41例Rh-HDFN血清學(xué)試驗和臨床檢驗結(jié)果的分析研究

陳盈盈，周 超，徐 軍，尹明偉，馬繼華，陳學(xué)軍

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院實驗檢驗中心輸血科/國家兒童健康與疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，浙江杭州 310000)

新生兒溶血病(HDFN) 是一種嚴(yán)重的妊娠并發(fā)癥，指母體內(nèi)產(chǎn)生針對胎兒紅細(xì)胞抗原的同種免疫抗體，從而破壞胎兒紅細(xì)胞而引起新生兒溶血，表現(xiàn)為黃疸、貧血、水腫等癥狀，甚至造成核黃疸及死亡[1-2]，其中最常見的是母嬰ABO新生兒溶血病(ABO-HDFN)，其次為Rh新生兒溶血病(Rh-HDFN)。ABO-HDFN發(fā)生的原因是母嬰ABO血型不合，而非ABO-HDFN的發(fā)生除此之外，還包括孕婦因不相容性輸血史或懷孕史而產(chǎn)生不規(guī)則抗體。研究普遍表明Rh-HDFN所引起的溶血反應(yīng)程度相對于ABO系統(tǒng)、MNS系統(tǒng)、Kell系統(tǒng)等均較嚴(yán)重[3-4]，因此人們對Rh-HDFN的重視程度越來越高。

Rh血型系統(tǒng)具有高度多態(tài)性和高度免疫源性，主要包括D、E、C、c、e 這5類抗原，這也是與臨床患兒發(fā)生Rh-HDFN關(guān)系最為密切的抗原[5]。若對這些抗原相應(yīng)抗體導(dǎo)致溶血病發(fā)生的臨床檢驗結(jié)果進(jìn)行分析，將有利于對患兒進(jìn)行早診斷、早干預(yù)、早治療，降低患兒的病死率。為此，首先通過血清學(xué)對本院疑似Rh-HDFN的患兒血清進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查及鑒定，隨后對各抗體類型組患兒的基本情況、臨床檢驗及治療情況進(jìn)行回顧性分析，從而為Rh-HDFN提供診斷經(jīng)驗，為臨床治療提供一定參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015—2018年在輸血科檢測并確診為新生兒Rh-HDFN的患兒41例為研究對象，患兒入院時無明顯其他重大疾病并發(fā)癥。其中男患兒24例、女患兒17例，日齡1～16 d、平均(3.78±3.80)d。新生兒Rh-HDFN 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《實用新生兒學(xué)》的標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1.2方法 實驗室檢查：對疑有患新生兒溶血的患兒，本科室對收到母親與患兒血標(biāo)本進(jìn)行溶血全套檢測，包括母子血型、Coombs試驗、游離抗體試驗、放散試驗及同時送檢血常規(guī)和膽紅素檢測。檢測到不規(guī)則抗體后，將血標(biāo)本送至浙江省血液中心血站檢測具體特異性抗體類型，將其分為抗-D組、非抗-D單個抗體組(抗-E/c組)、聯(lián)合抗體組(抗-Ec組)。實驗嚴(yán)格按照試劑說明書及《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第4版)進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1Rh-HDFN患兒溶血三項試驗結(jié)果分析 研究顯示37例患兒直接抗球蛋白試驗陽性程度達(dá)2+或以上，構(gòu)成比為90.24%(37/41)，放散試驗全陽性。此外患兒母血清不規(guī)則抗體篩查陽性率為100%，程度均2+或以上(因患兒不規(guī)則抗體全部來源于母親，故將母血清用于不規(guī)則抗體初篩)，見表1。

2.2不同抗體類型組性別日齡、膽紅素峰值、血紅蛋白值情況比較 不規(guī)則抗體篩查陽性的患兒，對其特異性抗體進(jìn)一步進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示抗體類型為抗-D組19例，占43.90%(19/41)；抗-E/c組14例，占34.15%(14/41)；抗-Ec組9例，占21.95%(9/41)。對各抗體組患兒基本情況比較分析，顯示3組患兒日齡和性別構(gòu)成比比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；對膽紅素峰值進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)抗-E/c組和抗-Ec組膽紅素水平明顯高于抗-D組，抗-Ec組和抗-E/c組則無明顯差異，總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.017)；血紅蛋白總體水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.640)。見表2。

2.3不同治療方法各指標(biāo)水平比較 參照《實用新生兒學(xué)》中Rh-HDFN患兒產(chǎn)后治療方法的標(biāo)準(zhǔn)[5]，將其分為非輸血換血組、輸血組、換血組；患兒經(jīng)治療后無其他不良反應(yīng)。對不同治療方法的患兒基本情況和膽紅素血紅蛋白值進(jìn)行回顧性分析，統(tǒng)計顯示非輸血換血組、輸血組和換血組性別構(gòu)成比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。換血組日齡較其他兩組較小；換血組膽紅素峰值較非輸血換血組和輸血組較高；輸血組和換血組血紅蛋白水平較非輸血換血組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.015、0.037、0.010)。見表3。

表1 Rh-HDN 溶血三項檢查及母血清不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

表2 不同抗體類型組性別日齡、膽紅素峰值、血紅蛋白值情況比較

表3 不同治療方法各組性別、日齡、膽紅素峰值、血紅蛋白值情況比較

3 討 論

本研究首先對41例Rh-HDFN患兒血清學(xué)試驗結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)90.24%的患兒直抗試驗呈陽性或強(qiáng)陽性，母親不規(guī)則抗體篩查均表現(xiàn)為陽性，多項研究表明Rh溶血的患兒直抗陽性通常在2+或以上[6-7]，但直抗陰性或弱陽性的Rh溶血病例偶有報道[8]，研究結(jié)果進(jìn)一步支持了以上結(jié)論。

在尚未應(yīng)用Rh免疫球蛋白(Rh IG)注射已致敏的Rh陰性血型孕婦預(yù)防新生兒溶血病之前，抗-D是新生兒溶血病致死的一大重要因素。隨著Rh IG的應(yīng)用，由抗-D導(dǎo)致的新生兒溶血已大大減少，Rh系統(tǒng)其他抗原的同種抗體導(dǎo)致的新生兒溶血病逐漸引起人們的關(guān)注[7]。本研究病例中導(dǎo)致Rh-HDFN的不規(guī)則抗體，最多的仍是抗-D，其次是抗-E/c，抗-Ec，這一結(jié)果同國內(nèi)外研究報道結(jié)果基本一致[9-10]。目前而言，抗-D與非抗-D導(dǎo)致HDFN的臨床檢驗結(jié)果比較的報道較少，在PHUNG等[11]的Rh-HDFN病例報道中顯示抗-D患兒與抗-E/c患兒血紅蛋白和膽紅素峰值總體水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，然而本研究結(jié)果顯示抗-D患兒膽紅素峰值總體水平較抗-E/c和抗-Ec低，而血紅蛋白水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明其貧血程度和臨床進(jìn)程相對不嚴(yán)重，這似乎與傳統(tǒng)認(rèn)為抗-D比非抗-D導(dǎo)致的HDFN臨床特征嚴(yán)重的觀點不一致，這可能與抗-D的HDFN臨床發(fā)病進(jìn)程和表現(xiàn)顯現(xiàn)較快的特點并及時進(jìn)行臨床干預(yù)有關(guān)，此外，部分患兒由外院轉(zhuǎn)至本院前已做相應(yīng)治療措施，這也可能是患兒年齡在各抗體類型組中統(tǒng)計并無差異的原因之一。該結(jié)果表明非抗-D發(fā)生同種免疫溶血病其臨床特征較為嚴(yán)重，尤其是聯(lián)合抗體同時存在時更嚴(yán)重，多項報道也支持了這一結(jié)果[12-14]，臨床工作中應(yīng)當(dāng)引起足夠重視。

新生兒溶血病的治療主要包括藍(lán)光照射、丙種球蛋白注射、輸血、換血等。對不同治療方法患兒臨床指標(biāo)進(jìn)行回顧性分析，表明患兒臨床進(jìn)展越快，如貧血程度、溶血程度越嚴(yán)重，光療等其他方法失敗者應(yīng)及時進(jìn)行換血治療，以防高膽紅素血癥并發(fā)癥的發(fā)生；對貧血嚴(yán)重者需進(jìn)行輸血治療以糾正貧血；臨床表現(xiàn)相對較輕者進(jìn)行常規(guī)降膽紅素水平的治療。

Rh系統(tǒng)各抗原在我國漢族人群中分布頻率分別為D：99.66%，E：47.8%，c：56.31%，C：87.45%，e：52.12%[15]，且在孕婦產(chǎn)前不規(guī)則抗體篩查報道中最多的是抗-E，其次是抗-D或抗-Ec等其他抗原抗體[16-18]，我國對于Rh-HDFN的預(yù)防目前僅限于對RhD抗原[19]，然而本研究非抗-D同種免疫溶血病嚴(yán)重程度提示，對它的預(yù)防同樣不容忽視。有如下啟示：(1)對有懷孕史或輸血史的孕婦及丈夫Rh血型進(jìn)行檢測和孕婦不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查;(2)產(chǎn)前對胎兒Rh血型進(jìn)行檢測，但在我國對這一技術(shù)方法的建立有待日后長期研究。