市售烏梢蛇的微性狀鑒別研究

金捷凱，方成武,2，楊青山,2,3，陳夢軒，姚 強(qiáng)，丁振飛，洪穩(wěn)穩(wěn)，王 進(jìn)

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012；2.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院 中藥資源保護(hù)與開發(fā)研究所，安徽 合肥 230012；3.安徽道地中藥材品質(zhì)提升協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 合肥 230012；4.安徽亞泰天然植物科技有限公司，安徽 金寨 237344)

烏梢蛇又名黑梢蛇、烏蛇、劍脊蛇，為游蛇科動(dòng)物烏梢蛇Zaocysdhumnades(Cantor)除內(nèi)臟的干燥體[1]。烏梢蛇是臨床上常用動(dòng)物類中藥之一，多于夏、秋二季捕捉，剖開蛇腹，剝?nèi)ド咂ち纛^尾，除去內(nèi)臟，盤成圓盤狀，干燥。其性平，味甘，具祛風(fēng)活絡(luò)鎮(zhèn)痛、除濕攻毒之功，臨床用于風(fēng)濕頑痹、麻木拘攣、口眼歪斜、中風(fēng)、抽搐、痙攣、破傷風(fēng)、麻風(fēng)、疥癬、瘰疬、惡瘡等[2]。現(xiàn)代研究[3-4]表明，烏梢蛇治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具有顯著療效。

市場上烏梢蛇正品主要來源于四川、湖北、湖南、江西、江蘇、安徽等地。因?yàn)跎疑哔Y源有限，價(jià)格較高，而烏梢蛇偽品種類多樣且價(jià)格低廉，導(dǎo)致偽品充斥市場，對臨床療效產(chǎn)生極大影響。目前已有學(xué)者對烏梢蛇與其偽品進(jìn)行研究，已報(bào)道過的偽品有王錦蛇、灰鼠蛇、滑鼠蛇、紅點(diǎn)錦蛇、赤鏈華游蛇、黑眉錦蛇等[5-9]，但缺乏系統(tǒng)資料。前期抽樣調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市場上烏梢蛇混偽品大致為滑鼠蛇Ptyasmucosus(Linnaeus)、灰鼠蛇Ptyaskorros(Schlegel)、舟山眼鏡蛇NajanajaatraCantor、赤鏈華游蛇Sinonatrixannularis(Hallowell)和白鏈蛇Dinodonseptentrionalis(Gunthe)。筆者通過中藥微性狀鑒定法[10]研究市場上烏梢蛇正偽品的微性狀鑒別特征，為烏梢蛇藥材的鑒別提供參考。

1 材料

1.1 樣品 經(jīng)研究鑒別收集到的樣品為烏梢蛇(湖南和四川)、滑鼠蛇(湖南)、灰鼠蛇(國產(chǎn)和進(jìn)口)、眼鏡蛇、白鏈蛇、赤鏈華游蛇。市售烏梢蛇藥材及常見偽品樣品收集情況見表1。

1.2 儀器 Optec奧特光學(xué)SZ780 連續(xù)變倍體視顯微鏡：重慶奧特光學(xué)儀器有限公司；佳能70D相機(jī)：日本佳能有限公司；燒杯、浸泡箱、鑷子、接種針、剪刀、吸水紙、平板、重物。

表1 實(shí)驗(yàn)藥材樣品信息

1.3 試劑 自來水。

2 方法

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)需要將蛇皮從蛇體剝離，在體視顯微鏡下觀察研究。為達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，先設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)以探索浸泡時(shí)間與蛇皮剝離難易度大致關(guān)系。選取長度、大小相近的烏梢蛇飲片，隨機(jī)均分為甲、乙、丙、丁4組。按照上述分組，將烏梢蛇飲片置于燒杯中。在燒杯內(nèi)加入足量自來水完全淹沒飲片，再用塑封袋包裹燒杯。控制浸泡時(shí)間：甲組浸泡16 h、乙組20 h、丙組24 h、丁組28 h。

2.2 微性狀鑒別實(shí)驗(yàn) 在浸泡箱中注入適量水，將藥材樣品置于水中完全浸沒并浸泡24 h。取出藥材樣品去除頭部及尾部，至上而下將蛇皮從蛇肉上慢慢剝離。將所得蛇皮置于吸水紙上展平，剝離時(shí)需注意蛇皮完整。再于蛇皮上方覆蓋吸水紙，并在上方置一平板，壓上重物置于干燥環(huán)境。次日更換吸水紙繼續(xù)壓置。重復(fù)2～3周至蛇皮干燥。參照2015年版《中華人民共和國藥典》[11]“中藥其他方法通則”項(xiàng)下中藥的顯微鑒別方法及中藥微性狀鑒定法[10]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將藥材樣品蛇皮置于體視顯微鏡下，觀察其頭部、體背部、腹部鱗片及去除鱗片各部位的微性狀特征，并拍照記錄。

3 結(jié)果

3.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 4組飲片經(jīng)鑒定均為正品烏梢蛇飲片。甲組烏梢蛇飲片剝蛇皮時(shí)，蛇皮緊緊連接蛇肉，難以剝離；乙組一部分蛇皮與蛇肉較易剝離，另一部分較難剝離，易剝爛，蛇皮剝離不整齊；丙組蛇皮與蛇肉較易剝離，蛇皮相對整齊；丁組蛇皮與蛇肉均酥軟，難以剝離，氣味嚴(yán)重。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定最佳浸泡時(shí)間為24 h。4組飲片蛇皮見圖1。

3.2 微性狀鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 湖南產(chǎn)烏梢蛇微性狀特征 湖南產(chǎn)烏梢蛇體前段中央縱線處單鱗蛇皮(將去除鱗片后，該枚鱗片下的蛇皮稱為單鱗蛇皮)色澤為棕黃色，具整齊分布的黑色斑點(diǎn)群。蛇體后段單鱗蛇皮色澤為紫黑色，斑點(diǎn)群呈塊狀或片狀，密集。腹部呈淡藍(lán)色，具雜亂分布的斑點(diǎn)群。見圖2、圖3。

注：A．甲組飲片蛇皮；B.乙組飲片蛇皮；C.丙組飲片蛇皮；D.丁組飲片蛇皮

圖1 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.2 四川產(chǎn)烏梢蛇微性狀特征 四川產(chǎn)烏梢蛇背部單鱗蛇皮呈紫黑色，色澤較湖南產(chǎn)烏梢蛇深。其腹部與湖南產(chǎn)烏梢蛇相似，呈淡藍(lán)色，具雜亂分布的斑點(diǎn)群。見圖2、圖3。

3.2.3 灰鼠蛇微性狀特征 灰鼠蛇單鱗蛇皮均呈黃色或淡黃色，單鱗蛇皮邊緣亦為黑色，角隅處尤其明顯。國產(chǎn)灰鼠蛇背部單鱗蛇皮中央具稀少黑色斑點(diǎn)。進(jìn)口灰鼠蛇背部單鱗蛇皮中央斑點(diǎn)群分布密集，腹部單鱗蛇皮均呈黃色。見圖2、圖3。

3.2.4 滑鼠蛇微性狀特征 滑鼠蛇背部橫紋處單鱗蛇皮呈黑色；無橫紋處單鱗蛇皮呈淡黃色，具雜亂分布斑點(diǎn)群。其腹部單鱗蛇皮呈黃白色或黃色，具片狀的斑團(tuán)塊。見圖2、圖3。

3.2.5 赤鏈華游蛇微性狀特征 赤鏈華游蛇背部單鱗蛇皮呈黑色；腹部單鱗蛇皮呈紅色或黑色；背部與腹部均無斑點(diǎn)群。見圖2、圖3。

3.2.6 白鏈蛇微性狀特征 白鏈蛇背部單鱗蛇皮呈白色或黑色，無斑點(diǎn)群。其腹部呈黃色，具斑團(tuán)塊，稀少。見圖2、圖3。

3.2.7 舟山眼鏡蛇微性狀特征 舟山眼鏡蛇頸部白色斑紋處單鱗蛇皮具黑色斑點(diǎn)。背部單鱗蛇皮呈棕黃色，具整齊分布的黑色斑點(diǎn)群；背部白色橫紋處微性狀特征與眼鏡狀白色斑紋處一致；頸腹部白斑紋處單鱗蛇皮呈棕黃色；腹部單鱗蛇皮呈棕黃色。見圖2、圖3。

注：A.湖南產(chǎn)烏梢蛇；B.四川產(chǎn)烏梢蛇；C.國產(chǎn)灰鼠蛇；D.進(jìn)口灰鼠蛇；E.滑鼠蛇；F.赤鏈華游蛇；G.白鏈蛇；H.舟山眼鏡蛇

注：A.湖南產(chǎn)烏梢蛇；B.四川產(chǎn)烏梢蛇；C.國產(chǎn)灰鼠蛇；D.進(jìn)口灰鼠蛇；E.滑鼠蛇；F.赤鏈華游蛇；G.白鏈蛇；H.舟山眼鏡蛇

圖3 烏梢蛇及偽品腹部微性狀特征

4 討論

烏梢蛇腹部單鱗蛇皮均呈淡藍(lán)色，具雜亂分布的斑點(diǎn)群。其背部單鱗蛇皮分兩種情況，湖南產(chǎn)烏梢背部中央縱線處單鱗蛇皮呈黃色，其余均為紫黑色。四川產(chǎn)烏梢蛇背部單鱗蛇皮呈紫黑色，顏色較湖南產(chǎn)烏梢蛇深。而烏梢蛇偽品微性狀特征與烏梢蛇差別較大。見表2。

表2 市售烏梢蛇及其常見偽品微性狀特征分種檢索表

1.單鱗蛇皮無斑點(diǎn)群。

2.背部單鱗蛇皮呈白色或黑色，腹部呈黃色，具斑團(tuán)塊，稀少

白鏈蛇Dinodon septentrionalis (Gunthe)

2.背部單鱗蛇皮呈黑色；腹部單鱗蛇皮呈紅色或黑色

首先，功能分區(qū)時(shí)充分考慮自然資源條件、環(huán)境狀況、地理區(qū)位、開發(fā)利用現(xiàn)狀和相關(guān)規(guī)劃，并結(jié)合社會經(jīng)濟(jì)和可持續(xù)發(fā)展的需要，圍繞主導(dǎo)功能及國防安全需要，依據(jù)選劃原則進(jìn)行劃分功能區(qū)[11]。其次，保護(hù)與開發(fā)活動(dòng)合理安排目的在于確保對海洋公園的持續(xù)利用，實(shí)現(xiàn)對關(guān)鍵或代表性生境、生態(tài)系統(tǒng)及生態(tài)過程的保護(hù)，隔離互相沖突的人類開發(fā)活動(dòng)。在實(shí)現(xiàn)部分資源合理利用的同時(shí)，保護(hù)海域的自然及文化景觀，將人類活動(dòng)的不良影響降至最低。

赤鏈華游蛇Sinonatrix annularis (Hallowell)

1.單鱗蛇皮有斑點(diǎn)群。

3.腹部單鱗蛇皮呈淡藍(lán)色，具雜亂分布斑點(diǎn)群

烏梢蛇Zaocys dhumnades (Cantor)

3.腹部單鱗蛇皮呈黃色或棕黃色，無斑點(diǎn)群。

4.背部單鱗蛇皮呈棕黃色，具整齊分布的黑色斑點(diǎn)群

舟山眼鏡蛇Naja naja atra Cantor

4.背部單鱗蛇皮呈黃色或黑色，具雜亂分布的黑色斑點(diǎn)群。

5.背部單鱗蛇皮邊緣為黑色，角隅處尤其明顯

計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)安全防護(hù)是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，計(jì)算機(jī)病毒層出不窮，防不勝防。在構(gòu)筑計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)信息安全防護(hù)體系上，數(shù)據(jù)備份是必不可少的環(huán)節(jié)。數(shù)據(jù)備份分為三個(gè)層次：硬件級、軟件級和人工級

灰鼠蛇Ptyas korros (Schlegel)

5.背部單鱗蛇皮橫紋處呈黑色；無橫紋處呈淡黃色

白鏈蛇Dinodon septentrionalis (Gunthe)

烏梢蛇作為臨床常用動(dòng)物類中藥，因其市場需求量大，價(jià)格昂貴，使得市場上混偽品種類繁多。經(jīng)筆者調(diào)查收集，研究鑒定出有灰鼠蛇、滑鼠蛇、赤鏈華游蛇、白鏈蛇、舟山眼鏡蛇等混偽種類。通過微性狀鑒別研究發(fā)現(xiàn)：四川產(chǎn)和湖南產(chǎn)烏梢蛇體背的單鱗蛇皮均呈紫黑色，腹部均呈淡藍(lán)色，具雜亂分布的斑點(diǎn)群，且湖南產(chǎn)烏梢蛇中央縱線處為黃棕色，具整齊分布的黑色斑點(diǎn)群。而偽品的微性狀特征與之相比差異較大。微性狀鑒別方法可有效且精準(zhǔn)地鑒別烏梢蛇的真?zhèn)?，彌補(bǔ)傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別的不足，且簡單便捷，值得推廣。