肖海晗，譚健梅，王貴平

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128)

豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)是導(dǎo)致仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征和皮炎腎病綜合征的主要病原[1]。PCV可引起機(jī)體免疫抑制,從而導(dǎo)致免疫力下降，并引起其他病原的繼發(fā)感染[2]。豬圓環(huán)病毒經(jīng)常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒等混合感染，導(dǎo)致養(yǎng)豬業(yè)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3]。2019年5月，湖南省永州市某規(guī)?；i場(chǎng)發(fā)生一起疑似豬圓環(huán)病毒感染的病例，其診斷報(bào)告如下。

1 流行病學(xué)

該場(chǎng)存欄母豬120頭，保育到育肥前的一批仔豬75頭。2019年5月20日，10余頭斷奶仔豬陸續(xù)出現(xiàn)不吃食、腹瀉、喘氣等癥狀。采用防治呼吸道疾病和腹瀉的藥物對(duì)癥治療無(wú)效。5月底出現(xiàn)發(fā)熱等現(xiàn)象后，有仔豬開(kāi)始死亡。至6月10日，該批仔豬發(fā)病58頭，陸續(xù)死亡33頭。

2 臨床癥狀

臨床檢查，患病豬精神沉郁、食欲減退；體表較臟、被毛粗糙；喘氣、呼吸困難并伴有腹式呼吸；體表淋巴結(jié)腫大；部分仔豬明顯消瘦并出現(xiàn)“鯉魚(yú)脊”。

3 病理變化

對(duì)4頭臨床癥狀典型的病豬進(jìn)行解剖。可見(jiàn)腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、頜下淋巴結(jié)腫脹并出血；肺臟充血出血，呈彌漫性病變，似橡皮樣，出現(xiàn)氣腫；脾臟出現(xiàn)輕微腫大；腎切開(kāi)后乳頭突出，可見(jiàn)針尖大小的出血點(diǎn)。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

取上述4頭解剖仔豬的淋巴結(jié)、肺臟和腦，送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)病毒檢測(cè)。

4.1 核酸提取

取病理變化明顯的4份病死豬的相關(guān)內(nèi)臟，用滅菌的剪刀、鑷子取約1g樣品，每份樣品加入約1.2ml生理鹽水，用研磨器研磨至勻漿。處理后的樣品在-80℃冰箱反復(fù)凍融3次后，8000 rpm離心5 min，取上清液保留備用。然后嚴(yán)格按照核酸提取試劑盒(TianDZ)要求提取核酸。

4.2 QPCR檢測(cè)

按QPCR試劑盒(湖南國(guó)測(cè)生物制品)操作步驟進(jìn)行操作，具體步驟如下：PCR擴(kuò)增(50ul)體系，向每個(gè)反應(yīng)管中加入5ul核酸釋放劑、5ul模板。取5ul陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和待測(cè)模板，分別加入對(duì)應(yīng)孔中，靜置10min。每孔加入40ul PCR-Mix，蓋上管蓋。

5 結(jié)果

用QPCR相關(guān)試劑盒對(duì)豬圓環(huán)病毒2型、藍(lán)耳病毒、豬瘟病毒和豬偽狂犬病毒進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：圓環(huán)病毒檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性；藍(lán)耳病毒檢測(cè)結(jié)果一份樣品為可疑，其余為陰性；豬瘟病毒檢測(cè)結(jié)果，一份樣品為可疑，其余為陰性；豬偽狂犬病毒檢測(cè)結(jié)果，樣品均為陰性(表1)。相關(guān)QPCR檢測(cè)照片見(jiàn)圖1-圖4。

表1 四份樣品檢測(cè)結(jié)果

注：*Ct值大于40者為陰性，Ct值在35以下者為陽(yáng)性，Ct值位于35-40之間則為可疑

圖1 豬藍(lán)耳病毒(PRRSV)檢測(cè)結(jié)果

圖2 豬圓環(huán)病毒2(PCV2)檢測(cè)結(jié)果

圖3 豬瘟病毒(CSFV)檢測(cè)結(jié)果

圖4 豬偽狂病毒(PRV)檢測(cè)結(jié)果

6 討論與結(jié)論

在熒光定量PCR檢測(cè)中，Ct值越小提示其含病毒量越高。PCV2-QPCR擴(kuò)增結(jié)果，顯示圓環(huán)病毒陽(yáng)性對(duì)照Ct值為23.58，待測(cè)樣品分別為25.15、30.31、27.62、27.51，出現(xiàn)特異性熒光曲線，陰性對(duì)照未出現(xiàn)，提示送檢的4份樣品均檢測(cè)出PCV2。檢測(cè)的四份樣品均無(wú)藍(lán)耳病毒、豬瘟病毒和偽狂犬病毒特異性熒光曲線，陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)特異性條帶而陰性對(duì)照未出現(xiàn)，提示送檢的4份樣品中均沒(méi)有檢出上述3種病毒。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室QPCR檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合該場(chǎng)流行病學(xué)、臨床癥狀及病理變化，初步診斷為豬圓環(huán)病毒感染。鑒于該場(chǎng)一直沒(méi)有免疫注射PCV2疫苗，建議該場(chǎng)選擇合適的PCV2疫苗，按照廠家的參考使用方法，結(jié)合該場(chǎng)實(shí)際情況，制定合適的PCV2免疫程序并立即進(jìn)行免疫接種。

從該4頭解剖仔豬的臨床癥狀和病理剖檢變化分析，該豬群疑似有其他細(xì)菌感染，建議該場(chǎng)進(jìn)行細(xì)菌分離和藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇合適藥物對(duì)豬群進(jìn)行防治。圓環(huán)病毒可以通過(guò)呼吸道傳播[4]，因此建議該場(chǎng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，設(shè)置合理的飼養(yǎng)密度，定期清掃和消毒欄舍，注意通風(fēng)，保持適宜的溫度、濕度，及時(shí)隔離發(fā)病豬，控制發(fā)病率。