高效液相和紅外光譜法分析檢測培養(yǎng)基殘基中的蟲草素

李澤亞 杜天宇 畢磊 張虎成

[摘?要]?用高效液相 HPLC和紅外線光譜法IR鑒定蛹蟲草培養(yǎng)基殘基中的蟲草素，結(jié)果表明，HPLC檢測波長為259 nm，梯度洗脫程序：0～20 min，2%～100%甲醇，流速為1 mL/min，進樣量20 μL，線性關系良好，保留時間為9.1 min。用紅外光譜儀在4 000～

450 cm-1范圍內(nèi)掃描蟲草素結(jié)晶體，所測晶體具備的官能團與蟲草素的相一致，實驗所得出的結(jié)晶物結(jié)構與蟲草素結(jié)構相符。結(jié)論：本檢測方法能確保蟲草素分離提取的質(zhì)量。

[關鍵詞]?高效液相;紅外光譜;蟲草素

[中圖分類號]?O 657.72??[文獻標志碼]?A??[文章編號]?1005-0310（2020）02-0084-04

Determination of Cordycepin in the Residue of Culture Medium by HPLC and IR

Li Zeya， Du Tianyu， Bi Lei， Zhang Hucheng

（Beijing Polytechnic， Beijing 100176， China）

Abstract： Cordycepin in Cordyceps militaris culture medium residue was identified by HPLC and IR. The mobile phase 2% ～100% methanol with the flow rate 1 mL/min was preceded in 0～20 min at 259 nm wavelength for detection. The linear relationship was good， and the retention time was 9.1 min. The crystal of cordycepin was scanned with infrared spectrometer in the range of 4 000～450 cm-1. The functional groups of the crystal were consistent with those of cordycepin， and the crystal structure of the crystal was consistent with that of cordycepin. The above methods can ensure the quality of extraction of cordycepin.

Keywords： HPLC; IR; Cordycepin

[收稿日期]?2019-12-20

[基金項目]?北京市教師隊伍建設-職業(yè)院校素質(zhì)提高工程（PXM2018_014306_000057/2）。

[作者簡介]?李澤亞（2000—），女，北京市人，北京電子科技職業(yè)學院學生，主要研究方向為次級代謝產(chǎn)物分離;杜天宇（2000—），男，北京市人，北京電子科技職業(yè)學院學生，主要研究方向為次級代謝產(chǎn)物分離;畢磊（2001—），男，北京市人，北京電子科技職業(yè)學院學生，主要研究方向為次級代謝產(chǎn)物分離。

[通訊作者]?張虎成（1977—），男，湖北宜城人，北京電子科技職業(yè)學院副教授，博士，主要研究方向為微生物次級代謝產(chǎn)物。E-mail：huchengzh@aliyun.com

0?引言

蟲草素（cordycepin）是一種腺苷類似物，化學名稱為3′-脫氧腺苷，分子式為C10H13O3N5，分子量為251，紫外光最大吸收波長為 259 nm。蟲草素晶體為針狀或片狀結(jié)晶，熔點230～231 ℃，溶于水、熱乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿等。

蟲草素是蛹蟲草（Cordyceps militaris）主要活性成分之一，具有抗菌[1]、抗病毒[2]、抗氧化[3]、顯著抑制多種腫瘤生長[4]、細胞毒性和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性作用[5-8]，在科研、醫(yī)藥和商業(yè)上具有重要價值。目前，蟲草素主要從天然及人工培養(yǎng)的蛹蟲草體內(nèi)提取，數(shù)量有限，極大制約了其廣泛應用。研究表明，人工蛹蟲草培養(yǎng)基殘基含有蟲草素[9]，從殘基中提取蟲草素，可以變廢為寶，提高產(chǎn)業(yè)的附加值。

蟲草素的提取大多采用索式提取法、超聲法、熱水浸提法、大孔吸附樹脂、離子交換法、氧化鋁提取法等方法[10-13]，但快速檢測和鑒定蟲草素一直制約著蟲草素分離提取工藝，本研究擬以大孔吸附樹脂AB-8分離提取蟲草素，并采用HPLC快速檢測蟲草素，以及利用紅外光譜鑒定蟲草素。

1?材料與方法

1.1?材料

人工蛹蟲草小麥培養(yǎng)基殘基（某公司）;蟲草素標準品（SIGMA）;甲醇（色譜純）;無水乙醇（分析純）;純凈水。AB-8大孔吸附樹脂（北京綠白草生物科技有限公司）。其他試劑為國藥集團化學試劑有限公司。

1.2?儀器

電熱恒溫水浴鍋（上海躍華醫(yī)療器械廠 HHS-4S型）。高效液相色譜儀HPLC（Agilent HPLC 1200）;粉碎機（皇代小型粉碎機，800Y）; Satoris天平（BT25S）;日本東京理化EYELA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號：N-1100D-WD）;冷卻水循環(huán)裝置（上海愛朗儀器有限公司，型號：CA-1111）;新芝超聲波清洗儀（寧波新芝生物科技股份有限公司，SB-5200DTD）;紫外核酸蛋白檢測儀（上海琪特分析儀器有限公司，AT-88A）。

[3]?OLATUNJI O J， FENG Y， OLATUNJI O O， et al. Cordycepin protects PC12 cells against 6-hydroxydopamine induced neurotoxicity via its antioxidant properties[J]. Biomed Pharmacother， 2016（81）：7-14.

[4]?CHO S H， KANG I C. The inhibitory effect of Cordycepin on the proliferation of cisplatin-resistant A549 lung cancer cells[J]. Biochem Biophys Res Commun， 2018， 498（3）： 431-436.

[5]?王雅玲，王亮，金黎明. 蟲草素藥理學研究進展[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2008， 19（11）： 2667-2668.

[6]?康冀川，康超，文庭池，等. 蟲草菌素藥理學研究進展[J]. 菌物學報，2011， 30（2）： 191-197.

[7]?YONG T Q， CHEN S D， XIE Y Z， et al. Cordycepin， a characteristic bioactive constituent in Cordyceps militaris， ameliorates hyperuricemia through URAT1 in hyperuricemic mice[J]. Front Microbiol. 2018（9）： 58.

[8]?KAN H L， WANG Y， WANG D X， et al. Cordycepin rescues lidocaine-induced neurotoxicity in dorsal root ganglion by interacting with inflammatory signaling pathway MMP3[J].Eur J Pharmacol，2018（827）： 88-93.

[9]?王雅玲，孫力軍，趙軼男，等. 蛹蟲草大米培養(yǎng)殘基中蟲草素提取方法的優(yōu)化研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2009， 37（8）： 3364-3366.

[10]?王英娟，李多偉，王義潮，等. 蛹蟲草中蟲草素、蟲草多糖綜合提取工藝研究[J]. 西北植物學報，2005， 25（9）： 1863-1867.

[11]?劉靜明，鐘裕容，楊智，等. 蛹蟲草化學成分研究[J]. 中國中藥雜志，1989， 14（10）： 32-33.

[12]?張虎成， 范海濤，王曉杰，等. 大孔吸附樹脂AB-8 和十八烷基硅膠色譜分離純化蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素工藝研究[J]. 菌物學報， 2015， 34（3）：490-498.

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（責任編輯?李亞青）