韓 偉，鄒佩貞，石海英，田志環(huán)

（韶關(guān)學(xué)院 英東生物與農(nóng)業(yè)學(xué)院，廣東 韶關(guān) 512005）

“細(xì)胞生物學(xué)”是生物學(xué)類(lèi)專(zhuān)業(yè)的核心課程和基礎(chǔ)課程，比較注重學(xué)生的實(shí)踐能力.細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是“細(xì)胞生物學(xué)”課程體系建設(shè)的重要部分，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容較多，涵蓋很多專(zhuān)業(yè)課的實(shí)驗(yàn)，如分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)、植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)等.對(duì)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作是確保上好實(shí)驗(yàn)課的前提，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備充分，才能提高細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的質(zhì)量，如有些藥品需要現(xiàn)配現(xiàn)用、有些藥品需要提前配制、活體材料需要提前處理等，都需要細(xì)致的準(zhǔn)備.如何做好實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備來(lái)提高實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，成為細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)研究的重要課題.筆者根據(jù)多年準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合開(kāi)設(shè)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，探討如何做好細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，為提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量提供參考和借鑒.

1 實(shí)驗(yàn)藥品的準(zhǔn)備

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞或組織作為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)藥品的要求比較高.藥品質(zhì)量不好，或者是沒(méi)有按照要求配制，處理材料沒(méi)有效果，將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)沒(méi)有結(jié)果或者是效果較差.

1.1 有些藥品需要現(xiàn)配現(xiàn)用

如1/3 000 中性紅和1/5 000 詹納斯綠B 需要現(xiàn)配先用，這樣才能有更好的染色效果［1］.Carnoy 固定液要現(xiàn)配現(xiàn)用，因?yàn)槠渲械谋宜崛菀讚]發(fā)，配制時(shí)間久固定液固定效果不好.亞硫酸水要現(xiàn)配現(xiàn)用，因?yàn)楫a(chǎn)生的SO2容易揮發(fā)掉，在去除多余的干擾色素時(shí)效果會(huì)不好. Unna 試劑需要現(xiàn)配現(xiàn)用，這樣才能發(fā)揮良好的染色效果.PEG（聚乙二醇）需要現(xiàn)配現(xiàn)用，而且最好高壓滅菌，因?yàn)楹苋菀啄?GKN 和Hank溶液也不需配制太久，最好一周之內(nèi)用完，因?yàn)橛衅咸烟浅煞?，短期?nèi)也容易滋生菌類(lèi)，導(dǎo)致緩沖作用差.Giemsa 染色液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，對(duì)于染色體的染色效果才較好.

1.2 有些藥品需要提前配制

如席夫試劑，一般實(shí)驗(yàn)前兩周開(kāi)始配制，因?yàn)榕渲浦笠胖脦滋?，顏色才能退至淡黃色.根據(jù)多次配制席夫試劑的經(jīng)驗(yàn)周一配制，周五顏色可以退至淡黃色，一般放置5 d.根據(jù)比例加一定量的活性炭吸附色素，100 mL 加0.5 g 活性炭，過(guò)濾后立即放入4 ℃冰箱中保存［2］，否者容易變色或沉淀，一次不需要配制太多.改良苯酚品紅染液配制完后，需要放置2 w 之后，染色效果才較好，常用于植物根尖壓片染色和果蠅唾腺染色體染色.

2 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備

2.1 耗材的準(zhǔn)備

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)通常需要用的槍頭、離心管、擦鏡紙、牙簽、載玻片、蓋玻片和染色版，培養(yǎng)皿等一些瑣碎的耗材也要準(zhǔn)備充分.如離心管有幾種規(guī)格，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求一般選擇10 mL 離心管，10 mL 離心管有粗心之分，如果盲目的準(zhǔn)備，可能會(huì)導(dǎo)致離心管放不到離心機(jī)轉(zhuǎn)子里不能離心，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行，材料損失.有些載玻片和蓋玻片質(zhì)量不過(guò)關(guān)，導(dǎo)致觀察效果不好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想.

2.2 活體材料的準(zhǔn)備

2.2.1 有些活體材料需要現(xiàn)準(zhǔn)備

如雞血紅細(xì)胞，最好現(xiàn)用現(xiàn)準(zhǔn)備.教材上說(shuō)在抗凝全血的試管中，加入4 倍體積的0.85 %NaCl 溶液，制成紅細(xì)胞儲(chǔ)備液，置于4 ℃冰箱內(nèi)可供一周內(nèi)使用［3］，但是第二天經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)雞紅細(xì)胞有少量的破裂現(xiàn)象，所以為了保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量需要現(xiàn)準(zhǔn)備.

2.2.2 有些活體材料需要提前處理

如小白鼠需要提前1 ～2 d，往腹腔內(nèi)注射淀粉肉湯.動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體的制備實(shí)驗(yàn)，如用青蛙作為材料，需要根據(jù)其體重，提前幾個(gè)小時(shí)注射秋水仙素，否則看不到染色體圖像，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗［4］.土豆凝集素也要提前2 h 處理土豆制備.

3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及過(guò)程準(zhǔn)備

3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備的調(diào)試

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的儀器設(shè)備不多，主要有離心機(jī)、水浴鍋、顯微鏡、超凈工作臺(tái)等.但要做好設(shè)備的調(diào)試，因?yàn)橛行┰O(shè)備需要提前開(kāi)啟，如水浴鍋和超凈工作臺(tái)等.離心機(jī)要調(diào)整好轉(zhuǎn)速、時(shí)間以及轉(zhuǎn)子，還要根據(jù)學(xué)生人數(shù)準(zhǔn)備幾臺(tái)離心機(jī)，避免學(xué)生等待的時(shí)間.水浴鍋溫度設(shè)置要與實(shí)際溫度一致，如果不一致用溫度計(jì)測(cè)定，以免造成溫度不準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)材料處理不當(dāng)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.顯微鏡要能夠保證人手一臺(tái)，保證觀察效果清晰，如有顯微互動(dòng)實(shí)驗(yàn)室，最好能使用數(shù)碼互動(dòng)顯微鏡，可以拍攝照片，保存照片，以利于今后觀看，達(dá)到良好的觀察效果.

3.2 提前采購(gòu)材料和藥品，做好預(yù)實(shí)驗(yàn)

對(duì)細(xì)胞生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目需要預(yù)習(xí)，然后列好每個(gè)實(shí)驗(yàn)需要的設(shè)備，藥品和耗材清單，按照清單逐一進(jìn)行查找.因?yàn)橛行┧幤泛筒牧闲枰崆皽?zhǔn)備、提前處理，所以要提前采購(gòu)好實(shí)驗(yàn)材料和藥品.準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)的所用東西后，需要對(duì)每一個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)可以查找實(shí)驗(yàn)中存在的問(wèn)題，配制藥品的好壞以及藥品的質(zhì)量是否達(dá)到要求，每個(gè)教材上都有實(shí)驗(yàn)步驟，但是這個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟所說(shuō)的有些條件不是絕對(duì)的，特別是實(shí)驗(yàn)時(shí)的溫度和時(shí)間都會(huì)影響對(duì)材料的處理，所以預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)要根據(jù)當(dāng)時(shí)的條件有所調(diào)整.如青蛙骨髓細(xì)胞染色體的制備，如果在冬季溫度低的情況下上實(shí)驗(yàn)課，就不能按照書(shū)上說(shuō)的提前3 ～4 h，需要提前多幾個(gè)小時(shí)往青蛙的腹腔內(nèi)注射秋水仙素，因?yàn)槎烨嗤芴幱诙郀顟B(tài)，活動(dòng)能力下降，對(duì)藥物的吸收較慢，所以注射處理時(shí)間短，得不到中期分裂相或較少分裂相，學(xué)生實(shí)驗(yàn)效果就較差［5］.

3.3 配制藥品要嚴(yán)肅認(rèn)真

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)需要的材料比較多，對(duì)于藥品的要求較高，配制藥品一定要嚴(yán)格操作，不能馬虎懈怠，隨便應(yīng)付.有些藥品需要裝入棕色瓶?jī)?nèi)，如席夫試劑、中性紅、詹納斯綠B、改良苯酚品紅染色液、Unna 試劑、Giemsa 染液等有顏色的染色劑.有些需要看準(zhǔn)藥品分子量再配制，如PEG（聚乙二醇）分子量有4 000，6 000，8 000 的通常用分子量4 000 的作為細(xì)胞融合劑.有些藥品需要注意區(qū)分同分異構(gòu)體，如派洛寧也叫吡咯紅，其有兩種分為吡咯紅G 和吡咯紅B，用于RNA 染色的是吡咯紅G 而不是吡咯紅B.有些藥品盡量用進(jìn)口藥品，如秋水仙素，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量好的秋水仙素容易溶解，處理材料效果較好，質(zhì)量不好的，比較難溶解，處理材料效果差.活體材料處理需要謹(jǐn)慎，如往小白鼠體內(nèi)注射淀粉肉湯，一定要掌握好注射的劑量及注射的位置，稍有不慎，小白鼠就會(huì)容易死亡.

3.4 合理安排學(xué)生參與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

過(guò)去傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)都是實(shí)驗(yàn)老師把藥品和材料準(zhǔn)備好，配制好，學(xué)生根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟完成實(shí)驗(yàn)就可以了.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，學(xué)生根本不記得怎么做以及實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié).這樣的實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式不利于學(xué)生實(shí)踐能力的培養(yǎng)，一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束了，學(xué)生根本不會(huì)配制實(shí)驗(yàn)藥品和處理材料.曾經(jīng)帶的幾屆學(xué)生到畢業(yè)的時(shí)候做畢業(yè)論文實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)他們竟然不會(huì)配制藥品.他們的回答是上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，老師都把藥品配制好，準(zhǔn)備好，他們按照做就可以了，他們對(duì)配制藥品沒(méi)有概念.所以反思實(shí)驗(yàn)教學(xué)出現(xiàn)的問(wèn)題，學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課上沒(méi)有獲得充分的實(shí)踐動(dòng)手能力.讓學(xué)生配制實(shí)驗(yàn)藥品和處理材料，在一定程度上可以提高學(xué)生的實(shí)踐動(dòng)手能力.實(shí)踐中可以以組為單位配制藥品和準(zhǔn)備材料，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目分別指派一組人員準(zhǔn)備，然后老師在一旁指導(dǎo)配制藥品，這樣可以根據(jù)每組同學(xué)參與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的積極性、認(rèn)真度和準(zhǔn)確性對(duì)其進(jìn)行考核，計(jì)入平時(shí)成績(jī)，這樣既鍛煉了學(xué)生，又結(jié)合平時(shí)表現(xiàn)進(jìn)行了考核.學(xué)生的積極性提高了，實(shí)驗(yàn)效果和質(zhì)量也就會(huì)提高.

總之，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備是細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的重要部分，對(duì)于細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)前期的準(zhǔn)備細(xì)節(jié)較多，比較繁瑣.要嚴(yán)肅認(rèn)真，確保每一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量，才能提高細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的教學(xué)質(zhì)量.