血清和全血平板凝集方法檢測雞白痢抗體的差異比較

劉洋，潘海萍，陳輪鋒，嚴麗端，嚴專強，王占新，魯俊鵬

（1.溫氏食品集團股份有限公司，廣東 新興 527439；2.廣東溫氏南方家禽育種有限公司，廣東 新興 527439）

雞白痢沙門菌可引起雛雞大批量死亡， 產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋率下降，成年雞多呈隱性感染，可長期帶毒和排毒。雞白痢沙門氏菌為細胞內(nèi)寄生菌，利用藥物治療只能臨床治愈而不能根除， 且藥物預(yù)防和治療容易產(chǎn)生耐藥性， 給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失[1]，被中國農(nóng)業(yè)部列為二類動物疫病?！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020）》中明確要求到2020 年全國所有種雞場沙門氏菌病達到凈化標準。 平板凝集試驗以其方便、快速、實用等特點成為國內(nèi)外雞白痢抗體檢測最常用的診斷方法之一，檢測對象主要包括全血、血清等。 目前我國大部分養(yǎng)殖場都采用平板凝集的方法開展雞白痢沙門氏菌的凈化工作。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 雞白痢-雞傷寒多價染色抗原、雞白痢-雞傷寒陽性血清和陰性血清均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 試驗方法 將中海的凝集抗原在室溫回溫30min，采集100 只（大部分為即將淘汰的陽性雞）20 周齡的竹絲雞進行平板凝集試驗測定雞白痢抗體，每份樣品均按照4 種不同方法進行檢測，比較各檢測方法檢測結(jié)果的差異， 具體操作按照試劑說明書進行，見表1。 結(jié)果判定以陰、陽性對照血清成立時，在2min 內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見的75%的片狀明顯凝集顆粒判為強陽，50%凝集顆粒判為弱陽，25%小凝集顆粒則判為疑似。

表1 樣品的不同檢測方法

2 結(jié)果與分析

2.1 不同檢測方法的陽性率 全血平板凝集試驗中， 將全血與中?？乖謩e按照1:1、2:1、3:1 混合進行反應(yīng)，血清平板凝集試驗則按照血清與抗原1:1 反應(yīng)，試驗的操作與結(jié)果判斷均按說明書進行。檢測結(jié)果見表2 所示。

表2 全血和血清平板凝集檢測結(jié)果

從表2 可知，血清平板凝集陽性率為81%，全血與抗原2:1 和3:1 陽性率均為79%，全血與抗原1:1 陽性率最低，僅71%。因此，采用血清平板凝集檢測雞白痢抗體，陽性率最高，陰性率最低。

2.2 組間檢測結(jié)果的比較分析 在所有的全血平板凝集試驗中 （1:1、2:1、3:1）， 全血與抗原2:1和3:1 檢出率高于1:1， 且全血與抗原2:1 和3:1檢出的陽性樣品包括全血和抗原1:1 檢出的所有陽性樣品。全血和抗原按照2:1 和3:1 檢測結(jié)果相差不大，僅4 份樣品檢測結(jié)果具有差異，全血和抗原2:1 檢出為強陽， 全血和抗原3:1 檢出為弱陽。全血與抗原1:1 檢出的有17 份弱陽性和8 份疑似陽性樣品， 采用2:1 則分別檢出為強陽性和弱陽性。因此，在全血平板凝集實驗中，全血與抗原2:1檢測效果優(yōu)于3:1 和1:1。

全血與血清平板凝集對比試驗中， 全血和抗原2:1 與血清平板凝集陽性符合率最高，達97.53%。所有陽性樣品中，僅2 份樣品檢測結(jié)果具有差異，即血清平板凝集檢測為弱陽，而全血與抗原2:1 凝集試驗檢測為可疑。

3 討論

目前，在雞白痢抗體檢測方法中，微量凝集試驗、ELISA 和平板凝集試驗等方法較常見。 微量凝集試驗則采用96 孔板進行，容易判斷結(jié)果，但操作較繁瑣，持續(xù)時間長（37℃，18～24h）[2]。 ELISA 適用于實驗室大批量檢測，檢測靈敏度高，但目前國內(nèi)商品化的ELISA 試劑盒大部分都是針對D 群沙門氏菌， 可檢出雞白痢沙門氏菌、 禽傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌等產(chǎn)生的抗體[3]，檢出率高于實際雞白痢陽性率。平板凝集試驗存在易于操作、反應(yīng)時間短、成本低的優(yōu)勢，但通過肉眼是否出現(xiàn)凝集顆粒對讀取結(jié)果的工作人員要求高， 是目前最常用檢測雞白痢抗體的方法。

平板凝集主要包括全血平板凝集和血清平板凝集兩種， 其中全血平板凝集的優(yōu)點在于反應(yīng)速度快、耗時短、操作簡便、適合在現(xiàn)場進行大批量的檢測等優(yōu)點， 在生產(chǎn)實踐中多被采用[4]；但是該方法檢測結(jié)果容易受肉雞舍環(huán)境溫濕度、 粉塵等干擾，且室溫過高容易造成全血凝固的現(xiàn)象；血清平板凝集可在實驗室進行， 可保證實驗室的檢測環(huán)境符合要求，但工作量增加，耗時長，不能當場檢測出結(jié)果并淘汰陽性雞。

本研究通過對比不同比例全血和抗原平板凝集與血清平板凝集試驗， 發(fā)現(xiàn)血清平板凝集檢測方法陽性檢出率高于全血平板凝集， 且包括全血平板凝集所有的陽性樣品， 這與蔣維維等的報道一致[5,6]。 在全血平板凝集中以全血與抗原2:1 混合的檢測效果最佳。 因此， 雞場進行雞白痢凈化時，建議首選血清平板凝集的方法進行檢測，有利于推進凈化歷程。 對于無法大規(guī)模推廣血清平板凝集的種雞場， 在保證雞舍環(huán)境符合檢測要求的前提下，可考慮采用全血與抗原2:1 的的方法。

雞白痢的防控和凈化是一項長期而系統(tǒng)的工程，不僅需要更精確的檢測方法來淘汰陽性雞，更重要的應(yīng)是以生物安全措施為重點，落實“鼠不進舍、料不見天、糞不落地、精準消毒、精準檢測”等生物安全等細節(jié)措施[7]，做好雞群各個階段的飼養(yǎng)管理、公母雞分開飼養(yǎng)、加強衛(wèi)生措施等環(huán)節(jié)，切斷水平傳播與垂直傳播等環(huán)節(jié)，消除病雞、帶菌雞和隱性感染雞， 避免帶菌公雞的精液傳染給母雞的人工授精途徑[8]，逐步實現(xiàn)雞白痢的凈化。