王沖，邱衛(wèi)強(qiáng)

（駐馬店市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，河南 駐馬店 463000）

乳腺癌（breast cancer,BC）為女性常見惡性腫瘤之一，近年來(lái)該病在女性中發(fā)病率逐年上升，且有年輕化趨勢(shì)，研究顯示乳腺癌平均發(fā)病年齡為45.8歲,其發(fā)病率與病死率分別為每年11.19/10萬(wàn)及9.97/10萬(wàn)左右[1]。選擇特異性腫瘤分子標(biāo)志物，以建立靈敏高效的檢測(cè)方法是提高乳腺癌診療水平、改善患者預(yù)后的關(guān)鍵，其中受體O型蛋白酪氨酸磷酸酶 （protein epidermal growth factor receptor,PTPRO）為細(xì)胞增殖分化、代謝、細(xì)胞與細(xì)胞間通訊、基因轉(zhuǎn)錄及細(xì)胞存活等重要信號(hào)通路的媒介，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、分裂周期、癌基因轉(zhuǎn)化等多種生物學(xué)過(guò)程[2,3]。表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth foctor receptor 2,HER2）則是具有絡(luò)氨酸激酶活性的細(xì)胞跨膜受體糖蛋白,與乳腺癌異常增生、局部浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[4]。激活的STAT蛋白抑制因子 （protein inhibitor of activated STAT，PIASy）同眾多轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生作用，參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控與細(xì)胞信號(hào)通路調(diào)控,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中有重要功能[5]。本文主要分析乳腺癌患者中PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水平及其臨床意義,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月至2018年4月我院收治的乳腺癌患者56例，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均為單側(cè)乳腺病變，且有明確的病理學(xué)確診結(jié)果；⑵未接受放化療或內(nèi)分泌治療；⑶接受乳腺癌根治術(shù)、改良根治術(shù)或保乳手術(shù),腋窩淋巴結(jié)清掃數(shù)目超過(guò)10個(gè)，對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴其他部位乳腺轉(zhuǎn)移癌或雙側(cè)乳腺癌者；⑵已行新輔助化療、放療或內(nèi)分泌治療者；⑶合并其他惡性腫瘤或重心血管疾病。年齡26～73歲，平均（49.15±5.08）歲；TNM 分期：Ⅰ期 11 例，Ⅱ期 26例，Ⅲ期19例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及處理 取乳腺癌患者的乳腺癌癌組織、癌旁組織（距離乳腺癌組織邊緣5 cm以上，均經(jīng)病理證實(shí)為無(wú)癌變標(biāo)本）。對(duì)采集的標(biāo)本以4%中性甲醛緩沖液固定,石蠟包埋后,切片成4 μm/片,以0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液抗原熱修復(fù)，依據(jù)EnVision二步法 （試劑盒購(gòu)自上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司）進(jìn)行染色，PTPRO與HER2抗體工作濃度均為1：100，應(yīng)用DAB（試劑盒購(gòu)自中山金橋生物有限公司）顯色，蘇木素對(duì)比染色，透明封固，后以鼠抗人即用型單克隆抗體血清（上海麥莎公司）作為代替對(duì)照，PBS代替一抗作為空白對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判讀PTPRO及PIASy細(xì)胞漿及細(xì)胞核出現(xiàn)明顯黃色至棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞信號(hào)，采用染色強(qiáng)度（0～3 分）、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（0～4 分）與兩者積分乘積的半定量計(jì)數(shù)法,最后得分1～3分為陰性，＞3分為陽(yáng)性。HER2：陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜，細(xì)胞膜無(wú)染色或≤10%的腫瘤細(xì)胞染色為陰性；＞10%腫瘤細(xì)胞呈弱染色,且細(xì)胞膜染色不完整，為陰性（+）；＞10%細(xì)胞呈弱至中度染色，細(xì)胞膜染色輕至中度完整，為弱陽(yáng)性（++），＞10%腫瘤細(xì)胞呈細(xì)胞膜強(qiáng)染色為陽(yáng)性（+++），弱陽(yáng)性及陽(yáng)性占比之和為HER2陽(yáng)性率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以%表示，采取χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水平 乳腺癌患者癌組織PTPRO陽(yáng)性率低于癌旁組織,而HER2、PIASy陽(yáng)性率高于癌旁組織，P＜0.05。見表1、圖1。

表1 PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水[n(%)]

圖1 PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水平

2.2 PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR陰性表達(dá)者PTPRO陽(yáng)性率高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR陽(yáng)性表達(dá)者，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、PR陽(yáng)性表達(dá)者的HER2陽(yáng)性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、PR陰性表達(dá)者，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者PIASy陽(yáng)性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，P＜0.05。見表2。

表2 PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

3 討論

最新癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,乳腺癌在國(guó)內(nèi)女性中發(fā)病率位居腫瘤首位，死亡率占第4位，早期診斷為提高乳腺癌患者生活質(zhì)量的重要手段[6]。PTPRO為新發(fā)現(xiàn)的潛在抑癌基因,作為蛋白絡(luò)氨酸激酶PTPs家族成員，PTPRO基因啟動(dòng)子甲基化在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,同乳腺癌預(yù)后有密切關(guān)系，可作為獨(dú)立的預(yù)后生物學(xué)指標(biāo)[7]。HER2也是參與乳腺癌病理進(jìn)展的重要因子，HER2過(guò)度表達(dá)可能在乳腺癌異常增生、致瘤性及局部浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要促進(jìn)作用[8]。PIASy則是一種可抑制信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活蛋白轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)，研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)乳腺癌具有較高的診斷靈敏度與準(zhǔn)確度[9]。

本研究以癌旁組織作為對(duì)照,發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者癌組織PTPRO陽(yáng)性率低于癌旁組織,而HER2陽(yáng)性率高于癌旁組織，這與李文梅等[10]的報(bào)道結(jié)果相似,表明在乳腺癌患者中,PTPRO呈低表達(dá),而HE R2呈高表達(dá)狀態(tài)。PTPRO為受體型蛋白絡(luò)氨酸磷酸酶家族重要成員,該基因定位于人染色體12p1 2-p13,編碼全長(zhǎng)由1215個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),包含1個(gè)由8個(gè)fibronec-tinⅢ樣結(jié)構(gòu)域重復(fù)構(gòu)成的胞外區(qū)，1個(gè)跨膜區(qū)，1個(gè)由活性催化區(qū)及活性調(diào)節(jié)區(qū)構(gòu)成的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域[11]，在細(xì)胞周期中，受E2F1及miR-17-92協(xié)同調(diào)控，參與調(diào)節(jié)神經(jīng)發(fā)育、腎臟結(jié)構(gòu)與功能、單核巨噬細(xì)胞分化、淋巴細(xì)胞增殖與腫瘤形成[12,13]，HER2則定位于人染色體17q21，參與細(xì)胞生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程,若乳腺癌患者腫瘤細(xì)胞中HER2高表達(dá)，則會(huì)刺激細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移，因此在乳腺癌患者中HER2高表達(dá)，可能與乳腺癌浸潤(rùn)、侵襲性增強(qiáng)、復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、藥物治療抵抗等有關(guān)聯(lián)[14]。本研究中癌組織的PIASy陽(yáng)性率也高于癌旁組織,這與朱杰等[15]的研究結(jié)果一致,表明在乳腺癌患者中PIASy呈高表達(dá)，PIASy蛋白最早是在STAT信號(hào)通路調(diào)控時(shí)發(fā)現(xiàn)的,其可抑制STAT蛋白轉(zhuǎn)錄活性，PIASy經(jīng)sumo化促進(jìn)p73蛋白酶體降解,高表達(dá)的PIASy可抑制p21轉(zhuǎn)錄，繼而調(diào)控p73α轉(zhuǎn)錄活性,在缺氧時(shí)PIASy途徑可抑制STRT1基因轉(zhuǎn)錄，繼而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。

此外本研究也進(jìn)一步對(duì)比了不同臨床病理患者上述指標(biāo)表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR陰性表達(dá)者PTPRO陽(yáng)性率高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR陽(yáng)性表達(dá)者,臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、PR陽(yáng)性表達(dá)者的HE R2陽(yáng)性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、PR陰性表達(dá)者，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者PIASy陽(yáng)性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,表明PTPRO、HER2、PIASy表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)有密切關(guān)系。PTPRO在腫瘤發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要抑制性調(diào)節(jié)作用的磷酸化酶,其表達(dá)下調(diào)會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移,第十七屆全國(guó)臨床腫瘤學(xué)大會(huì)[16]提出，PTPRO基因啟動(dòng)子甲基化在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,可能與乳腺癌預(yù)后有關(guān)，并將PTPRO基因甲基化作為乳腺癌臨床診斷的新穎而無(wú)創(chuàng)性分子生物學(xué)指標(biāo)。PIASy在缺氧環(huán)境下則能通過(guò)抑制SIRT1基因而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，HER2也參與乳腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過(guò)程,因此HER2、PIASy的激活也是乳腺癌發(fā)展的潛在因素。

綜上所述，乳腺癌患者癌組織中PTPRO低表達(dá)，HER2、PIASy呈高表達(dá),三者與臨床病理參數(shù)均有一定關(guān)聯(lián)，可對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，指導(dǎo)臨床醫(yī)師制定個(gè)體化治療方案，提高乳腺癌的整體診療水平。