馬 丹

(勃利縣市場監(jiān)督檢驗檢測中心，黑龍江 勃利 154500)

1 反向乳膠凝集法快速檢測豆瓣醬中肉毒毒素

1.1 目的要求

掌握反向乳膠凝集法快速檢測肉毒毒素的基本原理，掌握反向乳膠凝集實驗的具體操作過程，熟悉乳膠致敏的有效方法，判斷乳膠凝集法的結(jié)果，了解試劑的配制方式方法。

1.2 原理方法

把肉毒毒素抗體預(yù)先吸附在乳膠顆粒上，與食品中的肉毒毒素作用產(chǎn)生凝集。把無活性乳膠顆粒(如聚苯乙烯乳膠)作載體，把抗原成分包被其表面，形成大顆粒型試劑，與相對應(yīng)的抗體結(jié)合而產(chǎn)生間接凝集反應(yīng)。

1.3 器材

V型微孔板、酶標(biāo)儀、振蕩器、離心機等。

1.4 試劑

(1)封閉液標(biāo)準(zhǔn)BSA。

(2)磷酸緩沖液0.05 mol/L pH7.2的磷酸鹽緩沖溶液。

(3)致敏乳膠。選取直徑為0.8 μm的聚苯乙烯，用磷酸緩沖液(PBS)稀釋20倍，37℃水浴30 min，離心去上清液，PBS清洗1次再用封閉液洗1次，之后溶于適量PBS中。

1.5 操作步驟

(1)樣品處理。稱取豆瓣醬約2 g，加5 mL生理鹽水振蕩10 min，使內(nèi)容物充分浸出，沉降或離心后取上清液吸取上清液5 mL，一式兩份，分別加入抗A型肉毒毒素400 μg/mL、抗B型肉毒毒素500 μg/mL各2 mL，再加入10 mL無菌生理鹽水，攪勻液供檢測用。

(2)測定。選用10孔微孔板，每孔加被檢標(biāo)本25 μL、致敏乳膠25 μL，混勻后放入封閉濕潤的玻璃圓盤中。在室溫環(huán)境下放置，每隔10 min、20 min、30 min觀察1次，放置4 h復(fù)核1次，判定結(jié)果。同時設(shè)陽性和陰性對照。

1.6 結(jié)果判定

(1)全部乳膠凝集，成絮狀團塊，液體清亮，表示肉毒毒素檢出，呈超強陽性。乳膠凝集成較小的顆粒，液體清亮，表示肉毒毒素檢出，呈強陽性。

(2)半量乳膠凝集成細(xì)小顆粒，液體混濁，表示肉毒毒素檢出，呈陽性。

(3)較少量的乳膠凝集成可見的細(xì)顆粒，液體混濁，表示肉毒毒素檢出，呈弱陽性。

(4)全部乳膠仍為均勻液體，無顆粒，表示肉毒毒素未檢出，呈陰性。

2 食品中重金屬鉛的現(xiàn)場快速檢測

食品中重金屬現(xiàn)場快速檢測是保證重大活動運行及日常飲食安全的重要手段，通常作為實驗室檢測的現(xiàn)場快速初篩。由于其檢測方法、檢測技術(shù)及檢測設(shè)備的特殊性，一般只能做到定性或半定量。

2.1 水質(zhì)檢鉛試劑盒

(1)適用：用于水中鉛含量的定性或半定量檢測。

(2)儀器與試劑：5 mL注射器、吸附管(硬質(zhì)塑料管)、鉛試劑管、巰基棉、洗脫液(0.01 mol鹽酸)、比色板。

(3)操作步驟：①將0.1 g巰基棉塞入吸附管內(nèi)，切勿過緊，取5 mL注射器與吸附管粗頭一端連接，吸取水樣5 mL后棄去水液，重復(fù)10次(合計50 mL水樣)。②取試劑管一支，用鑷子將毛細(xì)管捏碎。③將注射器與吸附管細(xì)頭相接，取洗脫液2 mL，倒轉(zhuǎn)吸附管，將洗脫液1.5 mL注入試劑管，搖勻后與標(biāo)準(zhǔn)色板比色定量。

(4)注意事項：①國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定生活飲用水中鉛含量不得大于0.01 mg/L。②本方法為現(xiàn)場快速檢測方法(檢出限為0.05 mg/L)，是一種半定量檢測方法。③對有機鉛測定時需按常規(guī)實驗室方法進行消解。④試劑盒放在陰涼干燥處保存，有效期24個月。

2.2 食品中重金屬鉛檢測試劑盒

(1)適用：用于白糖、皮蛋及果蔬中鉛含量的檢測。

(2)檢測原理：樣品經(jīng)處理后鉛與反應(yīng)試劑顯色，與空白對照管比較，不得更深。

(3)操作步驟：①樣品處理。a、白糖樣品。準(zhǔn)確稱取約2.5 g置于取樣杯中，加入蒸餾水或純凈水10 mL，再加入1滴指示劑A，攪拌溶解，待測。b、蔬菜、水果樣品。稱取適量樣品，用剪刀剪碎，從中準(zhǔn)確稱取約2.5 g置于取樣杯中，加入蒸餾水或純凈水10 mL，再加入1滴指示劑A浸泡10 min，待測。c、皮蛋樣品。取適量剝殼皮蛋蛋白部分，用剪刀稍剪碎，從中準(zhǔn)確稱取約2.5 g置于取樣杯中，加入蒸餾水或純凈水10 mL，再加入l滴指示劑A浸泡10 min，待測。②測定。取待測液1 mL于1.5 mL離心管中，依次加3滴指示劑B、1滴指示劑C、1滴指示劑D，搖勻后放置3 min，觀察顏色變化，并用純凈水做空白對照管。

(4)結(jié)果判定：比較樣品與空白對照管顯色結(jié)果。與空白對照管比較明顯深，呈橙紅色或紅色，即說明樣品中鉛含量超過國家限量標(biāo)準(zhǔn)。若樣品與空白對照管顏色一樣或接近，呈黃色，則說明樣品中鉛未檢出。

(5)注意事項：①檢測為陽性的樣品需送實驗室用標(biāo)準(zhǔn)方法加以確認(rèn)。②檢測過程中，依次加入指示劑B、指示劑C、指示劑D，每加一種試劑應(yīng)搖勻后再加下一種。③測試用水。要求稀釋用水，建議采用蒸餾水或純凈水，不得用自來水或礦泉水。④用過的離心管清洗干凈后，可重復(fù)使用。⑤檢測下限：0.2 mg/kg。⑥試劑盒置通風(fēng)干燥室溫環(huán)境中保存，保質(zhì)期6個月。

2.3 水中重金屬鉛的快速檢測試劑盒

(1)適用范圍：用于水中鉛(主要為游離鉛)含量的定性或半定量檢測。

(2)檢測原理：樣品經(jīng)處理后鉛與反應(yīng)試劑顯色，觀察氯仿層呈色情況。如果仍為綠色、淡綠色或無色則表示鉛陰性。

(3)操作步驟：①樣品處理。取粉碎的食物樣品10 g加濃硫酸20 mL浸泡振搖數(shù)分鐘，過濾浸液供檢。②測定。取樣品浸泡液或消化液2 mL于5 mL比色管中，用堿調(diào)pH值至中性，加B0.02 g(4號勺一勺)，C0.04 g(4號勺二勺)，D0.04 g(4號勺一勺)，溶解后加試劑A約200 mg(1號勺一平勺)，再加雙硫腙氯仿液1 mL(10～20 μg/mL為宜，臨時配成，溶液呈淺綠色為宜)，振搖50次，觀察氯仿層呈色情況。

(4)結(jié)果判定：上述反應(yīng)的氯仿層由綠色變?yōu)樽霞t色，表示鉛有1 μg左右；若變紅色，表示為Pb≥2 μg；如果仍為綠色、淡綠色或無色，則表示鉛陰性。

(5)注意事項：①本法檢測下限：0.5 mg/kg。規(guī)格50次/盒。本法用試劑應(yīng)選高純度的，否則會影響結(jié)果。②臨時配制雙硫腙氯仿液時，以每毫升氯仿含雙硫腙10～20 μg為宜，溶液呈淺綠色、深綠色者再稀釋。③鉛限量的國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(mg/kg)：全脂乳粉≤0.5；醬、醬油、醋等≤l；皮蛋≤3。根據(jù)不同食品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，樣品測定液可按需調(diào)整用量。在測定醬、醬油、醋時，測定取樣量為2 mL，測定全脂乳粉取4 g，測定皮蛋取0.7 mL，若反應(yīng)呈色為無色或淡綠色、綠色時，結(jié)果均為陰性。