徐春志，鄧珊珊，藺俐仲，張 海，袁 林，景書(shū)灝，楊 峰，袁翠霞，陳 紅，楊 源，劉 艷

（1.貴陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽(yáng) 550081；2.貴陽(yáng)市清鎮(zhèn)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽(yáng) 551400；3.貴陽(yáng)市草地站，貴州 貴陽(yáng) 550081；4.貴陽(yáng)市息烽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽(yáng) 550300）

豬偽狂犬?。≒seudorabies,PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的多種家畜和野生動(dòng)物以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為主要癥狀的一種急性傳染病[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為B類(lèi)傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將其列為二類(lèi)動(dòng)物傳染病。豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus,PCV）在分類(lèi)學(xué)上屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，為已知的最小的動(dòng)物病毒之一，豬圓環(huán)病毒有PCV1、PCV2和PCV3 3個(gè)血清型，PCV1對(duì)豬的致病性較低，偶爾可使懷孕母豬的胎兒感染，造成母豬繁殖障礙[2]。PCV2是引起豬皮炎與腎病綜合征、豬呼吸道病綜合征、豬繁殖障礙等疾病的主要病原，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將豬圓環(huán)病毒病列為二類(lèi)動(dòng)物傳染病。豬偽狂犬病病毒和豬圓環(huán)病毒2型均可以感染不同日齡的豬，一年四季均可發(fā)病，對(duì)妊娠母豬、仔豬等易感，成年豬常常呈隱性感染，均可引起懷孕母豬流產(chǎn)、死胎、產(chǎn)木乃伊胎等，感染仔豬的死亡率較高。這兩種病在世界范圍內(nèi)均廣泛流行，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展造成嚴(yán)重危害。

PRV于1947年在我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)，隨后便在全國(guó)范圍內(nèi)廣泛流行。我國(guó)于20世紀(jì)90年代開(kāi)始推廣應(yīng)用PRV gE基因缺失弱毒疫苗免疫接種，在之后的一段時(shí)間內(nèi)PR的發(fā)生與流行得到了一定控制，但自2011年底以來(lái)，我國(guó)豬場(chǎng)包括PR疫苗免疫合格豬場(chǎng)陸續(xù)發(fā)生PRV變異株的感染[3]。由于PRV變異株的出現(xiàn)，導(dǎo)致目前PRV在我國(guó)各地區(qū)仍然存在不同程度的流行。PCV于1974年首次在豬腎上皮細(xì)胞系中被發(fā)現(xiàn)。1998年，Meehan等[4]首次將PCV分為PCV1和PCV2，隨后在世界各地相繼報(bào)道該病，2016年又發(fā)現(xiàn)了PCV3。我國(guó)于2000年在豬群中首次發(fā)現(xiàn)PCV2，此后PCV2在全國(guó)各地養(yǎng)殖場(chǎng)不斷被報(bào)道，尤其是近幾年P(guān)CV2的流行給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)PCV2的治療目前尚無(wú)特效治療藥物，PCV2的防控主要是采取疫苗免疫注射預(yù)防，但是由于不同地區(qū)毒株的變異較大，導(dǎo)致疫苗免疫效果不佳。

本試驗(yàn)通過(guò)采用熒光定量PCR方法對(duì)貴陽(yáng)地區(qū)6個(gè)區(qū)（市/縣）2018年采集的154份組織病料樣本進(jìn)行PRV和PCV2核酸檢測(cè)，旨在了解PRV和PCV2在貴陽(yáng)地區(qū)的流行情況，以期為今后貴陽(yáng)市規(guī)?；i場(chǎng)PRV和PCV2防控策略的制定提供參考依據(jù)，以降低偽狂犬病和圓環(huán)病毒病的發(fā)病率，提高養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 病料

2018年1—12月從貴陽(yáng)地區(qū)不同規(guī)模化豬場(chǎng)無(wú)菌采集疑似病料（頜下淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、流產(chǎn)胎兒等），保存于-70℃超低溫冰箱。共采集貴陽(yáng)地區(qū)6個(gè)區(qū)（市/縣）30個(gè)豬場(chǎng)154份病料。

1.2 檢測(cè)試劑盒

豬偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測(cè)試劑盒、核酸提取試劑盒均購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測(cè)方法

檢測(cè)方法和結(jié)果判定嚴(yán)格按照PRV和PCV2熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 檢測(cè)結(jié)果

從貴陽(yáng)市6個(gè)區(qū)（市/縣）的30個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)共采集154份病料組織，采用熒光定量PCR進(jìn)行PRV和PCV2核酸檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。檢測(cè)結(jié)果顯示，PRV核酸陽(yáng)性病料16份，陽(yáng)性率為10.39%（16/154）；PCV2核酸陽(yáng)性病料29份，陽(yáng)性率為18.83%（29/154）；PRV和PCV2混合感染的陽(yáng)性病料8份，陽(yáng)性率為5.19%（8/154）。其中PRV核酸陽(yáng)性率最高的是息烽縣（20.00%），其次是開(kāi)陽(yáng)縣（13.16%）、清鎮(zhèn)市（9.68%）、修文縣（7.27%），花溪區(qū)和白云區(qū)均未檢測(cè)出PRV；PCV2核酸陽(yáng)性率最高的是開(kāi)陽(yáng)縣（26.32%），其次息烽縣、花溪區(qū)和白云區(qū)均為（20.00%）、清鎮(zhèn)市（16.13%）、修文縣（14.55%）；清鎮(zhèn)市、開(kāi)陽(yáng)和修文縣檢測(cè)出PRV和PCV2混合感染的病料。

表1 疑似病料PRV和PCV2檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)貴陽(yáng)地區(qū)6個(gè)區(qū)（市/縣）30個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行了PRV和PCV2感染情況調(diào)查，結(jié)果表明：2018年貴陽(yáng)市被調(diào)查的規(guī)?；i場(chǎng)PRV的核酸檢出率為10.39%（16/154），PCV2的核酸檢出率為18.83%（29/154），PCV2的核酸檢出率明顯高于PRV的核酸檢出率。說(shuō)明PRV和PCV2仍然是危害貴陽(yáng)市養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的動(dòng)物傳染病之一，且規(guī)?；i場(chǎng)PCV2感染率高于PRV。

我國(guó)2011年前PRV感染率普遍在20%以下，在2011—2013年P(guān)RV的感染率呈階梯式上升，2014—2016年P(guān)RV野毒感染率已居高不下，上海2013—2015年的感染率高達(dá)60.6%，新疆2014—2015年的感染率高達(dá)68.23%，2015年河北、河南、遼寧、山東、陜西等5省的感染率高達(dá)51.88%[5]。張文通等[6]對(duì)2012—2014年間收集的魯北地區(qū)380份病料組織進(jìn)行了病原學(xué)調(diào)查，PRV總體陽(yáng)性率為20.26%，其中散養(yǎng)戶(hù)、小型養(yǎng)豬場(chǎng)、中型養(yǎng)豬場(chǎng)和大型養(yǎng)豬場(chǎng)的PRV陽(yáng)性率分別為10.50%、30.00%、15.10%和5.40%。蘇琳琳等[7]2016—2017年對(duì)云南省9個(gè)地區(qū)收集的54個(gè)豬場(chǎng)的381份疑似病料進(jìn)行PRV病原核酸檢測(cè)，結(jié)果顯示PRV平均陽(yáng)性率為23.1%，其中母豬、保育豬和肥育豬陽(yáng)性率分別為28.8%、23.4%和20.4%，公豬精液為25.0%，流產(chǎn)胎兒和仔豬為22.3%。任衍倍等[8]對(duì)在新疆14個(gè)地區(qū)采集的430份豬病料進(jìn)行PCV2檢測(cè)，檢出率為4.88%。宋玉慧[9]對(duì)2014—2015年在河南省18個(gè)地區(qū)采集的146份臨床疑似樣本進(jìn)行PCV2病原核酸檢測(cè)，PCV2的核酸陽(yáng)性率為28.08%。李海全等[10]于2015—2017年間在四川省7個(gè)市縣地區(qū)14個(gè)豬場(chǎng)共采集疑似病料、精液、血樣等樣品181份，進(jìn)行PCV2核酸檢測(cè)，陽(yáng)性率為49.2%。曹啟明[11]于2015—2016年間在江蘇部分地區(qū)共采集575份病死豬淋巴結(jié)組織進(jìn)行PCV2核酸檢測(cè)，檢測(cè)出287份病料為PCV2陽(yáng)性，陽(yáng)性率為49.91%。以上數(shù)據(jù)表明，PRV和PCV2全國(guó)各地均存在很大程度的感染，部分區(qū)域的養(yǎng)殖場(chǎng)感染率達(dá)到了50%以上，且一些養(yǎng)殖場(chǎng)還存在一定程度PRV和PCV2混合感染的情況，嚴(yán)重影響豬場(chǎng)豬群健康生長(zhǎng)。

近年來(lái)，貴陽(yáng)市為發(fā)展生態(tài)畜牧業(yè)大力推行“公司+農(nóng)戶(hù)”的生豬養(yǎng)殖模式，該模式在一定程度上緩解了大型養(yǎng)殖場(chǎng)所不能避免的環(huán)保問(wèn)題，使生豬養(yǎng)殖在環(huán)保高壓態(tài)勢(shì)下繼續(xù)蓬勃發(fā)展，雖然養(yǎng)豬戶(hù)有大型養(yǎng)殖公司專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員的指導(dǎo)，但是由于養(yǎng)殖戶(hù)本身專(zhuān)業(yè)知識(shí)欠缺，養(yǎng)殖技術(shù)有限，使得在養(yǎng)殖過(guò)程中PRV和PCV2在部分養(yǎng)殖戶(hù)存在嚴(yán)重感染情況；又因豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病沒(méi)有被國(guó)家列為強(qiáng)制免疫病種，大多養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）不重視豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病的疫苗免疫工作或免疫效果不好，導(dǎo)致疫病散發(fā)、多發(fā)。建議針對(duì)豬偽狂犬病和豬圓環(huán)病毒病的防控，養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）應(yīng)選擇與本地區(qū)流行的毒株核酸同源性較高的疫苗進(jìn)行免疫，疫苗免疫后要重視免疫效果監(jiān)測(cè)，對(duì)免疫不合格的要及時(shí)補(bǔ)免，同時(shí)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）還應(yīng)重視豬場(chǎng)生物安全防護(hù)措施，制定嚴(yán)格的生物安全規(guī)程并落實(shí)到位，大型養(yǎng)豬場(chǎng)可以根據(jù)自身情況開(kāi)展動(dòng)物疫病凈化工作。