梁倩 李春燕 單正威 秦趙曦 胡勇 劉蔚漪

摘要：為篩選對煙蚜具有顯著殺蟲活性的植物資源，采用浸漬法測定了20種植物粗提物對煙蚜的室內(nèi)毒力活性。結(jié)果表明，濃度為48.83mgL時，節(jié)節(jié)草（Equisetum ramosissimum，）、禿瘡花（Dicranostigma leptopodum）和臭（Ailanthusaltissima）粗提物24h校正死亡率均在50%以上，分別為53.3396，56.67%，74.67%，臭椿粗提物對煙蚜的校正死亡率最高。比較20種植物粗提物處理煙蚜的Co值，臭樁、禿瘡花、節(jié)節(jié)草和曼陀羅（Datura str'amoniumn）殺蟲活性較強，LCso值依次為26.618，29.179，41.484和87.741mgL，均小于100mgL，臭樁粗提物的殺蟲活性最強。研究結(jié)果為煙蚜的生物防治以及植物源的科學(xué)利用提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：植物粗提物臭樁;篩選;煙蚜

煙蚜（Myzus persicae Sulzer）俗稱蜜蟲、膩蟲等，屬同翅目（homoptera），蚜科（Aphididae）瘤蚜屬（Mzs），是世界性分布的害蟲，危害包括煙草在內(nèi)的400多種植物，也是煙草的主要害蟲，我國各煙區(qū)均有發(fā)生，。煙蚜以其口針刺吸煙葉汁液，導(dǎo)致煙葉產(chǎn)量降低，品質(zhì)變差，化學(xué)成分發(fā)生變化。另外，煙蚜分泌的蜜露可誘發(fā)煤污病，使煙葉表面變黑、葉柄發(fā)脆、腐爛。除直接為害煙草外，煙蚜還傳播多種煙草病毒，如黃瓜花葉病毒（CMV）、煙草花葉病毒、馬鈴薯Y病毒（PVY）、煙草蝕紋病毒（TEV）等。

長期以來，我國防治煙蚜主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，如吡蟲啉、啶蟲脒和抗蚜威等，導(dǎo)致煙蚜敏感性降低，造成蟲害頻繁發(fā)生和大爆發(fā)，煙農(nóng)不得不加大農(nóng)藥用量，導(dǎo)致農(nóng)藥殘留，對非靶標有益生物構(gòu)成威脅，殺死害蟲天敵，造成環(huán)境污染，削弱生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。煙葉生產(chǎn)過程中積極推廣煙蚜的綠色防控技術(shù)，如用防蟲網(wǎng)覆蓋大棚育苗、打頂抹、間作套種以及選育抗蚜品種的農(nóng)業(yè)防治技術(shù)，運用黃色誘蚜、銀灰色和白色驅(qū)蚜、高壓靜電滅蚜的物理防治技術(shù)，利用煙蚜繭蜂、瓢蟲食蚜癭蚊、南方小花蝽等捕食性天敵的生物防治技術(shù)，利用苦參堿、魚藤酮、苦皮藤素等植物源農(nóng)藥的防治技術(shù)，利用綠僵菌叫、金色毛売菌、漸狹蠟蚧菌、少根根霉菌和蠟蚧輪枝菌等的微生物防治技術(shù)，利用蚜蟲報警信息素來驅(qū)避蚜蟲等，均對煙蚜的控制取得了較好的效果。植物源殺蟲劑作用機理獨特，結(jié)構(gòu)新穎，活性多樣，對昆蟲常表現(xiàn)出毒殺、麻醉、引誘、忌避、干擾昆蟲正常行為和生長發(fā)育等活性，所含的殺蟲活性物質(zhì)較為復(fù)雜，對有害生物高效，保護害蟲天敵，對人畜及非靶標生物安全，易分解，害蟲不易產(chǎn)生抗性，成為當前創(chuàng)新型農(nóng)藥研制的熱點已報道的具有殺蟲活性的植物有2400多種。20世紀30年代，我國就對煙草、魚藤、巴豆、百部等植物進行了廣泛的研究，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)楝科、衛(wèi)矛科、柏科、瑞香科、豆科、菊科等多種植物具有殺蟲活性，已有煙堿、苦參堿、印素、茴蒿素和茶皂素等40余種植物源農(nóng)藥登記注冊。不同植物的毒性差異較大，并且特定植物對特定害蟲具有特異的作用效果2。為了開發(fā)更多的植物源農(nóng)藥，以煙蚜為靶標，本研究從《中國土農(nóng)藥志》、《中國有毒植物》及《西雙版納有毒植物圖鑒》中選取20種殺蟲植物，對其粗提物進行室內(nèi)毒力活性試，篩選對煙蚜具有良好殺蟲活性的植物資源，為煙蚜的生物防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料

1.1.1供試植物樣品供試植物樣品采于2019年67月，經(jīng)西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院藥用植物教研室胡勇副教授鑒定，供試植物樣品的名稱、拉丁名、采集地和采集部位見表1，采集的樣品陰干粉碎備用。

1.1.2供試煙蚜由云南省綠葉生防有限公司提供，飼養(yǎng)在西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院智能溫室大棚的煙苗上，選擇個體一致的無翅成蚜作為試蟲。

1.2試驗方法和條件

植物粗提物的制備20種植物樣品陰干、粉碎，用95%乙醇溶液常溫超聲提取3次，每次30min減壓濃縮得到浸膏。

1.2.2供試溶液的配制分別精確稱取一定量的浸膏于50mL的燒杯中，先用少量乙醇溶解，再用0.5%6的吐溫80配成50gL的母液。用0.5%的吐溫80水溶液作陰性對照，除蟲菊酯作陽性對照。

1.2.3室內(nèi)毒力測定采用浸漬法2，略有改動測定20種植物粗提物對煙蚜的殺蟲活性。通過預(yù)試驗確定每種植物粗提物的測試濃度范圍，然后對每種粗提物設(shè)5個濃度，每個濃度重復(fù)6次。選取帶有蚜蟲的新鮮煙葉，剔除有翅蚜和小若蚜，保留無翅成蚜10頭，將帶蚜葉片浸入配置好的不同濃度的溶液中5s，取出吸取多余藥液2，將葉片放入9cm培養(yǎng)皿中，用保鮮膜封口，針刺小孔，置于人工氣候培養(yǎng)箱，溫度（25±1）℃，相對濕度（65±5）%，光周期L：D=16h：8h，24h后檢查煙蚜存活情況。用毛筆輕觸蚜蟲蟲體無反應(yīng)時，即為死亡。校正死亡率采用Abbott校正公式計算，使用范圍為對照組的死亡率《20%。

死亡率（%）=死亡蟲數(shù)

處理總蟲數(shù)×100校正死亡率（%）=（處理組死亡率-對照死亡率）/（1-對照組死亡率）×100

1.2.4數(shù)據(jù)處理采用SPSS23.0軟件進行單因素

Anova檢驗分析，計算20種植物粗提物的半數(shù)致死濃度LC、LCso值的95%置信區(qū)間及毒力回歸方程。采用卡方值（）檢驗毒力回歸方程的適合性。

2結(jié)果

2.120種植物粗提物對煙蚜的觸殺活性

由表2可以看出，不同植物粗提物對煙蚜均有不同程度的觸殺活性，煙蚜校正死亡率隨著濃度的升高而增大。當濃度為390.63mgL時，禿瘡花、蒺藜、曼陀羅和杺果粗提物處理煙蚜的24h校正死亡率均在50%以上，分別為64.009%、60.67%6、67.67%和64.33%，曼陀羅粗提物處理煙蚜的校正死亡率最高。當濃度為195.31mgL時，禿瘡花、石楠、節(jié)節(jié)草、蒺藜、曼陀羅、臭樁和杺果粗提物處理煙蚜的24h校正死亡率均在50%以上，分別為60.67%、58.67%、67.67%、53.33%、64.009%、85.33%、53.33%臭樁粗提物的最高。濃度為48.83mgL時，禿瘡花、節(jié)節(jié)草和臭椿粗提物處理煙蚜24h校正死亡率均在50%以上，分別為56.67%，53.33%6，74.67%臭樁粗提物的最高。

陰性對照0.5%吐溫80水溶液處理煙蚜24h校正死亡率為7%，陽性對照除蟲菊酯4mgL時，煙蚜24h校正死亡率為90%。

2.220種植物粗提物對煙蚜的觸殺毒力

根據(jù)表2的試驗數(shù)據(jù)計算各粗提物的Cso值、LCso值的95%置信區(qū)間，擬合毒力回歸方程，數(shù)據(jù)見表3。從表3可以看出，20種植物粗提物對煙蚜均有一定程度的觸殺活性，其中臭樁24h的觸殺活性最強，LCo值為26.6l8mgL，小于其他19種植物粗提物;禿瘡花、節(jié)節(jié)草和曼陀羅的觸殺活性次之，24h的IC值分別為29.179、41.484、87.741mgL杺果、石楠、蒺藜、樟、密蒙花、長春花、杠板歸、南天竹和大蝎子草的LCs值介于100～-1000mgL枇杷24h的觸殺活性最低，LCso值為2167433mgL。

3討論

煙草是我國重要經(jīng)濟作物之。煙蚜為害在煙草整個生長期均有發(fā)生，且煙蚜具有繁殖速度快，繁殖率高等特點，成為制約煙草產(chǎn)量和質(zhì)量的重要因素。為了尋找對煙蚜殺蟲活性較好的植物源農(nóng)藥，本文研究了20種植物粗提物對煙蚜的觸殺活性。結(jié)果表明，每種植物粗提物均有不同程度的觸殺活性，臭樁粗提物觸殺活性最強，LCo值為26618mgLe王德艷等報道了6種入侵植物（美洲商陸、白車軸草、紅花月見草、三葉鬼針草、飛機草、紫莖澤蘭）提取物對煙蚜的殺蟲活性，白車軸草24h的觸殺毒力最強，ICo值為11460mgL，美洲商陸48h的觸殺毒力最強，LCso值為4110mgL;王芳等2報道了10種植物粗提物（苦豆子、牛心樸子、伏毛鐵棒錘、狼毒、披針葉黃華、乳漿大戟、翠雀、匍根駱駝蓬、淡味獐牙菜、地榆）對枸杞主要害蟲的殺蟲活性，披針葉黃華24h對枸杞蚜蟲觸殺毒力最強，LCso值為258.90mgL;陳海珊等2報道了植物提取物（醉魚草、石蒜、白花曼陀羅、馬桑、博落回、青蒿和巴豆）對蘿卜蚜的室內(nèi)毒力研究，醉魚草24h的觸殺毒力最強，ICo值為157.73mgL趙千等報道了氧化樂果對麥蚜的LCs值為206.39mgL從以上數(shù)據(jù)可以看出，臭樁葉子對煙蚜的殺蟲活性，均優(yōu)于以上植物粗提物，具有顯著的殺蟲活性，甚至優(yōu)于農(nóng)藥氧化樂果。臭樁還對光肩星天牛2、菜青蟲2、米象28、銹赤扁谷盜2、大豆包囊線蟲有較好的毒殺作用。室內(nèi)毒力測定可以避免田間外界環(huán)境因素的影響，在一定程度上可以指導(dǎo)田間用藥。一般而言，室內(nèi)毒力越高的藥劑，在田間的防治效果越好，可以用來推斷田間藥劑的使用劑量，減少藥劑浪費和環(huán)境污染?；瘜W(xué)農(nóng)藥長期大量的使用，導(dǎo)致煙蚜的抗性增加，對煙蚜的防治應(yīng)輪換使用不同種類的生物殺蟲劑進行綜合防治，減小抗性選擇壓力，延緩抗性產(chǎn)生。

臭樁與其他19種植物相比，對煙蚜的控制效果最好。臭椿因樹皮及枝葉具有苦澀的味道，葉子基部腺點發(fā)出特殊的臭味而得名。臭樁在我國分布廣泛，生長迅速，耐干旱、貧瘠，適應(yīng)性強、容易繁殖、病蟲害少3，為臭椿作為殺煙蚜植物資源的開發(fā)利用提供了便利。臭中含有萜類、生物堿、木脂素、黃酮及揮發(fā)油類化合物。其中苦木素是苦木科植物的特征化學(xué)成分，是臭椿屬的主要活性成分，為高度氧化的降三萜類化合物343，有C-20，C-19，C-22，C-25化學(xué)骨架。大多數(shù)的苦木素類化合物是具有20個碳骨架的苦木烷，以四環(huán)三萜和五環(huán)三萜最為常見。因其具有抗癌、細胞毒性、抗瘧、抗炎、抗病毒、除草、化感、殺蟲等廣泛的生物活性而備受關(guān)注。臭樁對煙蚜的殺蟲活性成分可能是其所含的苦木素類物質(zhì)。今后的研究應(yīng)以煙蚜為靶標，運用活性跟蹤的方法研究臭提取物殺蟲的活性部位、活性組分、活性成分、殺蟲機理及對煙蚜天敵的影響，為臭樁植物資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

4結(jié)論

本試驗測定了20種植物粗提物對煙蚜的室內(nèi)毒力活性，結(jié)果表明，每種植物粗提物對煙蚜均有不同程度的觸殺活性，其中臭、禿瘡花、節(jié)節(jié)草和曼陀羅殺蟲活性較強。下一步的研究工作需要采用靶標追蹤的方法對臭等強殺蟲植物中的殺煙蚜活性成分進行分離鑒定并確定殺煙蚜機理，本研究為殺煙蚜植物源農(nóng)藥的創(chuàng)制提供了理論基礎(chǔ)。

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