保護(hù)液結(jié)合暫養(yǎng)工藝對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)效果的影響

張玉晗，謝 晶

（上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海冷鏈裝備性能與節(jié)能評(píng)價(jià)專(zhuān)業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，食品科學(xué)與工程國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心（上海海洋大學(xué)），上海 201306）

花鱸（Lateolabrax maculatus）屬魚(yú)綱（Pisces）、鱸形目（Perciforms）、鮨科（Serranidae）、常鱸亞科（Oligorinae）、花鱸屬（Lateolabrax），因其具有生長(zhǎng)快、抗病強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美特點(diǎn)，成為我國(guó)主要的養(yǎng)殖海水魚(yú)品種之一?；|捕撈后可以通過(guò)低溫誘導(dǎo)休眠的方式進(jìn)行無(wú)水?；?，花鱸生態(tài)冰溫零點(diǎn)溫度（臨界溫度）為4 ℃，經(jīng)低溫?zé)o水?；钸\(yùn)輸后，恢復(fù)常溫的魚(yú)體可回到正常狀態(tài)并存活一段時(shí)間。

VC既是一種具廣泛生理功能的營(yíng)養(yǎng)素，又是一種具免疫作用的免疫調(diào)節(jié)因子，有明顯的抗感染作用，但許多硬骨魚(yú)類(lèi)自身缺少合成VC的酶，必須通過(guò)飼料或食物獲得[1-2]。研究表明，花鱸幼魚(yú)、大黃魚(yú)血清溶菌酶活力隨著VC添加量的增加而升高[2-3]。姜（Zingiber officinale）性味辛、微溫，藥用其根莖，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用[4]。李曉璐等[5]將生姜液運(yùn)用在脆肉鯇的活體運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)中，有效地提高了其24 h運(yùn)輸?shù)拇婊盥省Ｈ芫甘且环N低分子質(zhì)量、不耐熱的堿性蛋白，作為機(jī)體非特異免疫因子之一，其參與了機(jī)體的多種免疫反應(yīng)，在機(jī)體正常防御功能和非特異免疫中具有保持機(jī)體生理平衡的重要作用[6-7]。研究表明溶菌酶的應(yīng)用能極大延長(zhǎng)海產(chǎn)品或水產(chǎn)品的保鮮期，可為貯藏、運(yùn)輸?shù)葞?lái)諸多方便[8]。山梨糖醇分子可提高魚(yú)體表保水性，低溫下蛋白酶變性程度低，起到抗凍效果[9]。本實(shí)驗(yàn)嘗試在花鱸暫養(yǎng)、運(yùn)輸過(guò)程中加入保護(hù)液，然后進(jìn)行模擬無(wú)水活運(yùn)，考察采用保護(hù)液的?；钚鹿に噷?duì)花鱸血液生化指標(biāo)、鰓組織Na+/K+-ATPase活性、血清溶菌酶活性、免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）水平等魚(yú)體非特異性免疫能力指標(biāo)的影響，將保護(hù)液包裝新工藝與傳統(tǒng)濕木屑包裝工藝運(yùn)輸后魚(yú)體情況做對(duì)比，為升級(jí)無(wú)水活運(yùn)包裝工藝提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

花鱸魚(yú)購(gòu)自上海蘆潮港水產(chǎn)品市場(chǎng)。挑選體質(zhì)健康、無(wú)外傷、鱗片完整、大小基本一致（長(zhǎng)40 cm）的活花鱸魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)材料。實(shí)驗(yàn)用水：由經(jīng)顆?；钚蕴窟^(guò)濾后曝氣的自來(lái)水和海鹽配制而成，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前的1 d配制，連續(xù)曝氣24 h后用于實(shí)驗(yàn)。所制得水的性質(zhì)：水溫22～23 ℃、鹽度16‰～17‰、溶解氧4～6 mg/L、pH 7.5～8.5[10]。

溶菌酶、純度98%山梨糖醇（14.7 kDa） 上海生工生物工程有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LX-100VTR模擬運(yùn)輸振動(dòng)臺(tái) 上海魯軒儀器設(shè)備廠；SH-1000Lab-全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 北京宏昌信科技有限公司；5810R高速冷凍離心機(jī) 上海艾測(cè)電子科技有限公司；BS-200全自動(dòng)生化分析儀 深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；乳酸測(cè)定試劑盒、ATP酶試劑盒、溶菌酶測(cè)試盒、IgM測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 花鱸魚(yú)的暫養(yǎng)

采用周期饑餓馴化花鱸[11]，喂食1 d饑餓3 d，兩周期；喂食早晚各一次，投喂魚(yú)體質(zhì)量10%飼料；暫養(yǎng)水中加入VC（25、30 mg/L）[12]，CK組暫養(yǎng)水中不加VC，暫養(yǎng)密度1 尾/50 L；禁食暫養(yǎng)時(shí)間12 h；先暫養(yǎng)后冷馴化，冷水機(jī)按照3 ℃/h降溫速率將暫養(yǎng)箱中水溫從22～23 ℃降至臨界生態(tài)溫度4 ℃；此時(shí)，魚(yú)體呼吸頻率（24±3）次/min，呼吸不規(guī)律，魚(yú)體失去平衡、魚(yú)腹朝上，裂鰓，刺激反應(yīng)遲鈍。

1.3.2 配制保護(hù)液G

保護(hù)液G包括：溶菌酶0.08%～0.10%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）、山梨糖醇0.2%～0.4%、生姜液0.6%～1%，鹽度為16‰～17‰，pH 7.5～8.5，剩余為水。

姜液制備[5]：取栽種4 個(gè)月嫩姜洗凈、瀝干，此時(shí)的姜纖維細(xì)、味道微辣，不含較多姜辣素，姜辣素對(duì)花鱸的刺激?。粠び谜ブ瓩C(jī)榨汁（每千克原料加入約150 mL蒸餾水進(jìn)行混合榨汁），并用200 目紗布過(guò)濾，收集姜汁，隔水加熱至沸騰，裝入帶蓋容器，放至常溫，蓋上蓋子冷卻至4 ℃，備用。

1.3.3 魚(yú)的處理與運(yùn)輸

將暫養(yǎng)箱中觸摸應(yīng)激反應(yīng)十分微弱的魚(yú)撈出，將魚(yú)分為6 個(gè)實(shí)驗(yàn)組和CK組，具體見(jiàn)表1，每組樣品30 條，實(shí)驗(yàn)總數(shù)為210 條。CK組不添加保護(hù)液暫養(yǎng)12 h，降溫休眠后撈出，直接裝入帶有濕木屑（木屑事先放入4 ℃、鹽度16‰～17‰、pH 7.5～8.5的水中浸濕）的泡沫箱中。實(shí)驗(yàn)組放入保護(hù)液G中浸漬2～3 s后，按1 條/箱放于泡沫箱內(nèi)，注意用保護(hù)液涂抹魚(yú)身各部位（包括魚(yú)鰓）。然后將兩組魚(yú)裝入塑料袋內(nèi)（1 箱/袋），充入氧氣（氧濃度監(jiān)測(cè)儀）80%、扎緊袋口[13]，放入振動(dòng)臺(tái)上的大保溫箱內(nèi)，保持4 ℃運(yùn)輸溫度。

表1 暫養(yǎng)結(jié)合不同濃度保護(hù)液實(shí)驗(yàn)組Table 1 Combinations of temporary culture and protective solutions

在振動(dòng)臺(tái)上進(jìn)行模擬運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)，運(yùn)輸過(guò)程：B級(jí)路面1 h（80 km/h）→A級(jí)路面5 h（100 km/h）→B級(jí)路面2 h（80 km/h）[14-15]。模擬運(yùn)輸結(jié)束后，打開(kāi)包裝，取出魚(yú)，放入養(yǎng)殖水中，以5 ℃/h升溫速率將水溫升至22～23 ℃喚醒（由預(yù)實(shí)驗(yàn)確定），觀察喚醒過(guò)程中魚(yú)的反應(yīng)并記錄喚醒結(jié)束后死亡率。

花鱸魚(yú)生理指標(biāo)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)為：運(yùn)輸開(kāi)始0 h（暫養(yǎng)結(jié)束，未涂保護(hù)液）和運(yùn)輸1、2 h和8 h（運(yùn)輸結(jié)束時(shí)）及喚醒后。每個(gè)測(cè)試點(diǎn)隨機(jī)選取5 條魚(yú)進(jìn)行指標(biāo)測(cè)試。

1.3.4 樣品處理

木棒敲擊花鱸致死，稱質(zhì)量并量體長(zhǎng)，采用1 mL一次性醫(yī)用注射器（預(yù)先用1 g/100 mL肝素鈉溶液潤(rùn)洗）尾部靜脈取血，采取血樣在4 ℃冰箱放置2 h后，4 ℃、10 000 r/min離心5 min制備血清，血清移入-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

魚(yú)采血后，取兩側(cè)第二鰓弓的鰓絲，用生理鹽水洗凈吸干水分，用生理鹽水配成10 mg/mL組織均漿，4 ℃、3 000 r/min離心10 min，取上清液-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.5 血液生化指標(biāo)的測(cè)定

總蛋白、白蛋白、尿素、肌酐、尿酸、血糖質(zhì)量濃度采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，單位均為g/L。乳酸濃度采用乳酸測(cè)定試劑盒測(cè)定，單位為nmol/L。

1.3.6 組織指標(biāo)測(cè)定

鰓Na+/K+-ATPase活力采用ATP酶試劑盒定，單位為U/mg。

1.3.7 血液非特異性免疫能力指標(biāo)測(cè)定

血清溶菌酶、IgM質(zhì)量濃度分別采用溶菌酶測(cè)試盒、IgM測(cè)試盒測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

應(yīng)用SPSS 19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以 ±s表示，顯著性分析采用Duncan多重比較法，P＜0.05表示顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血液生化指標(biāo)的影響

2.1.1 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清總蛋白、白蛋白質(zhì)量濃度的影響

表2 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清中總蛋白質(zhì)量濃度的影響Table 2 Effects of different treatments on serum total protein concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

表3 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清中白蛋白質(zhì)量濃度的影響Table 3 Effects of different treatments on serum albumin concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

在生態(tài)冰溫?zé)o水?；钸^(guò)程中，花鱸血清中的總蛋白、白蛋白質(zhì)量濃度能準(zhǔn)確反映機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收與代謝，以及肝功能的代謝情況。白蛋白由肝臟合成，在血液中起著載體的作用，與血液中大部分水分、膽紅素、尿酸、鈣等結(jié)合而進(jìn)行運(yùn)送，與代謝、營(yíng)養(yǎng)關(guān)系密切，當(dāng)長(zhǎng)期處于不良狀態(tài)時(shí)，白蛋白含量會(huì)顯著下降[16]。由表2、3可知，運(yùn)輸0 h，CK組花鱸血清中的總蛋白和白蛋白質(zhì)量濃度顯著低于各保護(hù)液處理組（P＜0.05），這說(shuō)明暫養(yǎng)水中加入VC有助于提高花鱸肝功能，降低魚(yú)類(lèi)的應(yīng)激反應(yīng)，其中30 mg/L添加量效果明顯。喚醒后與?；钸^(guò)程中相比，半數(shù)以上保護(hù)液使用組花鱸血清中的總蛋白和白蛋白質(zhì)量濃度沒(méi)有顯著性差異（P＜0.05），表明包裝運(yùn)輸前對(duì)魚(yú)身涂抹保護(hù)液可維持花鱸魚(yú)體代謝穩(wěn)定。C2G2保護(hù)液使用組花鱸在?；钸\(yùn)輸過(guò)程中血清中的總蛋白和白蛋白質(zhì)量濃度保持穩(wěn)定，且高于其他保護(hù)液處理組。喚醒后，花鱸由于處于無(wú)水、缺氧狀態(tài)，總蛋白和白蛋白質(zhì)量濃度都顯著下降（P＜0.05）。與?；钸\(yùn)輸8 h后相比，魚(yú)體與喚醒后（水中復(fù)蘇后）總蛋白和白蛋白質(zhì)量濃度變化不顯著（P＜0.05），表明運(yùn)輸結(jié)束后，魚(yú)體肝功能不能在短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)正常。

2.1.2 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清尿素、肌酐、尿酸質(zhì)量濃度的影響

表4 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清尿素質(zhì)量濃度的影響Table 4 Effects of different treatments on serum urea concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

表5 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清肌酐質(zhì)量濃度的影響Table 5 Effects of different treatments on serum creatinine concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

表6 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清尿酸質(zhì)量濃度的影響Table 6 Effects of different treatments on serum uric acid concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

尿素、肌酐、尿酸水平是反映腎功能代謝情況的重要指標(biāo)，尿素是氮化合物代謝的產(chǎn)物，也是維持血液滲透壓的主要成分[17]。由表4可看出，CK組血液中尿素水平偏高，使用保護(hù)液之后各使用組的尿素水平顯著下降（P＜0.05）。肌酐水平是腎臟機(jī)能的一個(gè)重要指標(biāo)，腎臟機(jī)能發(fā)生障礙時(shí)，血液中肌酐含量會(huì)升高。由表5可知，除CK、C1G1、C1G2組外，花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中肌酐水平隨運(yùn)輸時(shí)間延長(zhǎng)而下降，喚醒后有所回升，保活過(guò)程中各組肌酐水平有所差異，C2G2保護(hù)液使用組肌酐水平未見(jiàn)明顯上升。腎功能減退時(shí)尿酸質(zhì)量濃度會(huì)升高，表6顯示CK組尿酸水平在?；钸\(yùn)輸過(guò)程中顯著升高（P＜0.05），添加保護(hù)液后尿酸水平上升速率減緩，喚醒后回落，C2G2組尿酸水平變化不明顯，說(shuō)明在?；钸\(yùn)輸中鰓、腎功能部分受到抑制。CK組血清尿素、肌酐、尿酸水平持續(xù)遞增，運(yùn)輸8 h時(shí)出現(xiàn)最高值，表明隨運(yùn)輸時(shí)間延長(zhǎng)代謝廢物在血液中有積累，長(zhǎng)時(shí)間的無(wú)水環(huán)境造成花鱸體內(nèi)代謝廢物無(wú)法及時(shí)排出，這是花鱸不能長(zhǎng)時(shí)間無(wú)水運(yùn)輸?shù)闹匾蛩刂?。使用保護(hù)液后，運(yùn)輸過(guò)程也會(huì)導(dǎo)致3 個(gè)指標(biāo)數(shù)值有所上升，其中8 h較高，喚醒后有所下調(diào)，表明花鱸在低溫?zé)o水條件下保活代謝廢物會(huì)在體內(nèi)累積，并在喚醒后得到改善，但還不能確定魚(yú)體是否因此受到不可逆損傷[18]。使用保護(hù)液可有效降低花鱸鰓、腎功能損傷，綜合比較下C2G3組?；钚Ч詈茫Ｗo(hù)液在花鱸體表形成一層保護(hù)膜的同時(shí)也有利于魚(yú)體將代謝廢物排出，保護(hù)液起到促進(jìn)魚(yú)體與外界物質(zhì)交換作用。

2.1.3 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清中血糖、乳酸水平的影響

表7 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清血糖質(zhì)量濃度的影響Table 7 Effects of different treatments on serum glucose concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

表8 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清乳酸濃度的影響Table 8 Effects of different treatments on the concentration of lactate in serum during the waterless transport of Lateolabrax maculatus

血糖是魚(yú)體生理活動(dòng)所需能量的來(lái)源之一。從表7中可看出，CK組血糖質(zhì)量濃度在整個(gè)?；钸\(yùn)輸0～2 h上升可能是因?yàn)閼?yīng)激反應(yīng)；除C2G1、C2G3組外，各處理組運(yùn)輸8 h后喚醒過(guò)程中血糖質(zhì)量濃度下降可能是能量消耗造成的，徐中平[19]發(fā)現(xiàn)低溫處理后的星斑川鰈血糖濃度顯著升高。運(yùn)輸0 h時(shí)，CK組與各保護(hù)液使用組相比血糖質(zhì)量濃度差異不顯著（P＞0.05），這表明暫養(yǎng)過(guò)程中添加VC對(duì)花鱸血糖水平影響不大。使用保護(hù)液后，運(yùn)輸1 h與0 h相比，血糖水平降低，運(yùn)輸時(shí)間延長(zhǎng)血糖水平還是會(huì)出現(xiàn)因積累顯示較高水平，使用保護(hù)液已經(jīng)很大程度降低了花鱸運(yùn)輸應(yīng)激。

乳酸是葡萄糖在無(wú)氧條件下發(fā)生酵解提供能量時(shí)的產(chǎn)物，肌肉產(chǎn)生的乳酸大部分會(huì)進(jìn)入血液，而乳酸濃度增加會(huì)對(duì)血液中血紅蛋白運(yùn)輸氧的能力產(chǎn)生影響，導(dǎo)致血液最大氧結(jié)合量減少。從表8可以看出，各處理組血清中乳酸濃度在運(yùn)輸2 h內(nèi)顯著上升（P＜0.05），血液中血糖濃度上升進(jìn)而造成了肌肉乳酸濃度上升，導(dǎo)致魚(yú)體供氧量減少。此結(jié)果與戴志遠(yuǎn)等[20]研究的紫貽貝無(wú)水?；钸^(guò)程中乳酸濃度變化一致，這可能也是限制?；顣r(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)的重要因素之一。與CK組相比，各?；钜禾幚斫M在運(yùn)輸8 h時(shí)乳酸積聚量減少。運(yùn)輸0 h，CK組與各保護(hù)液使用組相比乳酸濃度差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明暫養(yǎng)過(guò)程中VC添加量對(duì)花鱸血清中乳酸濃度的影響也不明顯。

2.2 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中鰓組織指標(biāo)的影響

表9 不同處理組對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中鰓組織Na＋ /K＋-ATPase活力的影響Table 9 Effects of different treatments on gill NKA activity during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

Na+/K+-ATPase的主要生物學(xué)意義在于其為逆濃度差和電位差轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)，即一旦膜上的離子通道開(kāi)放，Na+、K+會(huì)迅速順濃度差跨膜擴(kuò)散[21-22]。由表9可知，運(yùn)輸0 h，暫養(yǎng)水中加入VC顯著提高了鰓組織細(xì)胞中的Na+/K+-ATPase活力（P＜0.05），且隨VC添加量增加而增加，可能是因?yàn)閂C提高了花鱸的抗氧化酶活性，減少了花鱸低溫條件下的氧化應(yīng)激。孔祥會(huì)等[23]低溫馴化鋸緣青蟹并研究發(fā)現(xiàn)其抗氧化防護(hù)與ATPase活性有關(guān)系。運(yùn)輸過(guò)程中，使用保護(hù)液維持了魚(yú)鰓絲細(xì)胞內(nèi)Na+/K+-ATPase的活性[24]，完成正常的離子轉(zhuǎn)運(yùn)。C2G2組鰓Na+/K+-ATPase活力最強(qiáng)，因而可以更好地維持細(xì)胞內(nèi)外離子水平的穩(wěn)定性，使鰓細(xì)胞得以保持正常生理功能。

2.3 保活過(guò)程中花鱸非特異性免疫指標(biāo)的分析

2.3.1 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清中溶菌酶水平的影響

溶菌酶是生物體內(nèi)非特異性免疫防御體系中具有廣譜抗菌作用的堿性酶，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用[25]。溶菌酶廣泛分布于魚(yú)體的黏液、血清和某些淋巴組織中，是魚(yú)類(lèi)非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分[26]。生態(tài)冰溫?zé)o水活運(yùn)過(guò)程中花鱸持續(xù)處于低溫環(huán)境下。不同學(xué)者在對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行低溫馴化研究中認(rèn)為在低溫環(huán)境下非特異性免疫占有主導(dǎo)地位[27-29]。由表10可知，CK組血清中溶菌酶質(zhì)量濃度明顯較低，說(shuō)明在暫養(yǎng)水中添加VC可以明顯提高花鱸血清中溶菌酶活力，但降溫處理還是造成了所有處理組過(guò)低的溶菌酶活力，保護(hù)液使用組血清溶菌酶質(zhì)量濃度隨運(yùn)輸時(shí)間的延長(zhǎng)不再下降，反而明顯升高。一方面可能是因?yàn)楸Ｗo(hù)液中加入了溶菌酶，一定程度上補(bǔ)足了環(huán)境因素造成的溶菌酶消耗；另一方面可能是因?yàn)楸Ｗo(hù)液中添加了生姜液，生姜可激活單核細(xì)胞的分泌功能，使溶菌酶大量釋放，促使溶菌酶質(zhì)量濃度增高。研究表明生姜液可使小鼠血清溶菌酶活性顯著增高，但不同劑量引起溶菌酶活性變化的程度有所不同[30]。運(yùn)輸8 h時(shí)C2G2組溶菌酶活力最高，為CK組7.68 倍，運(yùn)輸8 h喚醒后，花鱸血清中溶菌酶質(zhì)量濃度維持較高水平，這可能是由于水溫的升高提升了溶菌酶活力。

表10 不同處理組對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清溶菌酶質(zhì)量濃度的影響Table 10 Effects of different treatments on serum lysozyme concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

2.3.2 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清中IgM水平的影響

表11 不同處理組對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)過(guò)程中血清IgM質(zhì)量濃度的影響Table 11 Effects of different treatments on serum IgM concentration during waterless transportation of Lateolabrax maculatus

IgM是硬骨魚(yú)體內(nèi)一種重要免疫球蛋白，因此IgM質(zhì)量濃度通常被認(rèn)定為是評(píng)價(jià)魚(yú)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要指標(biāo)[31]。由表11可見(jiàn)，溫度對(duì)魚(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)的影響非常復(fù)雜，有學(xué)者認(rèn)為低溫可以減慢代謝循環(huán)因而抑制或延遲抗體的釋放[29]?；|低溫?zé)o水活運(yùn)過(guò)程全程處于低溫環(huán)境，可能導(dǎo)致了IgM質(zhì)量濃度降低。侯亞義等[32]報(bào)道了虹鱒血漿中IgM的濃度是溫度依賴型的，即高溫時(shí)它們的濃度升高，反之濃度降低。運(yùn)輸0 h（暫養(yǎng)結(jié)束未涂抹保護(hù)液），IgM質(zhì)量濃度隨暫養(yǎng)水中VC添加量的升高而降低，VC可增強(qiáng)魚(yú)體免疫應(yīng)答耐受性。使用保護(hù)液一定程度上可增強(qiáng)花鱸細(xì)胞免疫功能和機(jī)體抗感染能力。

2.4 經(jīng)不同處理的花鱸無(wú)水活運(yùn)結(jié)束后的死亡率

將生態(tài)冰溫?zé)o水活運(yùn)后的花鱸放入4 ℃水中以5 ℃/h速率升溫至22～23 ℃喚醒，可以觀察到魚(yú)尾擺動(dòng)幅度越來(lái)越大，魚(yú)鰓開(kāi)始不規(guī)律地開(kāi)閉，呼吸頻率越來(lái)越大，逐漸接近正常水平，魚(yú)體恢復(fù)正常的游動(dòng)。

表12 不同處理對(duì)花鱸無(wú)水活運(yùn)結(jié)束后死亡率的影響Table 12 Effect of different treatments on mortality after waterless transportation of Lateolabrax maculatus

如表12所示，花鱸常溫水中喚醒后8 h各組均出現(xiàn)死魚(yú)現(xiàn)象，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，花鱸死亡率不斷升高。這是因?yàn)榛|經(jīng)過(guò)降溫、包裝、運(yùn)輸、喚醒過(guò)程中的應(yīng)激，體內(nèi)能量不足，免疫系統(tǒng)紊亂。暫養(yǎng)水中加入VC可以增強(qiáng)花鱸免疫機(jī)能，又具有抗感染作用。保護(hù)液中的生姜、溶菌酶、山梨糖醇具有保持機(jī)體生理平衡、抗應(yīng)激、抗凍的作用。研究加入保護(hù)液后花鱸死亡率呈下降趨勢(shì)，且劑量越高效果越明顯。喚醒結(jié)束后1 d死亡率數(shù)據(jù)表明，運(yùn)輸期間使用保護(hù)液能延長(zhǎng)花鱸運(yùn)輸后存活時(shí)間，為商業(yè)銷(xiāo)售提供時(shí)間保障。

3 結(jié) 論

花鱸通過(guò)低溫誘導(dǎo)休眠的方式進(jìn)行無(wú)水?；?，禁食暫養(yǎng)12 h后冷馴化至臨界冰溫4 ℃，包裝后振動(dòng)臺(tái)模擬無(wú)水?；顣r(shí)間可達(dá)到8 h，以5 ℃/h速率升水溫至22～23 ℃喚醒后魚(yú)體可回到正常狀態(tài)并存活一段時(shí)間?，F(xiàn)有的包裝運(yùn)輸技術(shù)花鱸喚醒1 d之內(nèi)的死亡率高，并沒(méi)有為保活運(yùn)輸后的銷(xiāo)售爭(zhēng)取時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)研究以保護(hù)液包裝取代現(xiàn)的濕木屑包裝，可節(jié)省更多運(yùn)輸空間，提高花鱸無(wú)水活運(yùn)效果，花鱸無(wú)水活運(yùn)后死亡率降低了1%～5%，延長(zhǎng)了銷(xiāo)售期，可獲得更高的經(jīng)濟(jì)效益。

研究結(jié)果表明，無(wú)水?；罨|魚(yú)暫養(yǎng)水中加入30 mg/L VC，暫養(yǎng)12 h，冷馴化后包裝前浸入G2（溶菌酶0.09%+山梨糖醇0.3%+生姜液0.08%）保護(hù)液中涂抹，取出后獨(dú)立包裝進(jìn)行無(wú)水活運(yùn)效果最好。保護(hù)液中的生姜可使花鱸血清溶菌酶質(zhì)量濃度顯著增高，保護(hù)液中不同生姜?jiǎng)┝靠梢鹑芫富钚宰兓某潭炔煌?。暫養(yǎng)和運(yùn)輸過(guò)程中加入保護(hù)液可增強(qiáng)花鱸肝、腎功能及能量代謝，維持鰓組織正常離子運(yùn)轉(zhuǎn)，一定程度上可增強(qiáng)花鱸細(xì)胞免疫功能和機(jī)體抗感染能力。