周彩虹，金 晨，趙艷紅，熊 瑤，李 彤，張 凌*

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西 南昌 330004； 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004）

石榴花又名榴花，酸石榴花，有大紅、桃紅、橙黃、粉紅、雪白等顏色，以火紅色最多。石榴花為石榴科石榴屬植物石榴Punica granatumL.的干燥花瓣，是維吾爾族常用藥材，維語名阿娜爾、古麗娜。石榴在5～7 月開花，花期長，開花量大，不能結(jié)果的鐘狀花和部分筒狀花會自然脫落，因此石榴花資源豐富，極具開發(fā)價值［1］。維醫(yī)認為，其性質(zhì)二級干寒，具有收斂止瀉、止汗止血的作用，常用于腹瀉日久；外用于治療出血不止、口舌生瘡、脫肛痔瘡、口臭牙疼、皮膚瘙癢。另外，這種花還被用于治療早生白發(fā)的年輕人。

石榴花被收載于1999 年版《衛(wèi)生部藥品標準·維吾爾藥分冊》、2005 年版《中華本草·維吾爾藥卷》［2］?，F(xiàn)代藥理研究表明，石榴花提取物在抗炎、保肝、治療糖尿病及其并發(fā)癥、預(yù)防心血管疾病等方面有較好功效［3］，因此研究其化學(xué)成分及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)極為重要，但是目前關(guān)于其化學(xué)成分的研究較少，其有效成分以多酚、黃酮為主［4］，主要存在于乙酸乙酯和正丁醇部位［5］。本課題組前期建立了不同產(chǎn)地古麗娜的HPLC 指紋圖譜，為構(gòu)建其質(zhì)量評價體系提供參考［6］，同時在石榴花乙酸乙酯部位中首次分離得到8-甲雷杜辛，7-羥基-4′，6-二甲氧基異黃酮、刺芒柄花素、三粒小麥黃酮、蒲公英萜酮、D-半乳糖醇等［7］。本實驗用60%乙醇提取石榴花，在石油醚、正丁醇部位分離得到12 個化合物，其中1～4、7～12 為首次從該植物中分離得到，1～3、7～12 為首次從石榴屬植物中分離得到。

1 材料

Mercury 600 型核磁共振儀（美國Varian 公司）；Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；RE-201 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、ZF7三用紫外分析儀（杭州瑞佳精密科學(xué)儀器有限公司）；HC-150T2 型高效多功能粉碎機（永康市綠可食品機械有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實驗設(shè)備有限公司）；HH-6 型數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；AB104-N 型電子天平（萬分之一，瑞士Mettler-Toledo 公司）。柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠G、D101 型大孔吸附樹脂（青島海洋化工廠）。CMC-Na 黏合劑（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；顯色劑10%硫酸-乙醇（自制）；Sephadex LH-20 凝膠（美國GE 公司）。氘代試劑（美國CIL 公司）；甲醇（色譜純，西隴科學(xué)股份有限公司）；其他試劑均為分析純。

石榴花購于新疆和田、喀什、葉城等地，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)蘭衛(wèi)教授鑒定為石榴科植物石榴Punica granatumL.的干燥花瓣。

2 提取與分離

取8 kg 干燥花瓣，用高效多功能粉碎機粉碎，60%乙醇60 ℃加熱回流提取2 次，每次60 min，提取液用紗布過濾，合并濾液，減壓濃縮得總浸膏。用適量水將總浸膏超聲混懸，分別用等體積的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取至無色，回收溶劑得正丁醇部位浸膏（867.7 g）和石油醚部位浸膏（43.9 g）。

正丁醇萃取部位浸膏經(jīng)AB-8 大孔樹脂，以乙醇-水（5%、30%、40%、60%、90%）梯度洗脫得到5 個餾分Fr.1～Fr.5。餾分Fr.4（273.34 g）過硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脫，得6 個餾分Fr.4.1～Fr.4.6。其中Fr.4.4 經(jīng)中壓ODS、反相柱色譜、Sephadex LH-20分離，再經(jīng)半制備柱色譜［甲醇-水（25∶75）］，重結(jié)晶，得化合物1（9.25 mg）、5（8.00 mg）；Fr.4.3 經(jīng)Sephadex LH-20，洗脫劑為甲醇，經(jīng)薄層色譜檢識，合并得7 個餾分Fr.4.3.1～Fr.4.3.7，F(xiàn)r.4.3.3 過硅膠柱，經(jīng)二氯甲烷-甲醇（8∶1）洗脫，重結(jié)晶，得化合物 2（10.31 mg）、6（6.13 mg）；餾分Fr.5（37.13 g）經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇（120∶1、60∶1、30∶1、10∶1、5∶1、0∶1）洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并得8 個餾分Fr.5.1～Fr.5.8，F(xiàn)r.5.3 經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物12（8.24 mg）；Fr.3（125.65 g）經(jīng)中壓ODS，以甲醇-水（5∶95、30∶60、50∶50、80∶20、0∶100）梯度洗脫，得5 個餾分Fr.3.1～Fr.3.5，F(xiàn)r.3.3 經(jīng)半制備柱色譜［甲醇-水（30∶70）］，得化合物3（20.68 mg）、4（45.75 mg）。石油醚萃取部位（43.9 g）經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（200∶1、150∶1、100∶1、80∶1、50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脫得10 個餾分Fr.6～Fr.15，再經(jīng)石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，反復(fù)過硅膠柱，重結(jié)晶得化合物7（4.38 mg）、8（5.57 mg）、9（6.01 mg）、10（12.10 mg）、11（15.28 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，F(xiàn)eCl3顯色呈陽性，表明有酚羥基存在。ESI-MSm／z：635.1［M-H］－，分子式C27H24O18，根據(jù)其不飽和度和含氧個數(shù)推測該化合物為鞣質(zhì)類。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.16（2H，s，H-galloyl），7.11（2H，s，H-g-alloyl），7.07（2H，s，H-galloyl）為苯環(huán)上質(zhì)子信號，為6 個兩兩對稱的質(zhì)子，推測其為沒食子酸鞣質(zhì)且為3 個沒食子?；?.79（1H，d，J＝8.2 Hz，glc-H-1），5.23（1H，t，J＝9.6 Hz，glc-H-4），4.45（1H，dd，J＝12.4，2.3 Hz，glc-H-6），4.23（1H，dd，J＝12.4，4.9 Hz，glc-H-6），4.06（1H，m，glc-H-5），3.85（1H，t，J＝9.3 Hz，glc-H-3），3.66（1H，m，glc-H-2）為糖上的氫信號；13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：166.9，167.4，168.1（3×galloyl-CO）為3 個沒食子?；系聂驶夹盘?，146.4，146.5，146.5（3×galloyl-C-3，5），139.9，140.1，140.1（3×galloyl-C-4），120.5，121.0，121.2（3×galloyl-C-1），110.3，110.4，110.6（3×galloyl-C-2，6）為沒食子酰基上的苯環(huán)碳信號，63.6（glc-C-6），71.9（glc-C-4），74.1（glc-C-2），74.4（glc-C-3），76.0（glc-C-5），95.8（glc-C-1）為糖上碳信號。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］基本一致，故鑒定為β-1，4，6-三-O-沒食子?；咸烟?。

化合 物2：黃色晶體。ESI-MSm／z：347.1［M-H］＋，分子式C17H16O8。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.30（1H，s，H-7），4.41（1H，dd，J＝7.8，2.0 Hz，H-8），4.06（1H，dt，J＝10.8，6.7 Hz，H-1a′），3.98（1H，dt，J＝10.8，6.5 Hz，H-1a′），2.99（1H，dd，J＝18.6，7.8 Hz，H-9a），2.43（1H，dd，J＝18.6，2.1 Hz，H-9b），1.51（2H，m，H-2′），1.22（2H，m，H-3′），0.82（2H，t，J＝7.4 Hz，H-4′）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：13.5（C-4′），18.5（C-3′），29.9（C-9），37.1（C-2′），40.8（C-8），64.3（C-1′），108.0（C-7），113.0（C-7a），115.0（C-3a），138.6（C-3），140.3（C-6），143.7（C-4），145.7（C-2），149.6（C-5），160.2（C-1），171.9（C-11），193.0（C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］基本一致，故鑒定為butylbrevifolin carboxylate。

化合物3：淡黃色針狀結(jié)晶，F(xiàn)eCl3顯色呈陽性，表明有酚羥基存在。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.89（1H，s），10.12（1H，s），10.06（1H，s）為3 個酚羥基信號，7.30（1H，s）為芳氫信號，4.42（1H，dd，J＝7.8，2.1 Hz），2.97（1H，dd，J＝18.7，7.8 Hz），2.46（1H，dd，J＝4.1，2.1 Hz）呈現(xiàn)ABX 系的信號，3.62（3H，s）表明分子中有CH3O-片斷；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：37.0（C-10），40.6（C-9），108.1（C-7），113.0（C-3a），115.0（C-7a），138.4（C-3），140.3（C-5），143.6（C-4），145.8（C-2），149.7（C-6），160.1（C-8），172.5（C＝O），193.0（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］基本一致，故鑒定為短葉蘇木酚酸甲酯。

化合 物4。黃色晶體，ESI-MSm／z：247.0［M＋H］＋，分子式C12H8O6。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.29（1H，s，Ar-7），3.16，2.50（各2H，t，環(huán)戊烯酮環(huán)上-CH2-CH2-）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：23.9（C-8），33.0（C-9），108.0（C-7），113.2（C-7a），115.5（C-3a），140.2（C-3），141.4（C-6），144.2（C-4），145.0（C-2），149.3（C-5），160.6（C-1），195.5（C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］基本一致，故鑒定為短葉蘇木酚。

化合物5：白色粉末，F(xiàn)eCl3顯色呈陽性，表明有酚羥基存在。ESI-MSm／z：483.1［M-H］－，分子式C20H20O14，根據(jù)其不飽和度和含氧個數(shù)推測該化合物為鞣質(zhì)類或黃酮苷類。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.14（2H，s，H-galloyl），7.08（2H，s，H-galloyl）為苯環(huán)上質(zhì)子信號，為4 個兩兩對稱的質(zhì)子，推測其為沒食子酸鞣質(zhì)且有2 個沒食子酰基，5.69（1H，d，J＝7.4 Hz，glc-H-1），4.56（1H，dd，J＝12.1，2.1 Hz，glc-H-6），4.41（1H，dd，J＝12.1，5.0 Hz，glc-H-6），3.74～3.71（1H，m，glc-H-5），3.53～3.51（3H，m，glc-H-2，3，4）為糖上氫信號；13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：167.1，168.4（2×gallyol-CO）為2 個沒食子酰基的羰基碳信號；110.3，110.7（2×galloyl-C-2，6），120.7，121.4（2×galloyl-C-1），140.0，140.5（2×galloyl-C-4），146.6，146.6（2×galloyl-C-3，5）為沒食子?；系谋江h(huán)碳信號，64.6（glc-C-6），71.3（glc-C-4），74.2（glc-C-2），76.6（glc-C-5），78.2（glc-C-3），96.1（glc-C-1）為糖上碳信號。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］基本一致，故鑒定為β-1，6-二-O-沒食子?；咸烟恰?/p>

化合物6：黃棕色針狀結(jié)晶。ESI-MSm／z：301.0［M-H］－，分子式C14H6O8。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.71（2H，d，-OH），7.46（1H，s，H-3）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：107.7（C-3，3′），110.3（C-2，2′），112.3（C-1，1′），136.4（C-5，5′），139.6（C-4，4′），148.1（C-6，6′），159.2（C-7，7′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定為鞣花酸。

化合物7：黃色針狀結(jié)晶，F(xiàn)eCl3顯色呈陽性，表明有酚羥基。ESI-MSm／z：283［M-H］－，分子式C16H12O5，根據(jù)其不飽和度推測該化合物存在多個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，可能為黃酮類。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：12.87（H，s，5-OH），8.23（1H，s，H-2），7.48（2H，d，J＝8.7 Hz，H-2′，6′），6.98（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3′，5′），6.24（1H，s，H-8），6.08（1H，s，H-6），3.78（3H，s，4′-OCH3）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：55.0（4′-OCH3），94.23（C-8），100.0（C-6），112.2（C-10），113.5（C-3′，5′），121.4（C-1′），123.3（C-3），130.0（C-2′，6′），153.3（C-2），157.7（C-9），158.9（C-4′），161.7（C-5），171.7（C-7），179.2（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］基本一致，故鑒定為鷹嘴豆芽素A。

化合物8：淡黃色結(jié)晶。ESI-MSm／z：299.1［M＋H］＋，分子式C17H14O5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.99（1H，s，H-5），7.97（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.50（2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，H-6′），7.05（1H，d，J＝8.9 Hz，H-6），6.98（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，H-5′），4.08（3H，s，8-OCH3），3.84（3H，s，4′-OCH3）；13CNMR（151 MHz，CDCl3）δ：55.5（4′-OCH3），62.1（8-OCH3），113.9（C-6），114.1（C-3′，C-5′），119.2（C-10），122.3（C-5），124.0（C-1′），124.9（C-3），130.3（C-2′，C-6′），134.0（C-8），150.1（C-9），151.6（C-2），153.1（C-7），159.8（C-4′），175.9（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］基本一致，故鑒定為retusin-8-methylether。

化合物9：白色無定型粉末（三氯甲烷）。ESI-MSm／z：425.3［M-H］－，分子式C30H50O。1HNMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.53（1H，dd，J＝8.2，3.2 Hz，H-15），3.19（1H，dd，J＝11.4，4.4 Hz，H-3），2.03（1H，dt，J＝12.9，3.3 Hz，H-16a），1.91（1H，dd，J＝14.6，3.2 Hz，H-16），1.09（3H，s，25-CH3），0.98（3H，s，24-CH3），0.95（3H，s，23-CH3），0.92（3H，s，26-CH3），0.90（6H，d，J＝1.9 Hz，27-CH3，29-CH3），0.82（3H，s，30-CH3），0.80（3H，s，28-CH3）；13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：15.6（C-25），15.6（C-24），17.6（C-11），18.9（C-6），21.5（C-30），26.1（C-27），27.3（C-2），28.1（C-23），28.9（C-20），30.0（C-28），30.1（C-26），33.2（C-22），33.5（C-29），33.8（C-21），35.0（C-7），35.9（C-12），36.8（C-16），37.7（C-13），37.8（C-10），37.9（C-17），38.1（C-1），38.9（C-8），39.1（C-4），41.4（C-19），48.9（C-9），49.4（C-18），55.7（C-5），79.2（C-3），117.0（C-15），158.2（C-14）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］基本一致，故鑒定為蒲公英賽醇。

化合物10：白色針狀結(jié)晶，溶于氯仿，在UV 365 nm 下顯淺暗斑，UV 254 nm 下無暗斑無熒光。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，m，H-6），3.52（1H，m，H-3），1.01（3H，s，19-CH3），0.92（3H，m，21-CH3），0.86（3H，m，29-CH3），0.83（3H，d，J＝2.4 Hz，26-CH3），0.81（3H，d，J＝6.7 Hz，27-CH3），0.68（3H，s，18-CH3）；13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：12.0（C-18），12.1（C-29），18.9（C-21），19.2（C-27），19.6（C-19），20.0（C-26），21.2（C-11），23.2（C-28），24.5（C-15），26.2（C-23），28.4（C-16），29.3（C-25），31.8（C-2），32.0（C-7），32.1（C-8），34.1（C-22），36.3（C-20），36.7（C-10），37.4（C-1），39.9（C-12），42.4（C-13），42.5（C-4），46.0（C-24），50.3（C-9），56.2（C-17），56.9（C-14），72.0（C-3），121.9（C-6），140.9（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］基本一致，故鑒定為谷甾醇。

化合物11：無色針晶（三氯甲烷）。EI-MSm／z：654.2［M＋H］＋，分子式C45H80O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，d，J＝5.0 Hz，H-6），3.53（1H，m，H-24），2.35（2H，t，H-4），2.27（2H，m，H-2′），1.00（3H，s，H-19），0.92（3H，m，H-12），0.88（3H，m，H-16′），0.84（3H，s，H-26），0.82（3H，m，H-16′），0.80（3H，s，H-27），0.68（3H，s，H-18）；13CNMR（151 MHz，CDCl3）δ：12.0（C-18），12.1（C-29），14.3（C-16′），18.9（C-21），19.2（C-27），19.6（C-19），20.0（C-26），21.2（C-11），22.9（C-15′），23.2（C-28），24.5（C-15），24.9（C-3′），26.2（C-23），28.4（C-16），29.2（C-25），29.3（C-4′，C-5′），29.4（C-6′），29.5（C-7′），29.6（C-8′），29.8（C-9′），29.8（C-10′～13′），31.8（C-2），32.0（C-14′），32.1（C-8），32.1（C-7），34.0（C-22），34.1（C-2′），36.3（C-20），36.7（C-10），37.4（C-1），39.9（C-12），42.4（C-4），42.5（C-13），46.0（C-24），50.3（C-9），56.2（C-17），56.9（C-14），72.0（C-3），121.9（C-6），140.9（C-5），178.7（C-1′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］基本一致，故鑒定為β-谷甾醇棕櫚酸酯。

化合物12：無色無定形固體粉末（甲醇）。EI-MSm／s：713.3［M］＋，分子式C40H75NO9。1HNMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.76（1H，dt，H-5），5.38（1H，m，H-2），4.28（1H，dd，H-3），3.89（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2′），3.87（1H，d，J＝1.5 Hz，H-1），3.72（1H，dd，J＝10.4，3.8 Hz，H-6＂），3.40～3.34（1H，m，H-5＂），3.31～3.27（1H，m，H-4＂），3.31～3.27（1H，m，H-3＂），3.20（1H，dd，J＝9.2，7.8 Hz，H-2＂），2.17～ 2.12（2H，m，H-6），2.12～2.03（2H，m，H-9′），2.02～1.97（2H，m，H-6′），1.75～1.69（1H，m，H-3′），1.58～1.54（2H，m，H-4′），1.25（20H，br，H-7～16），1.39～1.25（2H，m，H-17），1.39～1.25（2H，m，H-5′），1.39～1.25（2H，m，H-18），1.25（6H，br，H-10′～12′），1.25（2H，br，H-13′），1.25（2H，br，H-14′），0.91（3H，t，J＝6.9 Hz，H-19），0.91（3H，t，J＝6.9 Hz，H-15′）；13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：14.5（C-19，C-15′），23.8（C-14′），23.8（C-18），26.1（C-4′），27.9（C-9′），28.3（C-6′），30.3～30.9（C-7-16，C-5′，C-10′～ 12′），33.1（C-13′），33.1（C-17），33.7（C-6），35.9（C-3′），54.6（C-2），62.7（C-6″），69.7（C-1），71.6（C-4″），72.9（C-3），73.1（C-2′），75.0（C-2″），77.9（C-3″），78.0（C-5″），104.7（C-1″），129.9（C-7′），131.2（C-4），132.0（C-8′），134.4（C-5），177.2（C-1′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［19］基本一致，故鑒定為crispin A。