于浩 姜愛莉 李敏 付步芳 王召旭

[摘要]透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）是人體組織成分之一，廣泛存在于人體皮膚、軟骨組織、韌帶以及眼睛玻璃體中，具有良好的生物相容性、親水性、粘彈性及低免疫原性。生物工程生產(chǎn)的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠具有相似的生物學(xué)特性，是目前最常用的注射微整手術(shù)填充材料之一。該文首先回顧了注射整形行業(yè)的發(fā)展歷史，同時分析了交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠在整形行業(yè)的應(yīng)用，包括面部除皺、隆鼻頦、瘢痕修復(fù)等部分，重點闡述了整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠質(zhì)量控制的方法，包括交聯(lián)劑殘留量、透明質(zhì)酸鈉含量、溶脹度、蛋白質(zhì)含量、重金屬含量以及分子量等。結(jié)合國內(nèi)外交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的研究動態(tài)，提出了今后的發(fā)展前景。

[關(guān)鍵詞]透明質(zhì)酸;交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠;注射整形;質(zhì)量控制

[中圖分類號]R622? ? [文獻標志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2020）12-0185-05

Research Progress of Quality Control Methods in the Standard of Cross-linked Sodium Hyaluronate Gel for Plastic Surgery

YU Hao1，2，JIANG Ai-li1，LI Min1，2，F(xiàn)U Bu-fang2，WANG Zhao-xu2

（1.Yantai University， Yantai 264000，Shandong，China;2.National Institutes for Food and Drug Control， Beijing 102629，China）

Abstract：Hyaluronic acid （HA） is one of the components of human tissues. It is widely present in human skin， cartilage tissues， ligaments， and vitreous eyes.It has good biocompatibility，hydrophilicity， viscoelasticity，and low immunogenicity.The cross-linked sodium hyaluronate gel produced by bioengineering has similar biological characteristics and is currently one of the most commonly used filling materials for injection microsurgery.This article first reviews the development history of the injection plastic surgery industry，and analyzes the application of cross-linked sodium hyaluronate gel in the plastic surgery industry， including facial wrinkle removal， rhinoplasty， scar repair and other parts， focusing on the use of plastic surgery The method of quality control of sodium hyaluronate gel includes the residual amount of crosslinking agent， sodium hyaluronate content， swelling degree， protein content， heavy metal content and molecular weight. Combining the research development of cross-linked sodium hyaluronate gel at home and abroad， the future development prospects are proposed.

Key words：hyaluronic acid;cross-linked sodium hyaluronate gel; injection shaping; quality control

透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）是由雙糖單位重復(fù)排列而成的線性高分子直鏈多糖聚合物，是細胞外基質(zhì)的重要成分，其分子量可達107Da[1]。由于其高度粘彈性、保濕性以及生物相容性等優(yōu)勢廣泛應(yīng)用于眼科顯微手術(shù)、關(guān)節(jié)炎治療、藥物釋放及組織工程等生物材料領(lǐng)域[2]。為賦予HA更強的流變學(xué)性能及其抗酶解能力對其進行改性，HA分子中功能羥基、羧基、N-乙酰氨基以及還原末端是可被化學(xué)修飾的四個部位。其中，在已報道文獻中最常見的是對羥基和羧基的交聯(lián)[3]，常見的交聯(lián)方式包括席夫堿反應(yīng)、硫醇修飾HA以及酶催化交聯(lián)HA等[4]。如今，注射整形行業(yè)快速發(fā)展，利用生物材料來修復(fù)老化皮膚是皮膚科和整形外科的常用方法，首選材料即是HA的化學(xué)交聯(lián)衍生物。較低濃度的交聯(lián)透明質(zhì)酸即可吸水膨脹，在壓力的作用下，交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠流動性以及注射器內(nèi)推擠力都符合注射填充材料的要求[5]。

自美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）于2003年12月批準HA用于面部除皺以來，HA已逐步成為最常用的皮膚填充材料[6-7]。美國整形外科學(xué)會（American Society of Plastic Surgeons，ASPS）匯總得出，2018年在美國進行軟組織填充劑注射美容者高達267萬，其中以HA作為軟組織填充劑占比79%以上[8]。面部填充劑主要作用在皮膚靜態(tài)皺紋、面部軟組織缺陷及其組織輪廓改善。交聯(lián)透明質(zhì)酸由三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)支撐，以提供防止透明質(zhì)酸酶分解的化學(xué)屏蔽或活性氧，因此，比未交聯(lián)的HA在體內(nèi)存留時間長，臨床效果可維持18個月左右，且不良反應(yīng)發(fā)生率較低[9]。除此之外，在組織工程技術(shù)修復(fù)不規(guī)則組織器官缺損的解決方案中，可注射交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的優(yōu)勢是可配合微創(chuàng)手術(shù)、創(chuàng)傷面積小、凝膠可流動性強以及可填滿整個缺損部位等[10]。通過交聯(lián)反應(yīng)拓寬了HA的應(yīng)用范圍，同時也使得新型交聯(lián)產(chǎn)品的應(yīng)用價值大幅度提升。

1? 注射整形發(fā)展歷史

最早的填充注射微整出現(xiàn)在1893年，面部填充材料選擇自體脂肪。優(yōu)勢是具有較好的生物相容性、穩(wěn)定性以及多功能性;劣勢是脂肪的分離純化以及融入宿主組織等技術(shù)完全依靠醫(yī)生的手法，因此難以得到推廣[11]。

20世紀初，注射微整行業(yè)取得了首次突破性進展，報道出現(xiàn)在維也納，采用人工合成材料-液體石蠟作為填充注射劑，優(yōu)勢是來源廣泛，原材料易得;劣勢是生物相容性差，患者開始出現(xiàn)嚴重的異物和肉芽腫反應(yīng)，致使公眾對注射整形業(yè)的強烈不滿[12]。20世紀60年代，面部注射硅油以及合成聚四氟乙烯糊狀注射劑又相繼出現(xiàn)，在美國、德國以及日本廣為流行，但同樣因為材料的生物相容性差，造成嚴重的延遲并發(fā)癥被FDA否定[13]。

1981年，F(xiàn)DA批準用于化妝品的第一個注射用填充劑—牛膠原蛋白，成為注射微整的新選擇，優(yōu)勢是可注射性好，淡化細紋的能力高，劣勢是蛋白含量較高，機體易產(chǎn)生抗原反應(yīng)，出現(xiàn)過敏癥狀[14]。直到21世紀早期，HA憑借具有獨特的理化性質(zhì)、生理功能以及良好的生物相容性，逐步在整形美容行業(yè)得到廣泛應(yīng)用。

2? HA在整形手術(shù)行業(yè)的應(yīng)用

交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠可有效矯正鼻唇溝，填補額頭、眼周、口周等部位的皺紋，還可矯正淚溝畸形，豐唇、豐耳垂等[15]。復(fù)數(shù)黏度和彈性模量較大的HA，植入后向組織內(nèi)擴散較少，且受面部肌肉運動時的外力影響較小，適用于鼻唇溝褶皺、木偶紋等方面的應(yīng)用[16];彈性模量較小的HA更柔軟，適用于淺表皺紋等美容中應(yīng)用[17];而復(fù)數(shù)黏度較小的產(chǎn)品，如：Belotero Balance，則具有良好的分散性，在皮下植入后能夠分布均勻，因此，適用于較薄的萎縮皮膚區(qū)域[18]。HA也可與肉毒毒素、富血小板血漿及二氧化碳等聯(lián)合注射治療改善面部老化[19]。周衛(wèi)等[20]證明含有三七成分的HA水凝膠能夠明顯抑制家兔硬膜外瘢痕中環(huán)氧化酶-2、轉(zhuǎn)化生長因子β1及其結(jié)締組織生長因子的表達，推測該凝膠能夠抑制纖維化瘢痕形成過程中的炎癥反應(yīng)且可以降低瘢痕硬度。近年來，由于部分整形機構(gòu)資歷不足或是操作技術(shù)有限，容易出現(xiàn)注射失誤后的并發(fā)癥，前期高壓氧治療已逐漸成為HA注射隆鼻術(shù)后并發(fā)癥的輔助治療，起到減輕炎癥、減小瘀斑面積和促進組織愈合的作用[21]。

3? 質(zhì)量控制方法研究進展

3.1 交聯(lián)劑殘留量的測定：經(jīng)過近些年的市場整合，交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠技術(shù)已趨于平穩(wěn)和雷同。交聯(lián)后的產(chǎn)品能增強其結(jié)構(gòu)強度及抗降解能力，從而延長在體內(nèi)的維持時間[22]。從交聯(lián)劑選擇層面來講，主要采用二乙烯基砜（DVS）和1，4-丁二醇二縮水甘油醚（BDDE），后者占據(jù)比例較大。用BDDE交聯(lián)修飾后的HA相對DVS具有毒性較低、反應(yīng)性佳等優(yōu)勢，逐漸取代DVS作為交聯(lián)透明質(zhì)酸的主要交聯(lián)劑。然而，交聯(lián)劑化學(xué)性質(zhì)活潑，單體有致突變和致癌的潛在風(fēng)險，因此在踐行轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中，為保證臨床應(yīng)用的安全性，有必要對交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中的交聯(lián)劑殘留量進行嚴格監(jiān)控?，F(xiàn)行行業(yè)標準YY/T 0962-2014版《整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠》中規(guī)定交聯(lián)劑殘留量不得大于2μg/g。

葛翠蘭等[23]采用高效液相色譜法對DVS-HA凝膠產(chǎn)品的交聯(lián)劑殘留量進行測定，測定含量低于最低檢測限60ng/g，根據(jù)方法學(xué)驗證，實驗結(jié)果可靠，但前期樣品處理較繁瑣。張治云等[24]對交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉細胞支架材料中交聯(lián)劑殘留量進行測定，將支架材料剪碎后加適量水使其充分溶脹成凝膠，再加乙醇，使交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠形成均勻絮狀沉淀，可充分提取游離的BDDE，本試驗通過色譜條件優(yōu)化，采用不分流模式，溶液直接進樣，定量限為0.104μg/ml，方法的檢測線、靈敏度都達到相應(yīng)要求。馮梅等[25]采用氣相色譜法，得到定量限為1.85μg/ml，靈敏度和線性相關(guān)性均較差，對比后認為熒光分光光度法簡單準確，靈敏度高，更適用于交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的質(zhì)量控制。魏長征等[26]采用氣相色譜法考察BDDE的熱穩(wěn)定性，同時利用熒光分光光度法測定交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中BDDE的殘留量。通過分析熒光法檢測BDDE殘留量的影響因素（透明質(zhì)酸酶及BDDE穩(wěn)定性）進而改良熒光法，即將透明質(zhì)酸酶添加到 BDDE 標準溶液中，實測值減去標底值得到交聯(lián)劑的含量。改良后的熒光法特異性更強，即尼克酰胺特異性地與環(huán)氧化合物中的三元環(huán)發(fā)生反應(yīng)生成具有熒光吸收的有色物質(zhì)，且對應(yīng)顏色的深淺與環(huán)氧化合物的含量成線性相關(guān)，由此避免了測定過程中高溫對交聯(lián)劑含量的干擾作用，具有更高的準確度、靈敏度，能夠更好地控制產(chǎn)品的生物安全性。

3.2 透明質(zhì)酸鈉含量的測定：無論何種來源，HA均由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖按1：1的摩爾比組成，可根據(jù)其中葡萄糖醛酸或者氨基葡萄糖的含量來計算HA的含量[27]。張莉等[28]采用高效凝膠色譜法同時測定眼用粘彈劑中透明質(zhì)酸鈉和硫酸軟骨素鈉的含量，通過凝膠滲透色譜與多角度激光光散射儀聯(lián)用確定透明質(zhì)酸鈉和硫酸軟骨素的分子量，使用親水性凝膠色譜柱和示差折光檢測器，排除其他成分干擾，實現(xiàn)復(fù)雜樣品中兩活性成分的測定，該方法簡單易控，準確度高，可用于眼用黏彈劑活性成分的質(zhì)量控制。微生物來源的透明質(zhì)酸酶可將HA特異性降解為不飽和雙糖（ΔDiHA），陳玉娟等[29]通過測定供試品中的ΔDiHA得到透明質(zhì)酸鈉的含量，酶解法結(jié)合高效液相色譜法測定具有干擾因素少且檢測結(jié)果較為可靠的優(yōu)勢，但劣勢是操作步驟較為繁瑣。Chen等[30]采用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）濁度法對發(fā)酵液中透明質(zhì)酸鈉含量進行測定，透明質(zhì)酸鈉與CTAB等陽離子表面活性劑產(chǎn)生絡(luò)合反應(yīng)，且在一定濃度范圍內(nèi)遵循朗伯-比爾定律，該方法準確度較高，然而缺點是實時檢測難度高。李敏等[31]采用改良咔唑法測定重組人溶菌酶滴眼液中透明質(zhì)酸鈉的含量。對顯色條件進行優(yōu)化，確定硼砂-硫酸加入量為5ml，水解溫度為100℃，顯色加熱時間為20min，咔唑-乙醇溶液用量為0.2ml，顯色后用冰水浴迅速冷卻代替自然冷卻的方法，獲得了最佳的測定條件。湯祥忠等[32]采用紫外-可見分光光度法測定高吸水性止血材料中透明質(zhì)酸鈉含量，將樣品充分溶解于水中，過濾后取濾液，分別加四硼酸鈉硫酸溶液和咔唑乙醇溶液，采用紫外-可見分光光度法，在600nm波長處測定吸光度，以葡萄糖醛酸的濃度對相應(yīng)的吸光度計算回歸方程，通過測定葡萄糖醛酸的含量間接確定透明質(zhì)酸鈉的含量。與對溫度要求較高的阿利新藍染料法、檢測條件嚴苛的高效液相色譜法、價格昂貴且耗時較長的定量試劑盒法相比，改良咔唑法條件限定較少、顯色速度快、準確度高。該方法適合含葡萄糖醛酸分子在酸性條件下水解的多糖類化合物，歐洲藥典以及國家藥品標準中都采用此種方法作為含量檢測的法定方法，適合作為整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中透明質(zhì)酸鈉含量測定的方法。

3.3 溶脹度的測定：凝膠的溶脹度比率是指凝膠吸水膨脹后與吸水前的比重，它是決定HA顆粒降解的主要因素，溶脹比與凝膠的顆粒結(jié)構(gòu)有關(guān)。張?等[33]將制備的水凝膠凝固成膠體后，稱其質(zhì)量，將凝膠保持在37℃恒溫PBS水浴溶液中，放置過夜，使其自然溶脹，從PBS溶液中取出水凝膠，用濾紙吸去表面液體，并再次稱其質(zhì)量，以凝膠溶脹的重量與凝固成膠體的凝膠質(zhì)量之比作為溶脹比。Shimojo等[34]采用二乙烯基砜作為交聯(lián)劑制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，溶脹比為HA/DVS微粒的溶脹重量與凝膠干重的比。James等[35]通過測定原樣品水凝膠的質(zhì)量與在F12培養(yǎng)基中浸泡24h（平衡）后樣品的干燥水凝膠之比確定溶脹度。在凝膠濃度一定的情況下，溶脹度的大小雖然不能準確得到交聯(lián)修飾度的數(shù)值，但能一定程度反映交聯(lián)修飾度[36]。

3.4 蛋白質(zhì)含量的測定：透明質(zhì)酸鈉中常見雜質(zhì)包括蛋白質(zhì)、核酸及硫酸軟骨素等，少量雜質(zhì)并不影響其在成品中的作用，但是原料中若含有較多的蛋白質(zhì)（1%），會引起機體產(chǎn)生抗原反應(yīng)，易出現(xiàn)致敏癥狀[37]。因此，需要對其進行研究并嚴格控制終產(chǎn)品中的蛋白殘留量。蛋白質(zhì)測定方法較多，常見的包括凱氏定氮法、雙縮脲法、紫外吸收法、福林酚法以及考馬斯亮藍法等[38-39]。

1976年，Bradford利用考馬斯亮藍與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸和芳香族氨基酸結(jié)合形成藍色復(fù)合物的原理，確定了定量檢測微量蛋白濃度的考馬斯亮藍法[30]。林玉珍[40]對測定透明質(zhì)酸鈉中作為雜質(zhì)的蛋白含量測定方法進行研究，對比分析了考馬斯亮藍法和福林酚法的檢測結(jié)果和理論機制，得出福林酚法在檢測過程中會受到多肽的干擾，HA樣品中存在除蛋白以外的多肽類雜質(zhì)，檢測過程中也會和福林酚發(fā)生反應(yīng)，致使測定結(jié)果不可靠;而考馬斯亮藍法靈敏度高、準確度高且操作簡便，測定蛋白質(zhì)的回收率接近100%，且通過本結(jié)果還證實HA對考馬斯藍法不存在干擾，更適合作為整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中蛋白含量測定的方法。研究表明，福林酚法主要適用于蛋白質(zhì)為主要成分的供試品，而考馬斯藍法則適用于蛋白質(zhì)為少量成分的供試品[41]。趙卓等[42-43]在實驗操作過程中，模擬不同條件的光源，得出考馬斯亮藍分子結(jié)構(gòu)對光照敏感，光照強烈會使顯色劑吸收光譜發(fā)生改變，造成檢測結(jié)果出現(xiàn)較大波動，因此，需采用棕色試劑瓶且避光測定。同時，研究證明在1～100mg/ml蛋白質(zhì)濃度測定范圍內(nèi)，室溫20℃、孵育20～30min時測定蛋白含量較為穩(wěn)定，并且蛋白濃度越高，考馬斯亮藍法測定蛋白濃度過程中抵御各類外在干擾因素的能力越強?？捡R斯亮藍法蛋白質(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的復(fù)合物顏色穩(wěn)定，消光系數(shù)高，操作簡便且對儀器要求單一[44]。然而該方法操作過程中需要嚴格注意一些細節(jié)，否則直接影響測定結(jié)果，例如：考馬斯亮藍G250與石英比色皿（成分：二氧化硅）會產(chǎn)生強烈的結(jié)合，因此，本實驗需使用玻璃或塑料比色皿[45]。

3.5 重金屬的測定：重金屬通常是指在一定條件下能與硫代乙酰胺或者硫化鈉作用而顯色的金屬雜質(zhì)，它也是交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中必須嚴格控制的雜質(zhì)之一。人體中重金屬含量若積累到一定程度，輕則頭暈惡心，重則神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，甚至有致癌的可能。鉛是重金屬中毒性較大的，容易在體內(nèi)積蓄中毒，且在制劑生產(chǎn)過程中接觸機會較多，因此，質(zhì)量標準中對重金屬檢測時以鉛的含量為代表加以控制。曲建全[46]采用重金屬限度檢查法，以硫代乙酰胺試液作為顯色劑，首先將透明質(zhì)酸鈉供試品灼燒破壞，然后取其熾灼殘液，經(jīng)過一定的處理后在酸性溶液中進行顯色。該方法為《中華人民共和國藥典》2015年版四部中重金屬檢查法第二種方法，利用重金屬雜質(zhì)與硫代乙酰胺試液反應(yīng)生成有色的硫化物，與一定量的標準硝酸鉛溶液經(jīng)同法處理后所顯顏色進行比較，為半定量檢測方法[47]。測定過程中熾灼殘渣加入硝酸處理后，必須將其蒸干，直至氧化氮蒸氣除盡為止，否則會使硫代乙酰胺水解生成硫化氫，影響測定結(jié)果。

3.6 分子量的測定：分子量是表征HA最基本的特征之一，因HA雙糖單位數(shù)量不一，造成分子鏈長短有一定差異，所以其分子量的大小有所不同。不同分子量HA的物化性質(zhì)也有一定差別，決定了其在化妝品、保健、醫(yī)療行業(yè)的應(yīng)用范疇。HA是一種非均一的物質(zhì)，各種方法測定的分子量值都為平均相對分子量。方法包括特性黏度法、高效凝膠滲透色譜法、光散射法及超速離心法等。特性粘度法可以合理預(yù)估非純品HA的分子量，廣泛應(yīng)用于HA純品的分子量測定[48-49]。Karlsson等[50]選擇梯度洗脫的方式，利用陰離子交換色譜法，測定HA的峰值分子量，且對其分子量分布進行分析，設(shè)置UV檢測波長為210nm，研究得出，在分子量0.1×106～5×106范圍內(nèi)，HA峰值分子量精密度良好，分子量分布較為合理。然而該方法易受雜質(zhì)干擾，對純度要求高。秦東等[51]選擇近紅外漫反射光譜法測定HA分子量，采用最小二乘法回歸多元校正法對46個HA粉體樣品在近紅外光譜選定區(qū)域進行了分析，相關(guān)參數(shù)以及卡方檢驗得到的近紅外光譜重復(fù)性都在允許誤差范圍內(nèi)，認為該方法快速測定HA分子量可行。劉莉莉等[52]采用多角度激光光散射儀與體積排阻色譜法聯(lián)用（MALLS-GPC）為絕對表征提供了新思路，由于光散射測量不依附于泵速分子構(gòu)象或聚合物標準，可直接獲得絕對分子量及相應(yīng)數(shù)據(jù)，適用于整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠產(chǎn)品的表征。

4? 展望

早期的面部除皺手術(shù)以切除松弛皮膚為主要內(nèi)容，隨著面部解剖層研究的發(fā)展，面部除皺從皮膚逐漸深入到SMAS、脂肪組織以及骨膜等部分，人們逐漸了解到面部衰老不僅是皮膚軟組織的松弛，也是容量的缺失，需要外源填充劑的注射以延緩衰老造成的皺紋和面部凹陷[53]。常見的面部填充劑包括HA、左旋聚乳酸以及膠原蛋白等。

HA在改性、復(fù)合方面的研究層出不窮，為美容整形行業(yè)提供各類特征、適合不同臨床需求的產(chǎn)品，由此決定了此類HA衍生物在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的廣泛性。然而整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠產(chǎn)品的應(yīng)用仍舊處于一個初步開發(fā)階段，交聯(lián)產(chǎn)物的性質(zhì)仍需進一步研究，產(chǎn)品制劑中交聯(lián)劑的劑量、毒性以及其他成分的添加量也需進行有效的質(zhì)量控制，從而推動整形行業(yè)的不斷發(fā)展。通過化學(xué)修飾/交聯(lián)得到的凝膠在機械性能和抗降解能力方面都有所提升，對于注射整形持久性和創(chuàng)傷愈合等方面的應(yīng)用提供了保障，未來技術(shù)革新所探究的新的交聯(lián)方式將以簡易性、可控性和智能性逐步取代傳統(tǒng)的交聯(lián)方式，應(yīng)用范疇也會相繼擴大。同時由于中國化妝品行業(yè)起步較晚，部分原料仍依靠進口，因此，開發(fā)高效、安全無毒、具有新型功能的HA衍生物成為中國化妝品行業(yè)發(fā)展進程中亟待解決的難題之一。

（致謝：衷心感謝蒙一純博士在本綜述撰寫期間給予得細致指導(dǎo)與精心點撥！）

[參考文獻]

[1]張堃，簡軍，張政樸.透明質(zhì)酸的結(jié)構(gòu)、性能、改性和應(yīng)用研究進展[J].高分子通報，2015，28（9）：217-226.

[2]崔媛，段潛，李艷輝.透明質(zhì)酸的研究進展[J].長春理工大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2011，34（3）：101-106.

[3]徐新，施丹萍，葉玟希，等.交聯(lián)透明質(zhì)酸衍生物的制備進展[J].廣東化工， 2012，39（5）：99-100.

[4]蘇江偉，張燕，吳萬福，等.交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠研究進展[J].山東化工， 2020，49（2）：75-78.

[5]王靜.透明質(zhì)酸在整形美容中的研究進展[J].中國醫(yī)療美容，2016，6（9）： 70-72.

[6]Romagnoli? M，Belmontesi? M. Hyaluronic? acid–based fillers： theory and practice[J].Clin Dermatol，2008，26（2）：123-159.

[7]李蠡，楊蓉婭.透明質(zhì)酸類皮膚軟組織填充劑及其研究進展[J].實用皮膚病學(xué)雜志，2011，4（4）：156-159.

[8]American Society of Plastic Surgeons. 2018 Natioonal? Plastic Surgery Statistics [R/OL].Plastic Surgery Statistics，2018：https：//www. plasticsurgery.Org/documents/News/Statistics/2018/plastic-surgery-statistics-report-2018. pdf.

[9]姜中雨，馮祥汝，丁建勛，等.高分子面部填充劑的臨床應(yīng)用進展[J].中國美容整形外科雜志，2018，29（8）：504-506.

[10]張曉鷗，呂旸，毛華，等.透明質(zhì)酸支架材料：應(yīng)用研究與產(chǎn)品轉(zhuǎn)化前景[J]. 中國組織工程研究，2018，22（2）：294-302.

[11]Coleman SR.Structural fat grafts： the ideal fille[J].Clin Plast Surg， 2001，28（1）：111-119.

[12]Morikawa Y，Katsumoto Y，Okada T，et al.Pulmonary hypoplasia induced by liquid paraffin injection into fetal thoracic cavity with special reference to renal development in rats[J].Vet Me Sci，2000，62（2）： 135-140.

[13]Berkstein A.The treatment of atrophic rhinitis with injectable silicone[J].Laryngol Otol，1966，80（6）：634-637.

[14]Guasch E，Sandor GK.Soft tissue augmentation techniques and materials used in the oral cavity： an overview[J].Implant Dent，2016， 25（3）：427-434.

[15]魏健，劉建建，黃思玲，等.透明質(zhì)酸交聯(lián)衍生物的研究進展[J].高分子材料科學(xué)與工程，2017，33（10）：183-190.

[16]Kablik J，Monheit GD，Liping YU，et al.Comparative physical properties of hyaluronic acid dermal fillers[J].Dermatol Surg，2009，35 Suppl 1（Supplement s1）：302-312.

[17]趙喜迎，王磊，譚謙，等.透明質(zhì)酸填充鼻唇溝的臨床應(yīng)用進展[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2019，28（3）：161-163.

[18]Sundaram H，Cassuto D.Biophysical characteristics of hyaluronic acid soft-tissue fillers and their relevance to aesthetic applications[J]. Plast Reconstr Surg，2013，132（2）：5S-21S.

[19]楊荷丹，蔣娟，趙小忠，等.注射透明質(zhì)酸在促進面部年輕化應(yīng)用中的研究進展[J].中國麻風(fēng)皮膚病雜志，2019，35（3）：179-183.

[20]周衛(wèi)，劉燦，孔煥宇，等.三七透明質(zhì)酸鈉凝膠對家兔硬膜外瘢痕中Cox-2、TGF-β1及CTGF表達的影響[J].中國脊柱脊髓雜志，2011，21（5）：384-389.

[21]倪嘯曉，謝秋幼，曾燕苗，等.早期高壓氧治療透明質(zhì)酸鈉凝膠注射隆鼻術(shù)并發(fā)癥的療效觀察[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2017，26（2）：47-50.

[22]趙華，何聰芬，蘭社益，等.天然防腐劑那他霉素的抑菌效果試驗[J].北京工商大學(xué)學(xué)報，2015，23（4）：13-15.

[23]葛翠蘭，顧其勝.交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠中交聯(lián)劑的HPLC測定[J].上海生物醫(yī)學(xué)工程雜志，2006，27（4）：223-224.

[24]張治云，劉榮磊，陳建英，等.交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉細胞支架材料中交聯(lián)劑殘留量的測定[J].生物醫(yī)學(xué)工程研究，2015，34（1）：23-26.

[25]馮梅，張格.熒光分光光度法測定交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠中交聯(lián)劑的殘留量[J].藥物分析雜志，2012，32（4）：654-657.

[26]魏長征，呂黃紅，張健，等.交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑殘留量的檢測方法研究[J].中國修復(fù)重建外科雜志，2015，29（5）：615-619.

[27]凌沛學(xué).透明質(zhì)酸[M].北京：中國輕工業(yè)出版社，2000：41-42.

[28]張莉，趙鵬，何濤，等.高效凝膠色譜法同時測定眼用粘彈劑中透明質(zhì)酸鈉和硫酸軟骨素鈉的含量[J].理化檢驗-化學(xué)分冊，2018，54（3）：260-263.

[29]陳玉娟，陳雯雯，喬莉蘋，等.高效液相色譜法測定透明質(zhì)酸鈉含量的研究[J]. 藥學(xué)研究，2020，39（3）：146-148，180.

[30]Chen YH，Wang Q.Establishment of CTAB Turbidimetric method to determine hyaluronic acid content in fermentation broth[J].Carbohydr Polym，2009，78（1）：178-181.

[31]李敏，侯增淼，李曉穎，等.改良咔唑法測定重組人溶菌酶滴眼液中透明質(zhì)酸鈉的含量[J].化學(xué)分析計量，2019，28（1）：95-98.

[32]湯祥忠，劉東，楊永環(huán).高吸水性止血材料中透明質(zhì)酸鈉含量的測定[J].河南科技，2019，35（34）：119-121.

[33]張?，周尚儒，燕玉奎，等.紅芪多糖HG-2含量及聯(lián)合透明質(zhì)酸水凝膠的參數(shù)測定[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2018，34（6）：487-490.

[34]Shimojo AAM，Pires AMB，Lichy R，et al.The crosslinking degree controls the mec HA nical， rheological， and swelling properties of hyaluronic acid microparticles[J].J Biomed Mater Res Part A，2015， 103（2）：730-737.

[35]James WS，Stephen D.Photo-cross-linked met HA crylated polysacc HA ride solution blends with high chondrocyte viability， minimal swelling， and moduli similar to load bearing soft tissues[J].Eur Polym J，2015， 72：687-697.

[36]楊彪，郭學(xué)平，臧恒昌，等.交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠修飾度的測定方法研究進展[J]. 藥物生物技術(shù)，2015，22（2）：177-180.

[37]蒙一純，宋慧峰.交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠微整形理論與實踐[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：4-5.

[38]房列濤，蘭雪，沈秀軍，等.雙波長600 nm/460 nm分光光度法測定蛋白質(zhì)含量研究[J].生物學(xué)雜志，2015，32（4）：94-97.

[39]曹穩(wěn)根，焦慶才，劉茜，等.考馬斯亮藍顯色劑變色反應(yīng)機理的研究[J].化學(xué)學(xué)報，2002，60（9）：1656-1661.

[40]林玉珍.透明質(zhì)酸鈉中蛋白質(zhì)含量測定方法的比較[J].生物技術(shù)世界，2013，7（5）：6.

[41]賀建華，鹿麟，邵純君.福林酚法與考馬斯亮藍法測定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白質(zhì)含量的比較[J].中國藥師，2017，20（10）：1861-1863.

[42]趙卓，籍浩天，劉東波，等.光照對考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)濃度影響的研究[J].吉林師范大學(xué)學(xué)報，2015，35（2）：112-116.

[43]趙卓，嵇雅茹，籍浩天，等.溫度對考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)濃度的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（4）：5-7，36.

[44]王鏡巖，朱圣庚，徐長法.生物化學(xué)（上冊）[M].3版.北京：高等教育出版社， 2002：21-35.

[45]Chial HJ，Thompson HB，Splttgerber AG.Aspectral study of the charge forms of coomassie blue G[J].Anal Biochem，1993，209（2）： 258-266.

[46]曲建全.化妝品用透明質(zhì)酸鈉的質(zhì)量標準及檢驗方法研究[D].濟南：山東大學(xué)，2013.

[47]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].2015版.四部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：附錄0821-0822.

[48]Li M，Rosenfeld L，Vilar RE，et al.Degradation of hyaluronan by peroxynitrite[J].Arch Bioehem Biophys，1997，341（2）：245-250.

[49]Soltes L，Mendichi R，Lath D，et al.Molecular characteristics of some commercial high-molecular-weight-hyaluronans[J].Biomed Chromatogr， 2002，16（7）：459-462.

[50] Karlsson G，Bergman R.Determination of the distribution of molecular masses of sodium hyaluronate by high-Performance anion-exchange chromatography[J].Chromatogr A，2003，986（1）：67-72.

[51]秦東，橫昌藏，劉愛華，等.近紅外光譜法測定透明質(zhì)酸的分子量[J].醫(yī)藥和生物醫(yī)學(xué)分析雜志，2010，53：274-278.

[52]劉莉莉，潘華先，施燕平，等.醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠的絕對分子量及其分布的測定方法研究[J].藥物分析雜志，2013，33（8）：

1435-1438.

[53]Wollina U.Facial rejuenation starts in the midface： three-dimensional volumetric facial rejuvenation has beneficial effects on nontreated neighboring esthetic units[J]. Cosmet Dermatol，2016，15（1）： 82-88.

[收稿日期]2020-03-02

本文引用格式： 于浩，姜愛莉，李敏，等.《整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠》標準中質(zhì)量控制方法的研究進展[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2020，29（12）：185-189.