黃文達(dá)，王晟，劉維亞

（1.惠陽三和醫(yī)院檢驗科，廣東 惠州 516000；2.葛洲壩集團中心醫(yī)院檢驗科，湖北 宜昌 443002）

肌酸激酶（CK）和肌酸激酶MB同工酶（CKMB）在臨床上是心肌受損的常用酶學(xué)指標(biāo)[1]，CKMB是CK的亞型之一，因此從理論上來說CK-MB的活性肯定是小于CK的。在實驗室經(jīng)常會遇到CK與CK-MB結(jié)果不相符合的情況，CK結(jié)果在正常范圍，而CK-MB的檢測結(jié)果卻明顯偏高。這是由于CM-MB方法學(xué)局限所導(dǎo)致的[2,3]，但CK-MB遠(yuǎn)大于CK的情況較少[4]，筆者遇到一例，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 資料 2016年12月18日將送檢的生化樣本3500r/min離心10min，然后立即上機檢測。CK-MB項目在貝克曼庫爾特AU680生化分析儀使用廣州科方免疫抑制法試劑進(jìn)行檢測，嚴(yán)格按照試劑說明書執(zhí)行，采用因子校正，使用朗道質(zhì)控品,當(dāng)日質(zhì)控在控，血清標(biāo)本狀態(tài)正常，無脂濁、無溶血，可忽略溶血對結(jié)果的影響[5]。臨床診斷疑心肌梗塞。檢測結(jié)果為 CK：845U/L，CK-MB：5736U/L，直接復(fù)查結(jié)果相近（當(dāng)日其它結(jié)果無異常）。兩項結(jié)果嚴(yán)重不匹配，CK-MB結(jié)果極度異常！檢查此例反應(yīng)曲線，見圖1。發(fā)現(xiàn)檢測點21~27之間反應(yīng)產(chǎn)生吸光度變化 （OD）僅為0.0202，而儀器顯示OD竟為0.6862。仔細(xì)觀察過后發(fā)現(xiàn)圖1中從監(jiān)測點11點到14點吸光度急速上升，14點后趨于平緩。懷疑將讀數(shù)點前移，以11~14點作為反應(yīng)監(jiān)測點。

生化分析儀參數(shù)設(shè)置里 “Lag time check”，即“延遲時間檢查”，實際上就是讀數(shù)點的前移功能。在底物耗盡時反應(yīng)的前后不呈線性,讀點前移功能可以規(guī)避這個缺陷,那么儀器會把讀數(shù)點前面呈線性的部分作為計算讀點,經(jīng)過換算得出結(jié)果[6,7]。AU系列原配系統(tǒng)應(yīng)用參數(shù)補充說明，此功能僅限與Rate法項目,是指所有反應(yīng)組分加入以后至第一個讀數(shù)點之前的一段時間。也包括第一個讀數(shù)點在內(nèi)，至少有3個點才能進(jìn)行線性判斷。這是儀器觸發(fā)“延遲時間檢查”功能的前提條件，必須滿足這個判斷規(guī)則,該功能才能啟動，也就是讀數(shù)點前移，拓展了線性范圍，減少了復(fù)查率。主要應(yīng)用在檢測發(fā)生底物耗盡，反應(yīng)提前結(jié)束的Rate法項目，這個時候該項功能發(fā)揮到較好的作用[8]。

在設(shè)備參數(shù)設(shè)置里L(fēng)inearity Limit即線性區(qū)間，試劑說明書上有指出10%~30%不等，一般情況下原裝試劑15%，非原裝試劑25%。Rate法即連續(xù)監(jiān)測法,在反應(yīng)開始到反應(yīng)結(jié)束都會有吸光度的變化，在整個過程中檢測的OD值就是監(jiān)測點，每點間隔18s。速率法在測試的過程中都必須建立在線性范圍內(nèi)[9]。點與點之間OD值的變化不能超過設(shè)定的范圍(線性范圍)，否則儀器就會有報警信息提示。同時讀點間的OD區(qū)間是來判斷選取的讀點間的反應(yīng)是否在線性范圍內(nèi)，如果不在范圍內(nèi)，結(jié)果不可信，必須稀釋復(fù)查。同樣如果啟用該功能，那么啟用后所選取的讀點間的OD區(qū)間也必須在設(shè)定的線性范圍內(nèi),否則因讀點前移所得結(jié)果也是不可信。因此OD區(qū)間不是作為“延遲時間檢查”啟用的條件,而是作為判斷讀點是否在要求線性范圍內(nèi)。

那么導(dǎo)致這么高的結(jié)果是否是因為啟用 “延遲時間檢查”功能呢？關(guān)閉此功能就能知道。

1.2 方法 對當(dāng)日所有含有CK-MB檢測項目的標(biāo)本分別在開啟和關(guān)閉“延遲時間檢查”功能的情況進(jìn)行復(fù)查，將所選取的標(biāo)本按順序編號分為兩批，手工編輯在AU680上機檢測,再將其結(jié)果進(jìn)行對比。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果 在開啟和關(guān)閉“延遲時間檢查”復(fù)查，上述結(jié)果極端異常樣本結(jié)果分別為：開啟時5736U/L、關(guān)閉時169U/L，其他含有CK-MB檢測項目的樣本結(jié)果一致。

2.2 原因分析 為何這例CK-MB在開啟和關(guān)閉“延遲時間檢查”功能情況下兩次檢測結(jié)果相差巨大呢？我們仔細(xì)對比分析了一下在開啟和關(guān)閉“延遲時間檢查”功能情況下兩次檢測反應(yīng)曲線圖。注：兩次都為同一標(biāo)本。

圖1 使用“延遲時間檢查”反應(yīng)曲線

圖2 未使用“延遲時間檢查”反應(yīng)曲線

從圖1中可以看到監(jiān)測點11點到14點處吸光度急速上升，14點后趨于平緩。從OD值來看，11-14點變化在整個反應(yīng)曲線中最大的，再來看看它是否符合線性判斷，21點是第一個讀數(shù)點，21點之前到11點有4個讀數(shù)點 （11～14且此段斜率明顯大于21～27點）滿足線性判斷（15～20點因與21～27點斜率相同故儀器自動否定），讀點前移符合條件啟動。從反應(yīng)原理來看,讀數(shù)點應(yīng)該在21～27之間。見圖2，關(guān)閉了“延遲時間檢查”功能從曲線和吸光度的變化來看21～27點幅度較小，最后計算的反應(yīng)OD和濃度都比較低，它計算的范圍也正是參數(shù)設(shè)置的OD區(qū)間(-2.0至2.0)。因此圖2所示檢測結(jié)果才是真實結(jié)果。

分別將11～14點和21～27點之間吸光度變化均換算到單位時間內(nèi),均與儀器顯示OD值相符。經(jīng)過多次測試后，測試的結(jié)果也相符，不是一次的偶然誤差導(dǎo)致。確定此例CK-MB出現(xiàn)異常高值正是因為在開啟“延遲時間檢查”功能帶來的讀數(shù)點前移，導(dǎo)致計算OD值發(fā)生變化。11～14點是懷疑血清中存在的顯色反應(yīng)的中間產(chǎn)物而導(dǎo)致的吸光度變化，不僅僅是CK-MB酶催反應(yīng)帶來的變化。

3 討論

“延遲時間檢查”功能僅適用于連續(xù)監(jiān)測法，但并不是適用Rate法的所有項目。在使用自建系統(tǒng)，應(yīng)用參數(shù)設(shè)置不夠嚴(yán)謹(jǐn)，此時進(jìn)行CK-MB項目檢測，一旦開啟“延遲時間檢查”功能，儀器計算出來的結(jié)果很有可能不是真實結(jié)果,極有可能因為干擾物反應(yīng)OD變化過大帶來極大的誤差，因此部分樣本的 CK-MB檢測不適合開啟 “延遲時間檢查”功能，故建議在該項目上關(guān)閉此功能。同時建議使用化學(xué)發(fā)光的方法測定CK-MB,能得出準(zhǔn)確的結(jié)果[10]。通過比較發(fā)現(xiàn)，此功能不適合在CK-MB檢測中使用，其他項目有待大家探討。任何方法學(xué)的確認(rèn)都必須建立在認(rèn)證的基礎(chǔ)上,方法學(xué)認(rèn)證需要在正確度，精密度，線性范圍，靈敏度等各方面的性能驗證。而部分非配套試劑CK-MB說明書的參數(shù)設(shè)置里明確標(biāo)出“YES”在這個功能上。經(jīng)查證原廠原裝試劑在這個項目上并沒有開啟這項功能。