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      鹿茸的鑒別方法

      2020-03-06 21:03:05王宇鵬
      光明中醫(yī) 2020年2期
      關(guān)鍵詞:鑒別方法茸毛鹿茸

      王宇鵬

      鹿茸為鹿科植物梅花鹿CervusnipponTemminck 或者馬鹿CervuselaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角[1]。前者習(xí)慣性稱為“花鹿茸”,后者習(xí)慣性稱為“馬鹿茸”。鹿茸具有壯腎陽(yáng)、益精血、強(qiáng)筋骨、調(diào)沖任、托瘡毒的功效,是我國(guó)名貴的中藥材。在我國(guó),鹿科動(dòng)物種類有十幾種,根據(jù)報(bào)道顯示有多種動(dòng)物的茸充當(dāng)鹿茸使用,導(dǎo)致在中藥材市場(chǎng)上鹿茸摻偽品較多;還有,因?yàn)楫a(chǎn)地不同,梅花鹿茸、馬鹿茸的藥材質(zhì)量不同[2]。因此,應(yīng)對(duì)鹿茸中藥材進(jìn)行有效鑒定,保證鹿茸用藥的安全性,本文將近十年與鹿茸藥材的鑒定方法相關(guān)的研究進(jìn)行概述。

      1 鹿茸的傳統(tǒng)鑒別方法

      1.1 性狀鑒別“花鹿茸”,具有一個(gè)分枝的稱為“二杠”,主枝稱為“大挺”,側(cè)枝稱為“門莊”。外皮呈紅棕色或者棕色,表面密生細(xì)茸毛,茸毛顏色為紅黃色或者棕黃色。具有兩個(gè)分枝的稱為“三岔”?!榜R鹿茸”外觀比“花鹿茸”粗大,分枝較多,具有一個(gè)側(cè)枝的稱為“單門”,兩個(gè)側(cè)枝的稱為“蓮花”,三個(gè)側(cè)枝的稱為“三岔”。有研究者對(duì)多種鹿茸藥材的外觀性狀進(jìn)行比較鑒別,發(fā)現(xiàn)馬鹿茸分枝最多,這為鹿茸的種間鑒別提供依據(jù)[3]。

      1.2 顯微鑒別取鹿茸粉末,顯微鏡下可見顯微特征:茸毛多碎斷,毛根多與毛囊相連,基部多膨大呈撕裂狀;毛干表面有瓦片狀排列的扁平細(xì)胞,細(xì)胞的游離邊緣指向毛尖;沒(méi)有骨化的骨組織表面具不規(guī)則塊狀突起,無(wú)色,邊緣不齊;鹿茸表皮角質(zhì)層呈淡黃色,表面呈顆粒狀;骨碎片不規(guī)則,表面具細(xì)密縱向紋理,顏色呈淡黃色或者棕色,骨陷窩呈類圓形,數(shù)量較多,排列不齊。鹿茸的炮制應(yīng)去除茸毛,但是中藥材市場(chǎng)上流通的鹿茸藥材表面的茸毛并沒(méi)有清除干凈,茸毛的顯微特征具有一定的穩(wěn)定性,可以作為鹿茸的顯微鑒定特征之一。劉麗等[4]對(duì)馬鹿茸、梅花鹿茸等七種品種鹿茸的茸毛進(jìn)行顯微鑒別,使用顯微量尺測(cè)量七種茸毛的長(zhǎng)度、毛干直徑等顯微鑒別指標(biāo)的數(shù)據(jù)信息,使用聚類分析法進(jìn)行分類,鑒別結(jié)果與傳統(tǒng)鑒別結(jié)果一致,即正品為梅花鹿茸、馬鹿茸,替代品為白唇鹿茸,混用品為新西蘭鹿茸、狍茸、麋鹿絨以及黇鹿茸,結(jié)果表明鹿茸的茸毛顯微鑒別特征可以作為鹿茸的顯微鑒別指標(biāo),具有鑒別簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn),為鹿茸的品種鑒別提供有效依據(jù)。

      2 現(xiàn)代鑒別方法

      2.1 薄層鑒別薄層色譜鑒別方法具有操作簡(jiǎn)單、可靠的優(yōu)點(diǎn)[5]。有研究者以甘氨酸為對(duì)照品,對(duì)比鑒別不同鹿茸藥材,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在與甘氨酸對(duì)照品相應(yīng)位置上,鹿茸蠟片、粉片具有清晰斑點(diǎn)顯現(xiàn)[6];還有研究者以鹿茸溶液為對(duì)照品,對(duì)強(qiáng)力腦清片、參茸王漿口服液、參茸軟膠囊等含鹿茸的中成藥中的鹿茸藥材進(jìn)行薄層鑒別[7],鑒別方法直觀、簡(jiǎn)單。

      2.2 光譜鑒別研究報(bào)道顯示[8],鹿茸的光譜鑒別方法主要有熒光鑒別法以及紫外光譜鑒別法。紫外光譜鑒別具有簡(jiǎn)單、直觀的優(yōu)點(diǎn),具體方法為取鹿茸樣品,加一定濃度的乙醇進(jìn)行提取并濾取藥液,以同樣濃度的乙醇為空白,在200~300 nm下測(cè)量吸光度,結(jié)果顯示在253 nm、236 nm左右,鹿茸樣品呈現(xiàn)最大吸收。但是紫外光譜法在鑒別同源鹿茸藥材方面具有應(yīng)用局限性。胡翠英等[9]應(yīng)用凝視式熒光光譜成像技術(shù)對(duì)13種鹿茸飲片進(jìn)行真?zhèn)舞b別,結(jié)果顯示在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,13種鹿茸飲片的光譜曲線特征明顯不同;在410~670 nm波長(zhǎng)范圍下對(duì)13種鹿茸飲片的光譜數(shù)據(jù)信息進(jìn)行聚類分析,聚類分析結(jié)果與傳統(tǒng)性狀鑒別與顯微鑒別結(jié)果一致,表明熒光光譜成像法可用于鹿茸飲片的真?zhèn)舞b別,具有鑒別快速、客觀、重復(fù)性良好的優(yōu)點(diǎn)。有研究者[10]使用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)評(píng)價(jià)了三種廠家的鹿茸粉的質(zhì)量,為鹿茸粉的等級(jí)質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。吳新宇等[11]使用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)結(jié)合主成分分析法對(duì)鹿茸真?zhèn)芜M(jìn)行鑒別,鑒別準(zhǔn)確率高達(dá)93.5%。

      2.3 色譜鑒別蛋白質(zhì)是鹿茸飲片中含量較高的成分,氨基酸是蛋白質(zhì)的基本組成單位,近年來(lái)有許多研究將氨基酸含量作為鹿茸質(zhì)量分析的主要指標(biāo)。有研究者[12]采用柱前衍生化HPLC法對(duì)50批鹿茸飲片中15種氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果顯示鹿茸蠟片中氨基酸含量最高,血片與粉片中氨基酸的含量差異較小,氨基酸含量測(cè)定可以作為鑒別鹿茸飲片真?zhèn)蔚闹饕罁?jù)。該研究組使用HPLC指紋圖譜法建立了鹿茸飲片的HPLC指紋圖譜,采用主成分分析法將不同品種的鹿茸飲片進(jìn)行鑒別區(qū)分,還通過(guò)聚類分析法將鹿茸蠟片與骨片進(jìn)行分離,高效液相指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量法在鑒別不同規(guī)格鹿茸飲片具有高效、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。宗穎等[13]應(yīng)用高效液相色譜法,建立了梅花鹿茸藥材以及鹿茸不同部位的HPLC指紋特征圖譜,可用于鹿茸飲片的真?zhèn)舞b別,鑒定專屬性較高。

      2.4 分子鑒別隨著現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,分子生物學(xué)技術(shù)逐漸用于鹿茸藥材的真?zhèn)舞b別以及質(zhì)量評(píng)價(jià)。DNA條形碼技術(shù)是分子鑒定中應(yīng)用比較廣泛的技術(shù),具有通用性、唯一性、信息化等優(yōu)點(diǎn),操作簡(jiǎn)便規(guī)范。有研究者[14]使用COⅠ通用引物對(duì)鹿茸飲片中提取出來(lái)的DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增,在凝膠電泳成像儀器上可見單一、明亮的條帶,經(jīng)克隆純化后,測(cè)定序列后,使用DNAMAN軟件進(jìn)行處理,得到目標(biāo)序列,在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中使用BLAST算法鑒別鹿茸藥材的真?zhèn)?,可用于同源類鹿茸飲片的鑒別。陳康等[15]使用高分辨率熔解曲線(HRM)鑒別鹿茸藥材的真?zhèn)?,以COⅠ序列為引物,建立正品鹿茸藥材的熔解曲線模型,基于該模型,可對(duì)鹿茸藥材的真?zhèn)芜M(jìn)行鑒別。HRM技術(shù)與DNA條形碼技術(shù)聯(lián)合鑒別鹿茸藥材,具有高通量、快速、成本較低等優(yōu)點(diǎn)。魏藝聰?shù)萚16]基于COⅠ與SRY基因序列,建立了2個(gè)位點(diǎn)的特異性PCR體系,用于鑒別鹿茸樣本的來(lái)源,并隨機(jī)選取中藥材市場(chǎng)中流通的24個(gè)鹿茸樣品進(jìn)行鑒別分析,PCR鑒定法具有簡(jiǎn)便、可靠的優(yōu)點(diǎn)。

      2.5 免疫鑒定法隨著摻偽技術(shù)的發(fā)展,目前在中藥材市場(chǎng)上,對(duì)非正品鹿茸的炮制加工方法與正品鹿茸相似,傳統(tǒng)性狀鑒別無(wú)法進(jìn)行區(qū)分,有研究者[17]使用SDS-PAGE凝膠電泳法鑒別了四種鹿茸藥材的水溶性蛋白質(zhì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)四種鹿茸飲片之間的蛋白質(zhì)差異,在此基礎(chǔ)上,對(duì)這四種鹿茸飲片進(jìn)行鑒別,在凝膠色譜的基礎(chǔ)上,使用膠體金免疫層析技術(shù),制成試劑盒,使其用于鹿茸飲片的鑒別,該法具有很高的專屬性與特異性。

      3 小結(jié)

      鹿茸既是常用藥,又是貴重藥,目前在我國(guó)中藥材市場(chǎng)上,鹿茸的摻偽技術(shù)復(fù)雜多樣,鹿茸的中藥鑒別方法由簡(jiǎn)單直觀的傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別發(fā)展為多組分、多層次指紋圖譜技術(shù)的綜合鑒定方法;并引入分子生物學(xué)、免疫鑒定等技術(shù)對(duì)中藥材的品種優(yōu)劣進(jìn)行評(píng)價(jià),但是各種鑒定方法都有一定的局限性。在實(shí)際應(yīng)用中,可根據(jù)情況進(jìn)行選擇。

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