★ 姜軍華 袁桂平* 袁恒懌（1.江西省藥品檢驗檢測研究院/江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心 南昌 33009；.南昌大學(xué)附屬中學(xué) 南昌 330047）

黑錫丹（heixidan，HXD）又名局方黑錫丹或二味黑錫丹［1-2］，始載于公元1132年許叔微《普濟本事方》［3-4］，后收載《江西省中藥炮制規(guī)范》［5］1991年版和《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》［6］（中藥成方制劑第13冊），是江西急救藥參茸黑錫丸等主要原料，具有鎮(zhèn)納元氣、回陽救厥、止喘降逆、止痛固澀，用于治療卒中風(fēng)、真陽暴脫、四肢厥冷、大汗不止、氣喘痰鳴、陰寒厥逆、猝然昏倒、頭痛眩暈、腹中冷痛、精液滑泄、赤白帶下等癥。

黑錫丹中藥飲片在江西、四川、湖南和兩廣等地使用歷史悠久，屬樟幫特色中藥飲片和獨特炮制工藝，在《江西省中藥炮制規(guī)范》1991年版和《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥成方制劑第13冊）中已有收載，未進(jìn)行炮制工藝技術(shù)參數(shù)和質(zhì)量規(guī)范化研究；同時，黑錫丹中藥飲片炮制組分中黑錫為鉛還是錫，另組分制硫黃為豆腐制，在實際炮制生產(chǎn)中?；煜疠^大爭議，導(dǎo)致產(chǎn)品安全性和臨床療效難以保證。因此，課題組為確證黑錫丹飲片的炮制組分黑錫為鉛還是錫，另組分制硫黃為豆腐制，進(jìn)行了黑錫丹中藥飲片的本草考證和炮制工藝研究，并對其所含51V、55Mn等9種無機元素分布情況進(jìn)行考察和測定，為研究黑錫丹飲片炮制機理和建立其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 本草考證

1.1 歷代本草考證 南《本草經(jīng)集注》［3］陶弘景曰：“即今化鉛所作胡粉也，而謂之粉錫，以與今乖?！?/p>

宋《普濟本事方》述：“黑鉛、硫黃各三兩，謂如硫黃與黑鉛各用三兩，即以黑鉛約八兩，銚內(nèi)（熔）化去滓，萓凈盡傾凈地上，再于銚內(nèi)（熔），以皮紙五重，撮四角如箱模樣，傾黑鉛在內(nèi)，柔取細(xì)者于絹上羅過，大抵即損絹，須連紙放地上，令稍溫，紙焦易之，下者居上，將粗鉛再（熔）再揉再羅，取細(xì)者盡為度，稱重三兩，即以好硫黃三兩研細(xì)拌鉛砂令勻，于銚內(nèi)用鐵匙不住攪，須文武火不緊不漫，俟相乳入，傾在凈（磚）上?！?/p>

宋《太平惠民和劑局方》［3］：“黑鉛（鉛水銀）：燒十遍與水銀結(jié)砂子，分為小塊，同甘草十兩，水煮半日，候冷取出研用。黑鉛：凡使，先以鐵銚炭火（熔）開，取出瀉于新瓦上、濾去渣腳，如此一兩番、取凈鉛秤用?！?/p>

宋《校注婦人良方》：“黑錫：去灰。”

明《外科正宗》：“黑鉛：鐵杓化開，傾入水中取起再化，如此百偏，以鉛盡為度，去水澄下者。”

明《景岳全書》：“黑錫：1.（熔）凈。2.去滓，炒末。黑鉛：水銀煎?！?/p>

明《證治準(zhǔn)繩》：“黒錫：去滓凈，稱與水銀結(jié)砂子。”

明《炮炙大法》：“鉛丹：即黃丹也，生鉛一味火煅研成細(xì)末，水飛過用。今貨者多以鹽消砂石雜之。凡用以水漂去消鹽，飛去砂石，澄干，微火炒紫色，地上去火毒入藥?！?/p>

明《本草綱目》李時珍曰：“鉛錫一類也，古人名鉛為黑錫，故名粉錫”“鉛丹：（1）飛炒?！獙O氏集效方；（2）按獨孤滔丹房鑒源云，炒鉛丹法：用鉛一斤，土硫黃十兩，消石一兩，鎔鉛成汁，下醋點之，滾沸時，下硫一塊，少頃下消少許，沸定再點醋，依前下少許消黃，待為末，則成丹矣。今人以作鉛粉不盡者，用消石、礬石炒成丹，若轉(zhuǎn)丹為鉛，只用連須蔥白汁拌丹慢煎，煅成金汁，傾出即還鉛矣。貨者多以鹽消砂石雜之，凡用以水漂去消鹽，飛去砂石，澄干，微火炒紫色，地上去火毒，入藥。會典云：黑鉛一斤，燒丹一斤五錢三分也?！?/p>

明《秘傳證治要訣及類方》：“黒錫：（二兩）鎔化，與硫黃（二兩）結(jié)成子?！?/p>

明《醫(yī)學(xué)入門》：“鉛丹：炒黃丹法，黑鉛一斤，土硫黃、硝石各一兩，先溶鉛成汁，下醋點之，滾沸時下黃一小塊，續(xù)下硝少許，沸定再點醋，依前下少許硝黃，已消沸定，黃亦盡，炒為末，成丹矣。入藥又炒令色變，細(xì)研水飛二遍?！?/p>

明《醫(yī)學(xué)綱目》：“錫：同水銀炒成砂子。黑鉛：同水銀炒，結(jié)沙。”

明《普濟方》：“黑錫：先鎔成汁，一丸，上漉去滓，再鎔再漉，三次取凈稱。黃丹：炒紅色，放下再紫色者為度。鉛粉：炒黑，細(xì)研。鉛丹：炒紫色?！?/p>

清《類證治載》：“黑鉛二兩、硫磺二兩，將錫溶化入硫磺，候結(jié)成片，傾地上出火毒，研至無聲為度（黑鉛丹）?！?/p>

清《修事指南》：“制鉛：李時珍曰：凡使鉛，需以鐵銚溶化，瀉瓦上濾去渣腳，如此數(shù)次，然后收用其黑錫灰，則以鉛沙取取黑灰，白錫灰不入藥?！?/p>

清《本草崇原》：“黑錫：去滓?！?/p>

清《本草必用》：“黑鉛：入丸藥用，鐵銚內(nèi)溶化，去滓腳用。”

清《嵩崖尊生全書》：“黑鉛：一錢五分，下鍋內(nèi)，再下水銀二錢，結(jié)成砂子。”

清《本草述》：“黑錫：去滓。黑錫：炒灰埋地中五日。”

清《本草崇原》：“黑錫：去滓?！?/p>

清《本草匯》：“黑錫（鉛）：溶化，濾去渣腳數(shù)次”［3］。

通過考證歷代主流本草著作，顯示古代臨床使用黑錫就是鉛，煉制成丹藥。黑錫丹中藥飲片炮制組分中黑錫也為鉛，而非錫。

1.2 現(xiàn)代考證 《礦物藥與丹藥》［2］記載：“原料：黑鉛二兩，硫黃二兩；制煉：將鉛放在鍋內(nèi)，置在生好炭火的爐上，加熱至300℃使鉛完全熔化，把硫黃徐徐加入，并用鐵鏟不斷攪拌，使其混合。并應(yīng)用米醋噴潑下去，火焰即熄，再起再潑。這樣邊燒、邊攪、邊潑，一直煉至鍋內(nèi)硫黃和鉛完全化合，結(jié)成沙狀、捏之即碎時即可取出，待冷研成極細(xì)末，用米糊做基質(zhì)，制成藥丸如梧桐子大。”

《江西省中藥炮制規(guī)范》（1991年版）［5］：“來源為堿式碳酸鉛［2PbCO8·Pb（OH）2］的粉末。藥材以色白細(xì)膩、無雜質(zhì)者為佳。炮制方法為取原藥，研成細(xì)粉?！?/p>

《對黑錫丹中“黑錫”的探討》［1］孫國安：“黑錫一藥， 實際上就是鉛的別名，《本草綱目》早已明確闡明：‘鉛易沿流， 故謂之鉛錫為白錫， 故此為黑錫?！?所以，對黑錫丹中所用的黑錫， 當(dāng)即是鉛毋庸疑議?！?/p>

《樟樹藥幫中藥傳統(tǒng)炮制法經(jīng)驗集成及飲片圖鑒》［7］范崔生：“炒黑錫：取凈鉛條或塊，置于干凈的鐵鍋內(nèi)，加熱使鉛熔化成熔融狀態(tài)；一人持裝有豆腐制硫黃細(xì)粉的長柄鐵勺，往鍋內(nèi)徐徐分3批加入等量的豆腐制硫黃細(xì)粉，另一人用長柄鐵鏟在鍋內(nèi)不停地攪拌與翻動，直到鍋內(nèi)過量的硫黃散失、黃煙逐漸減少、藥物呈均勻灰藍(lán)色或砂粒狀”。

現(xiàn)代文獻(xiàn)考證也顯示：黑錫就是鉛，黑錫丹中藥飲片炮制組分中黑錫也為鉛，與制硫黃共同炮制而成。下一步課題組將從黑錫丹中藥飲片炮制離子價態(tài)和化合物來測定鉛和錫中Pb和Sn兩者差異，來研究黑錫丹的炮制組分、機理和安全性，為臨床急救藥提供科學(xué)數(shù)據(jù)。

2 黑錫丹炮制工藝研究

2.1 炮制組分準(zhǔn)備 稱取一份鉛和一份錫，一份制硫黃和半份制硫黃（制硫黃采取樟幫傳統(tǒng)的豆腐制法，將硫黃與豆腐同煮至豆腐顯黑綠色、浮起、具巢眼，即得）。

2.2 炮制工藝確定 取一份鉛和一份錫，分別與一份制硫黃和半份制硫黃在特制的煉制爐具上進(jìn)行組合逐一對比加熱炮制，待黃色煙霧散凈，無嗆鼻，停止加熱，出鍋放冷，檢查成品外觀性狀和手感情況，結(jié)果：一份鉛和一份制硫黃炮制產(chǎn)品經(jīng)樟幫傳統(tǒng)炮制老師傅判定，非常符合傳統(tǒng)和臨床的質(zhì)量要求，最后炮制工藝結(jié)合本草考證和老師傅實際炮制，確定為稱取一份鉛和一份制硫黃，在特制的煉制爐具上不斷加熱炮制，至黃色煙霧散凈，無嗆鼻，產(chǎn)品呈靈活狀態(tài)，即得。

2.3 研制樣品生產(chǎn) 取錫或鉛各1kg，分別與制硫黃1kg，加熱炮制，至產(chǎn)品呈靈活狀態(tài)，符合要求，即得科研產(chǎn)品。6批科研產(chǎn)品：錫1kg與制硫黃1kg炮制樣品，批號分別為20160708-1、20160708-2、20160708-3；鉛1kg與制硫黃1kg炮制樣品，批號分別為20160801-1、20160801-2、20160801-3。樣品形態(tài)見圖1。

圖1 樣品形態(tài)

3 無機元素的含量測定

3.1 測定儀器與材料 電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（Agilent7700，美國Agilent公司），微波消解儀（Mars6 Classic，美國CEM 公司）。超純水儀（Mill-Q，美國 Millipore公司）Sartorius BT 25S、BSA124S-CW電子天平（德國Sartorius公司）。ICP-MS Internal Std Mix（含 Bi、Ge、In、Rh、Sc、Tb濃度為100μg/mL）（美國安捷倫科技股份有限公司），Initial Caliration Verification Standard（含51V、55Mn、59Co、60Ni、63Cu、66Zn、75As、82Se、111Cd等元素，濃度均為10μg/mL Lot2-24MKBY2）（美國安捷倫科技股份有限公司），硝酸：fluka（Lot：BCBQ9345V），超純水。

3.2 方法與結(jié)果 本實驗采用微波消解法，ICPMS測定黑錫丹中藥飲片樣品中51V、55Mn等9種無機元素含量［8-11］。

3.2.1 實驗條件 儀器工作條件 射頻功率：1600W；S/C溫度：2℃；碰撞氣：氦氣；載氣：氬氣；載氣流量：0.79L/min；積分時間：0.3s；等離子氣流量：15L/min；采樣錐孔徑：1.0mm；截取錐孔徑：0.4mm；采樣深度：7.8mm；數(shù)據(jù)采集重復(fù)次數(shù)3次。

微波消解程序 消解功率為：1400W，25min內(nèi)由室溫升溫至190℃，保持25min。

3.2.2 溶液的制備 混合內(nèi)標(biāo)工作溶液制備 精密量取1mL混合內(nèi)標(biāo)溶液，置100mL量瓶中，用2%硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取5mL混合對照溶液，置50mL量瓶中，用2%硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1μg/mL的混合對照儲備溶液。精密量取混合對照儲備溶液0.16，0.32，0.48，0.8，2.4，4.8，10.0mL，分別置100mL量瓶中，用2%硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品濃度為1.6、3.2、4.8、8、24、48、100μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

供試品溶液的制備 取HXD樣品約0.1g，精密稱定，至聚四氟乙烯微波消解罐中，精密加入硝酸7mL，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，浸泡過夜（14h），置于微波消解儀中，按2.3.1”項下微波消解程序進(jìn)行消解，放冷，120℃趕酸儀中加熱至紅棕色蒸氣揮盡，放冷，用水轉(zhuǎn)移至50mL塑料量瓶并用水稀釋至刻度，搖勻，即得。另取相同體積的硝酸，同法制成樣品空白溶液。

內(nèi)標(biāo)元素的選擇 選取各元素合適的同位素質(zhì)量數(shù)，其中51V、55Mn以45Sc作為內(nèi)標(biāo)，59Co、60Ni、63Cu、66Zn、75As、82Se以72Ge作 為 內(nèi) 標(biāo)，111Cd以115In作為內(nèi)標(biāo)。

3.2.3 方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察 取“3.2.2”項下的混合對照溶液，按“3.2.1”項下ICP-MS條件進(jìn)行測定，內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣管始終插入混合內(nèi)標(biāo)溶液中，以混合對照溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），以待測元素響應(yīng)值與對應(yīng)的內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值的比值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)回歸方程，結(jié)果見表1。

檢測限考察 取“3.2.2”項下空白對照溶液適量，按“3.2.1”項下ICP-MS條件重復(fù)進(jìn)樣測定11次，記錄儀器響應(yīng)值并計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，以3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差對應(yīng)的各待測元素質(zhì)量濃度作為檢測限，結(jié)果見表1。

表1 9種待測元素的線性回歸方程、檢出限

精密度試驗 取“3.2.2”項下混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度均為 48μg/L），按“3.2.1”項下 ICP-MS條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄儀器響應(yīng)值。結(jié)果51V、55Mn、59Co、60Ni、63Cu、66Zn、75As、82Se、111Cd各元素的 RSD 分別為 0.76，0.90，1.53，2.20，1.95，1.37，1.19，3.37，0.83%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗 取HXD樣品（20160708-1）溶液，室溫放置，每隔一定時間（0、2、4、8、12h）進(jìn)樣測定，記錄儀器響應(yīng)值，結(jié)果51V、55Mn、59Co、60Ni、63Cu、66Zn、75As、82Se、111Cd 各元素的 RSD 分別為 0.82，1.32，1.73，2.41，1.78，1.57，1.65，3.21，0.97%（n=5），表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗 取HXD樣品（20160708-1）約0.1g，精密稱定，共6份，按“3.2.2”項下方法平行制備供試品溶液，測定，計算，結(jié)果各元素重復(fù)性RSD（n=6）分別為 0.69，1.89，2.20，1.73，1.42，1.13，1.23，1.23，1.74%，表明本方法重復(fù)性良好。

回收率試驗 取HXD樣品（20160708-1）約0.05 g，共6份，精密稱定，精密加入硝酸7ml，分別精密加入濃度為10μg/mL混合對照溶液0.2mL，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，測定，計算 回 收 率，結(jié) 果51V、55Mn、59Co、60Ni、63Cu、66Zn、75As、82Se、111Cd各元素的平均回收率分別為 93.93，84.27，106.64，105.69，106.71，90.72，86.80，83.73，93.99%。

3.2.4 樣品中51V、55Mn等9種無機元素的測定 取6批HXD樣品，按“3.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“3.2.1”項下ICP-MS條件進(jìn)行測定樣品中9種無機元素，結(jié)果見表2。

表2 樣品中9種無機元素的測定結(jié)果（μg·g-1，n=2）

4 小結(jié)與討論

通過對黑錫丹中藥飲片的歷代主流本草著作和現(xiàn)代研究考證，厘清了歷代本草中黑錫就是鉛，鉛的別名，而非錫；同時鉛可內(nèi)服，一般用量0.9～1.5g，或外用適量，干撒或調(diào)敷患處；而錫有毒，不能內(nèi)服，僅外用，并避免用酒浸泡。進(jìn)一步確證了黑錫丹中藥飲片炮制組分中黑錫實為鉛，與制硫黃加熱炮制是符合歷史記載，正本清源，糾正了錯誤。

通過對黑錫丹中藥飲片采取原料鉛與制硫黃和原料錫與制硫黃兩種組分的樣品炮制工藝比較研究，結(jié)果表明采用原料鉛與制硫黃組分生產(chǎn)的成品外觀性狀和手感，非常符合傳統(tǒng)和臨床的質(zhì)量要求，確保產(chǎn)品安全和臨床有效。

采用ICP-MS法測定黑錫丹中藥飲片6批樣品中51V、55Mn等9種無機元素含量研究，9種無機元素在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r> 0.9900），平均回收率83.73%～106.71%；不同批次間所含元素種類無明顯差異，但含量有一定差異，但無顯著性差別。

建立了黑錫丹中藥飲片中51V、55Mn等9種無機元素的測定方法，測定的元素包含微量元素和重金屬及有害元素，方法簡便易操作，靈敏度高，準(zhǔn)確性高，為進(jìn)一步研究規(guī)范黑錫丹飲片炮制工藝和控制產(chǎn)品質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。同時，測定的51V、55Mn等9種無機元素含量結(jié)果顯示：錫原料黑錫丹的51V、63Cu、75As、82Se和111Cd的量明顯高于鉛原料的黑錫丹，說明黑錫丹中藥飲片炮制組分中黑錫用鉛與制硫黃加熱炮制是可行的，更印證了古籍對黑錫丹原料的記載。

因課題注重傳承研究，黑錫丹仍采用傳統(tǒng)的炮制方法，以老藥工師傅的經(jīng)驗來把控產(chǎn)品質(zhì)量，其中炮制的加熱時間、混合兩種原料的時間、次數(shù)、加熱溫度等未進(jìn)行研究，下一步將與老藥工師傅共同對黑錫丹炮制的加熱時間、混合兩種原料的時間、次數(shù)、加熱溫度等進(jìn)行深入探討和摸索，以期達(dá)到更好地控制黑錫丹炮制技術(shù)、規(guī)范炮制工藝、細(xì)化各項炮制參數(shù)，以使黑錫丹炮制更具有工藝重復(fù)性和質(zhì)量可控性。

黑錫丹屬礦物類中藥飲片，其含總Pb量較大。為科學(xué)客觀表征中藥傳統(tǒng)炮制特色，剖析黑錫丹炮制機理，下一步將從離子價態(tài)和化合物來測定鉛和錫中Pb和Sn兩者差異。