2”步驟操作，分別于0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h和2.5 h測定吸光度。

（3）方法重復(fù)性考察：取黃精多糖、黃芪多糖及芪精配伍多糖各5份，按“1.2.2”步驟測得吸光度并計(jì)算多糖含量。

（4）加樣回收率考察：精密吸取3種已知含量的多糖供試品0.1 mL，共6份，分別配制相應(yīng)含量的葡萄糖對照品并加入，按“1.2.2”步驟測得吸光度并計(jì)算多糖回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

如圖1所示，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=0.651 3x-0.001 3，R2=0.993 7。結(jié)果表明葡萄糖在33～198 mg/L之間呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系[11-12]。

圖1 無水葡萄糖對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 多糖含量的測定結(jié)果

黃精、黃芪及配伍樣品的多糖含量測定結(jié)果見表1。根據(jù)結(jié)果分析可知，配伍后的多糖含量高于黃精、黃芪單個(gè)藥材。

表1 各樣品多糖含量測定結(jié)果

2.3 方法學(xué)考察結(jié)果

2.3.1 精密度

標(biāo)準(zhǔn)樣品連續(xù)6次測定結(jié)果如表2所示，吸光度的RSD值小于3%，表明該儀器精密度良好。

表2 對照品溶液多糖測定精密度考察結(jié)果

2.3.2 穩(wěn)定性

穩(wěn)定性考察結(jié)果如表3所示，，吸光度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于5%，表明黃芪、黃精以及芪精配伍中的多糖在2.5 h內(nèi)顯色穩(wěn)定。

2.3.3 重復(fù)性

重復(fù)性考察結(jié)果如表4所示， RSD分別為3.35%、1.58%、2.46%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.4 加樣回收率

精密吸取3種已知含量的多糖供試品0.1 mL，共6份，分別配制相應(yīng)含量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品并加入供試品中，按“1.2.2”項(xiàng)操作測得吸光度，并計(jì)算多糖回收率，結(jié)果如表5～7所示。結(jié)果表明，黃芪多糖、黃精多糖和芪精配伍多糖的加樣回收率RSD皆小于5%。

表3 各供試品多糖穩(wěn)定性考察結(jié)果

表4 各供試品多糖測定重復(fù)性考察結(jié)果

表5 黃精多糖的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

黃芪、黃精作為兩種藥食同源的中草藥，其所含的多糖成分具有多種生物活性。本次試驗(yàn)采用《中國藥典》中的多糖含量測定方法，即蒽酮-濃硫酸法分別測定黃芪、黃精及芪精配伍中的多糖含量。從含量測定方法學(xué)考察結(jié)果表明，本測定方法精密性、穩(wěn)定性、重復(fù)性均良好。通過對各組分中多糖含量測定結(jié)果進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明，芪精配伍后多糖含量有變化，配伍后含量均高于單方黃芪或黃精。

表6 黃芪多糖的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表7 芪精配伍多糖的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果