毛梗豨薟草乙酸乙酯部位化合物分離與結(jié)構(gòu)解析

陳冠宜 朱伶俐 靳永亮 張璐 熊文嬌 劉華*

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)科技學(xué)院，江西 南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330000)

0 引言

中藥豨薟草是菊科植物豨薟、腺梗豨薟和毛梗豨薟的干燥地上部分，為我國(guó)傳統(tǒng)中草藥，用藥歷史悠久，其化學(xué)成分復(fù)雜，廣泛應(yīng)用于臨床，性寒，味辛、苦，歸肝、腎經(jīng)，具有利關(guān)節(jié)、抗血栓、解毒、祛風(fēng)濕等臨床療效。目前，對(duì)豨薟草的研究多集中在原植物豨薟與腺梗豨薟上，對(duì)毛梗豨薟的研究較少，藥理實(shí)驗(yàn)表明，豨簽草中的二萜類、黃酮類、倍半萜類成分能夠能有效地祛除風(fēng)濕、抑制腫瘤、保護(hù)心血管系統(tǒng)。

1 化合物結(jié)構(gòu)解析

運(yùn)用不同柱色譜法，從毛梗豨薟草乙酸乙酯萃取部位分離得到6 種黃酮及酚酸類化合物，分別為槲皮素(化合物1)，水楊醇(化合物2)，對(duì)羥基苯乙酮(化合物3)，4-(4-羥基-苯基)-2-丁酮(化合物4)，3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛(化合物5)，對(duì)羥基苯甲醛(化合物6)。其中化合物2-5 為首次從毛梗豨薟草植物中分離得到。

化合物1：槲皮素

黃色針晶(甲醇)，ESI-MSm/z：303 [M+H]+，分子式為C15H10O7。

在1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 譜 中，δ7.51(1H，s，H-2’)，6.72(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5’)，7.37(1H，d，J= 8.5 Hz，H-6’)為黃酮B 環(huán)上的ABX 系統(tǒng)。6.02(1H，s，H-6)與6.24(1H，s，H-8)為黃酮A環(huán)上位于間位的兩個(gè)氫信號(hào)。在13C-NMR(150 MHz，CD3OD)譜中，δ175.8 是明顯的羰基碳信號(hào)。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比一致，進(jìn)而可以鑒定該化合物為槲皮素。

化合物2：水楊醇

淡黃色粉末(水)，ESI-MSm/z：126 [M-H]-，分子式為C7H8O2。

1H-NMR(600 MHz，D2O) 中，δ 7.24(1H，dd，J=7.5Hz，J=1.7Hz， H-3)，6.84(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6)推知該化合物為苯環(huán)的鄰位取代。且該化合物含有1 個(gè)羥甲基[δH：4.57(2H，s，H-7)，δC：59.6]。13C-NMR(150 MHz，D2O) 中，δ126.5，129.6，120.5，129.5，115.5為典型的苯環(huán)碳信號(hào)。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比一致，進(jìn)而可以鑒定該化合物為水楊醇。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物3：對(duì)羥基苯乙酮

無色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：134 [M-H]-，分子式為C8H8O2。

1H-NMR(600 MHz，CD3OD)中，δ7.87，6.80，2.53 氫信號(hào)的積分比值為2:2:3，推知該化合物為苯環(huán)的對(duì)位取代。且該化合物含1 個(gè) 乙 酰 基[δH：2.53(3H，s，8-CH3)；δC：199.4(C-7)，26.2(C-8)]。13C-NMR(150 MHz，CD3OD) 中，δ129.2，132.2，116.3，165.9為典型的苯環(huán)碳信號(hào)，且132.2，116.3 的碳信號(hào)強(qiáng)度明顯是其他碳信號(hào)的2 倍。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比一致，進(jìn)而可以鑒定該化合物為對(duì)羥基苯乙酮。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物4：4-(4-羥基-苯基)-2-丁酮

無色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：163 [M-H]-，分子式為C10H12O2。

1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 譜 中，δ7.02(2H，d，J= 8.5 Hz，H-2’/6’)，6.70(2H，d，J= 8.5 Hz，H-3’/5’)推 知 該 化 合 物 為 苯環(huán) 的 對(duì) 位 取 代，且 含1 個(gè) 乙 酰 基[δH：2.14(3H，s，1-CH3)；δC：28.6(C-1)；210.0(C-2)]。13C-NMR(150 MHz，CD3OD) 中，δ131.8，128.8，114.7，155.2 為典型的苯環(huán)碳信號(hào)。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比一致，進(jìn)而可以鑒定該化合物為4-(4-羥基-苯基)-2-丁酮。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物5：3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛

淡黃色固體(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：183.0645 [M+H]+，分子式為C9H10O4。

在1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 中，δ9.74(1H，s，-CHO) 是明顯的苯環(huán)上醛基氫取代信號(hào)，3.93(6H，s，-OCH3)提示有2 個(gè)連氧甲基。在13C-NMR(150 MHz，CD3OD)中，δ191.4 是一個(gè)醛基碳；55.4 是與氧相連的飽和碳，且其碳信號(hào)強(qiáng)度比旁邊的明顯多出一倍，推測(cè)55.4 是兩個(gè)碳。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比一致，進(jìn)而可以鑒定該化合物為3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物6：對(duì)羥基苯甲醛

淡黃色粉末(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：123.0441 [M+H]+，分子式為C7H6O2。

在1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 中，δ9.72(1H，s，-CHO) 是明顯的苯環(huán)上醛基氫取代信號(hào)。6.87(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2/6)，7.76(2H，d，J= 8.7 Hz，H-3/5)為苯環(huán)的鄰位氫，提示該苯環(huán)為對(duì)位取代。在13C-NMR(150 MHz，CD3OD)中，δ191.2 是一個(gè)醛基碳信號(hào)。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比一致，進(jìn)而可以鑒定該化合物為對(duì)羥基苯甲醛。

2 分離制備過程

2.1 儀器試劑

石油醚AR(60-90℃)、甲醇、甲醇AR、乙酸乙酯AR、飲用純凈水、二氯甲烷AR、無水乙醇AR、濃硫酸AR、正丁醇AR、HPLC液相色譜(梯度)。

2.2 實(shí)驗(yàn)材料

分析型反向色譜柱：Welehrom⑧高效液相色譜(4.6mm× 250mm,5μm)

羧甲基纖維素鈉(化學(xué)純)

制備型反相色譜柱：YMC-Pack 0DS-AC18 制備柱，20× 250mm，5μm

硅膠(100-200 目)

硅膠(300-400 目)

薄層色譜用硅膠板GF254

ODS

2.3 實(shí)驗(yàn)儀器

數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱GZX-9140MBF、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-52)、Waters 2695 型分析液相Waters2489 型制備液相、循環(huán)水真空泵SHE-DC、超聲波清洗器KQ-25ODB 、Buchi 中壓制備純化系統(tǒng)、數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-2)

2.4 提取

將10kg 干燥毛梗豨薟草粉碎，過20 目篩，以95%乙醇室溫回流提取3 次，每次3h，合并提取液。后經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑，獲得總浸膏約800g，后以5 倍量水混懸，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每種極性溶劑萃取4 次，每次2L，得各萃取部位，經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯萃取部位活性較為顯著。

2.5 分離

具有活性的乙酸乙酯萃取部位(100g)，析出結(jié)晶，用乙醇重結(jié)晶，得到化合物1(2g)。其他母液再用95%乙醇溶解，與100g 100-200 目硅膠干法拌樣，水浴鍋干燥蒸干溶劑得干粉待用。取300-400 目硅膠1kg,石油醚浸潤(rùn)裝柱，測(cè)得柱體積約2.5L。將拌樣后的干粉于色譜柱中上樣，依次以石油醚:乙酸乙酯15:1- 0:1 梯度洗脫，后用甲醇洗脫，每個(gè)梯度洗脫3～5 個(gè)柱體積。洗脫后的流分經(jīng)薄層色譜點(diǎn)樣展開合并相同Rf值，得到A～D 組分。

A (3g),運(yùn)用開放型ODS 柱色譜法進(jìn)行分離，以30%～ 100%甲醇 梯度洗脫，每個(gè)梯度下沖5 個(gè)柱體積。洗脫后的餾分經(jīng)薄層色譜點(diǎn)樣展開合并相同Rf值，得到a-1～4。a-1(1.12g)出現(xiàn)白色粉末，用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到化合物2(50mg)。

B (6g)與a 一樣以開放型ODS 柱色譜法進(jìn)行分離，得到b-1～3. b-2(0.51g)運(yùn)用制備型高壓柱色譜進(jìn)行分離，以30%甲醇等度洗脫，得到化合物3(10mg)。

C (4g)與a 一樣以開放型ODS 柱色譜法進(jìn)行分離，得到c-1～5. C-2(1.24g)運(yùn)用制備型高壓柱色譜進(jìn)行分離，以50%甲醇等度洗脫，得到化合物4(50mg)。

D (4g)與a-樣以開放型ODS 柱色譜法進(jìn)行分離，得到d-1～5.d-2(0.82 g)以適量甲醇溶解，經(jīng)凝膠柱色譜分離，所得餾分經(jīng)薄層色譜點(diǎn)樣展開合并相 同Rf值，得到d-2-1～4. d-2-1(0.13g)、 d-2-3(0.2 2g)均經(jīng)制備型高壓柱色譜分離，均以30%甲醇等度洗脫，分別得到d-3(0.52g)、d-4(0.72g)分別經(jīng)制備型高壓柱色譜分離，分別以50%甲醇、40%甲醇 等度洗脫，分別得到化合物5(7mg)與6(6mg)。

3 結(jié)語(yǔ)

豨薟草用藥歷史悠久，常用于風(fēng)濕痹痛的治療，但也發(fā)現(xiàn)了一些新的藥理活性，如光抗老化性和多發(fā)性硬化癥等，這些藥理活性研究大多缺乏精確跟蹤，活性成分的作用機(jī)制也相對(duì)模糊，如果我們能進(jìn)一步討論具體的活性成分與已知活性化合物的構(gòu)效關(guān)系，可以在一定程度上促進(jìn)藥物靶向治療的發(fā)展，為新藥研發(fā)提供新思路。