徐 杰，趙亞楠，喬桂芳，劉桂海，孫煥芹，孫堅(jiān)萍，代艷超，張永宏

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 生物醫(yī)學(xué)信息中心,北京100069)

在世界范圍內(nèi)，約有7100萬人感染丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)，而慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)也是引起肝硬化和肝癌的主要原因之一，每年約有399000人死于丙肝相關(guān)肝臟疾病，在HCV感染急性階段約有15%-45%感染者病毒自發(fā)清除，55%-85%感染者進(jìn)展為CHC，而慢性HCV感染者15%-30%在20年內(nèi)進(jìn)展為肝硬化[1]。多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)HCV抗體(抗HCV)、HCV核糖核酸(HCV RNA)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AlanineAminoacidtransfer,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate Transaminase，AST)在判斷體內(nèi)HCV復(fù)制、肝臟炎癥活動(dòng)以及CHC預(yù)后方面具有重要的預(yù)測價(jià)值[2,3]。雖然抗HCV和HCV RNA 是確定現(xiàn)癥感染的重要指標(biāo)[4]，但是單純依照上述指標(biāo)并不能準(zhǔn)確判斷感染HCV的患者是否會(huì)發(fā)生自發(fā)性病毒清除或進(jìn)入慢性感染階段。盡管目前抗HCV治療有效率可達(dá)95%，但對于HCV感染的早期臨床轉(zhuǎn)歸預(yù)測方面仍有不足之處。HCV感染階段宿主有效的免疫應(yīng)答對病毒的清除以及肝臟炎癥反應(yīng)的程度具有重要的影響，且研究發(fā)現(xiàn)干擾素誘導(dǎo)蛋白10(interferon-γ-inducible peotein-10,IP-10)在慢性HCV感染過程中與肝臟的炎癥程度明顯相關(guān)[5,6]，但其表達(dá)水平對CHC早期疾病轉(zhuǎn)歸的影響尚不清楚，本研究通過對IP-10等HCV感染相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測，探討IP-10與HCV自發(fā)清除及疾病慢性進(jìn)展的相關(guān)性，觀察其對HCV疾病轉(zhuǎn)歸的早期預(yù)測價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)對2016年1月至2018年3月在北京佑安醫(yī)院樣本庫中儲(chǔ)存的HCV感染患者血標(biāo)本按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行回顧性篩選：(1)具有完整臨床資料的患者；(2)根據(jù)2016年丙型肝炎防治指南(2016更新版)[7]可明確診斷為HCV感染的患者；(3)臨床資料以及診斷指標(biāo)提示發(fā)生HCV自發(fā)性清除(HCVr)和HCV慢性感染(HCVc)的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)抗HCV治療的患者；(2)合并甲型肝炎、乙型肝炎以及戊型肝炎等其他類型病毒性肝炎的患者。共篩選符合入組標(biāo)準(zhǔn)的患者66例，其中HCVc組49例，HCVr組17例。

1.2 檢測方法外周血HCV抗體檢測采用羅氏Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。HCV病毒載量檢測采用丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒(羅氏Cobas)，嚴(yán)格參照試劑操作規(guī)程進(jìn)行。血生化檢測采用富士700全自動(dòng)干生化分析儀，操作按說明書進(jìn)行。采用Luminex 技術(shù)檢測外周血中趨化因子IP-10含量，檢測儀器為Luminex200液相懸浮芯片系統(tǒng)，細(xì)胞因子試劑盒Bio-Plex Human Cytokine 27-plex Panel購自Bio-Rad公司(美國)，按照操作說明書進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果

2.1 HCVc組與HCVr組患者一般資料比較

共入組HCV感染者66例(表1)，其中HCVc組49例，男性24例，女性25例，平均年齡56.22±5.878歲，HCVr組17例，男性6例，女性11例，平均年齡57.47±6.829歲，兩組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；蛐蜋z測提示，在HCVc組患者HCV基因亞型以1b和2a為主，比率分別為67.35%(33/49)、24.49%(12/49)。ALT和AST表達(dá)水平比較發(fā)現(xiàn)，HCVc組明顯高于HCVr組(61.127±50.520 vs 24.987±14.207,57.056±42.796 vs 25.487±9.419)，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

表1 兩組患者一般資料比較

注：HCVc：慢性丙型肝炎；HCVr：HCV清除；a表示兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2.2 HCVc組與HCVr組患者外周血IP-10表達(dá)水平比較

對兩組患者外周血IP-10表達(dá)水平比較分析后發(fā)現(xiàn)(圖1)，HCVc組外周血IP-10表達(dá)水平明顯高于HCVr組(717.03±351.74 pg/ml vs 502.10±254.19 pg/ml)，且兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024)。

圖1 外周血IP-10表達(dá)水平比較

2.3 IP-10表達(dá)水平與HCV感染后疾病進(jìn)展的相關(guān)性分析

由以上分析結(jié)果可知，IP-10的表達(dá)水平在HCVc組中明顯增高，為進(jìn)一步明確其可能的相關(guān)因素，故對HVCc組患者的HCV病毒載量、ALT和AST相關(guān)指標(biāo)進(jìn)一步行相關(guān)性分析。分析結(jié)果提示(圖2)，在HCVc組患者外周血IP-10表達(dá)水平與HCVRNA呈明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.394，P=0.006)，而與ALT、AST分別存在明顯正相關(guān)性(r=0.454，P=0.001；r=0.571，P<0.001)。

圖2 IP-10表達(dá)水平與HCV疾病進(jìn)展的相關(guān)性分析

3 討論

IP-10屬趨化因子CXC亞家族，由單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等在γ干擾素和腫瘤壞死因子誘導(dǎo)下表達(dá)，與細(xì)胞表面趨化因子受體CXCR3結(jié)合,介導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)[8]，募集活化的T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和單核細(xì)胞至炎癥部位，增加T細(xì)胞對內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，在HCV慢性感染狀態(tài)下可反映肝臟炎癥程度，且與疾病預(yù)后相關(guān)[9,10]。但對干擾素治療后IP-10表達(dá)水平和HCV病毒清除之間的關(guān)系仍有爭論，既往研究發(fā)現(xiàn)IP-10的低表達(dá)與干擾素治療后有效的病毒清除相關(guān)[11]，但也有研究發(fā)現(xiàn)IP-10的增加與HCV RNA的降低具有一定的相關(guān)性[12]，我們利用HCVc和HCVr兩組患者治療前IP-10的表達(dá)水平進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，HCVc組患者外周血IP-10的表達(dá)水平明顯高于HCVr組(717.03±351.74 pg/ml vs 502.10±254.19 pg/ml)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024)，由此表明，高水平的IP-10與CHC患者疾病進(jìn)展相關(guān)，低水平的IP-10水平與患者自發(fā)病毒清除相關(guān)。

另外，多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)外周血中IP-10的表達(dá)水平可用于評估抗病毒藥物的選擇[13]，抗病毒藥物的治療效果以及抗病毒治療后的應(yīng)答反應(yīng)，最近研究發(fā)現(xiàn)高水平的IP-10表達(dá)水平與直接抗病毒藥物的持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答呈正相關(guān)[14]，且在慢性乙型肝炎病毒感染的研究中也發(fā)現(xiàn)高水平的IP-10與患者的良好預(yù)后相關(guān)[15]。本研究中我們對CHC患者治療前外周血IP-10的表達(dá)水平和HCV RNA表達(dá)水平相比較發(fā)現(xiàn)，IP-10的表達(dá)水平與HCVRNA呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，與既往抗病毒治療后兩者相關(guān)性分析結(jié)果一致，由此表明治療前即可通過IP-10表達(dá)水平的檢測來評估CHC患者抗病毒治療的效果。綜合以上分析可知，在早期HCV感染后，IP-10高表達(dá)與疾病慢性進(jìn)展相關(guān)，而在慢性感染的患者中，高水平的IP-10與病毒載量降低相關(guān)。

ALT和AST 作為判斷炎癥狀態(tài)下肝臟功能的重要指標(biāo)，其與抗HCV和HCVRNA聯(lián)合檢測在判斷CHC疾病進(jìn)展和預(yù)后方面具有重要的預(yù)測價(jià)值[2,3]，且肝細(xì)胞也可在干擾素誘導(dǎo)下表達(dá)IP-10，誘導(dǎo)T細(xì)胞在肝臟內(nèi)的募集，進(jìn)而殺傷HCV感染的肝細(xì)胞，促進(jìn)肝內(nèi)炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HCVc組IP-10水平明顯高于HCVr組患者，且與ALT和AST的表達(dá)水平呈正相關(guān)，從而表明HCVr組患者可誘導(dǎo)體內(nèi)特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)，進(jìn)而有效的清除HCV，但CHC患者最初誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞的能力相對較弱，無法快速有效的清除病毒并導(dǎo)致肝臟內(nèi)持續(xù)的炎癥狀態(tài)。

總之，我們的研究結(jié)果表明，IP-10作為炎性細(xì)胞因子在HCV感染早期高表達(dá)與疾病的慢性進(jìn)展相關(guān)。對于CHC患者，外周血IP-10，ALT和AST表達(dá)水平升高可能與患者特異性T細(xì)胞免疫功能較弱并誘導(dǎo)肝臟內(nèi)持續(xù)炎癥反應(yīng)有關(guān)。