王彬瑾，李制一，張凝，李斯，林桂芬，周利民，范志剛

1.海南醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，海南 ?？?571199；

2.海南職業(yè)技術(shù)學(xué)院，海南 海口 570100；

3.海南醫(yī)學(xué)院科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，海南 ?？?571199

菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)(Capillaria philippinensis)又稱(chēng)腸毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)，可感染人體導(dǎo)致腸毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)病(intestinal capillariasis)[1]。2010年，海南省儋州市發(fā)現(xiàn)一例感染菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)病例[2]。2015 年4 月至2016 年9 月?？谑袇^(qū)菜市場(chǎng)淡水魚(yú)腸的調(diào)查未發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)[3-5]。為了解海南其他市縣的相關(guān)情況，2016 年11～12 月本課題組結(jié)合本省主要河流南渡江、昌化江、萬(wàn)泉河等的流經(jīng)地區(qū)和出海口情況選取采集點(diǎn)，對(duì)瓊海市、陵水黎族自治縣(陵水縣)、樂(lè)東黎族自治縣(樂(lè)東縣)城區(qū)菜市場(chǎng)的淡水魚(yú)及活禽腸道內(nèi)感染菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)情況進(jìn)行了調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣本采集 從海南省瓊海市、陵水縣、樂(lè)東縣城區(qū)菜市場(chǎng)采集鳙魚(yú)、羅非魚(yú)和鴨類(lèi)樣本。鳙魚(yú)、羅非魚(yú)、鴨類(lèi)的市面售賣(mài)價(jià)分別為25～30元/尾、4～10元/尾、60～70 元/只。新鮮樣本進(jìn)行相應(yīng)處理，淡水魚(yú)采集其魚(yú)腸(含腸道內(nèi)容物)，禽類(lèi)采集其糞便。采集的樣本分別裝于干凈封口袋，標(biāo)明種類(lèi)、編號(hào)，放置冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室當(dāng)天檢查。

1.2 檢查方法

1.2.1 魚(yú)腸及腸道內(nèi)容物檢查 采集的魚(yú)腸樣本用鑷子反復(fù)刮取2～3次得到分離的腸道內(nèi)容物與魚(yú)腸，分離出的腸道內(nèi)容物、魚(yú)腸按照編號(hào)分別置于相應(yīng)的培養(yǎng)皿、燒杯中。適量生理鹽水加于裝有腸道內(nèi)容物的培養(yǎng)皿中，混合均勻，直接涂片并記為“糞便”組；50 目鋼篩過(guò)濾含有生理鹽水的腸道內(nèi)容物混合液，濾液2 000 r/min離心10 min，取離心沉淀物進(jìn)行生理鹽水涂片，記為“糞便離心”組。燒杯中的魚(yú)腸用外科手術(shù)剪縱向剖開(kāi)，觀(guān)察并記錄剖開(kāi)的腸壁有無(wú)病變或穿孔，刮取魚(yú)腸腸壁黏膜及附著物，用適量生理鹽水將刮取的物質(zhì)與魚(yú)腸一同浸泡于相應(yīng)編號(hào)燒杯中放置3 h，浸泡液2 000 r/min離心10 min，取離心沉淀物進(jìn)行生理鹽水涂片鏡檢，記為“腸壁”組。魚(yú)類(lèi)的不同涂片組別是指“糞便”組、“糞便離心”組和“腸壁”組。

1.2.2 活禽糞便檢查 操作步驟與1.2.1 魚(yú)腸及腸道內(nèi)容物檢查的“糞便”組和“糞便離心”組操作相同，故不重復(fù)說(shuō)明。鴨的不同涂片組別為“糞便”組和“糞便離心”組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用Excel 整理數(shù)據(jù)并進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，對(duì)比不同地區(qū)菜市場(chǎng)間淡水魚(yú)及活禽感染寄生蟲(chóng)的概率，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本情況 瓊海、陵水、樂(lè)東城區(qū)菜市場(chǎng)共采集淡水魚(yú)魚(yú)腸(含腸道內(nèi)容物)177 份(包含野生羅非魚(yú)23尾：瓊海市大路鎮(zhèn)文嶺水庫(kù)收集14尾，陵水縣收集9尾)，活禽糞便82份，共計(jì)259份，未檢出菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)，但發(fā)現(xiàn)其他寄生蟲(chóng)(寄生蟲(chóng))感染。

2.2 淡水魚(yú)及禽類(lèi)腸道內(nèi)寄生蟲(chóng)的檢出情況 在對(duì)樣品進(jìn)行檢查的過(guò)程中，寄生蟲(chóng)的檢出率為10.39%。其中鳙魚(yú)、鴨、羅非魚(yú)腸道中寄生蟲(chóng)的檢出率由高到低分別為21.1%、10.4%、5.94%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.723，P＜0.05)。

2.2.1 不同涂片組別的檢出情況 同物種不同涂片組別中，鳙魚(yú)的糞便組、糞便離心組和腸壁組寄生蟲(chóng)檢出率分別為3.95%、7.89%和9.21%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.748，P＞0.05)；羅非魚(yú)的糞便組、糞便離心組和腸壁組寄生蟲(chóng)檢出率分別為2.97%、2.97%和0，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.061，P＞0.05)；鴨的糞便組和糞便離心組寄生蟲(chóng)檢出率分別為2.60%和7.79%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.110，P＞0.05)。同一涂片組別不同物種中，不同物種的糞便組之間寄生蟲(chóng)檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.246，P＞0.05)，不同物種的糞便離心組之間寄生蟲(chóng)檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.600，P＞0.05)，魚(yú)腸組不同物種之間寄生蟲(chóng)檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.686，P＜0.05)，見(jiàn)表1。

2.2.2 不同地區(qū)的檢出情況 同地區(qū)不同物種中，瓊海市鳙魚(yú)、羅非魚(yú)和鴨腸道中寄生蟲(chóng)檢出率分別為16.2%、1.52%和0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.526，P＜0.05)；陵水縣鳙魚(yú)、羅非魚(yú)和鴨腸道中寄生蟲(chóng)檢出率分別為22.2%、4.00%和29.2%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.586，P＞0.05)；樂(lè)東縣鳙魚(yú)、羅非魚(yú)和鴨腸道中寄生蟲(chóng)檢出率分別為28.6%、40.0%和2.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.682，P＜0.05)。同物種不同地區(qū)中，鳙魚(yú)不同地區(qū)之間寄生蟲(chóng)檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.250，P＞0.05)，羅非魚(yú)不同地區(qū)之間寄生蟲(chóng)檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.242，P＜0.05)，鴨不同地區(qū)之間寄生蟲(chóng)檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.217，P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表1 不同涂片組別不同物種腸道內(nèi)寄生蟲(chóng)的檢出情況

表2 不同地區(qū)不同物種中寄生蟲(chóng)的檢出情況

3 討論

菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)主要流行于東南亞地區(qū)，可以影響腸道吸收功能，造成液體、蛋白質(zhì)和電解質(zhì)流失，導(dǎo)致低蛋白血癥和低鉀血癥等[1]。2010年海南省報(bào)道第一例菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)病例[2]。2015 年至2016 年課題組采集?？谑袇^(qū)的大量樣本展開(kāi)相應(yīng)調(diào)查，以了解海口市菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)的感染情況，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)的感染[3-5]。根據(jù)海南省各市縣分布情況及河流分布特點(diǎn)，本次調(diào)查以東線(xiàn)萬(wàn)泉河入海口瓊海市、西線(xiàn)昌化江流經(jīng)地樂(lè)東縣及兩地居中點(diǎn)陵水縣作為采集點(diǎn)，以小樣本量抽樣的方式進(jìn)行調(diào)查。調(diào)查結(jié)果與李斯等[5]海口市區(qū)菜市場(chǎng)淡水魚(yú)菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)感染情況的相關(guān)報(bào)道一致，未發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)。本課題組2016年9月至2018年10月在海口繼續(xù)進(jìn)行大樣本量調(diào)研也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)。這可能與調(diào)查地點(diǎn)菜市場(chǎng)的淡水魚(yú)主要來(lái)自人工養(yǎng)殖魚(yú)塘有關(guān)[3]。本調(diào)查采集對(duì)象主要為菜市場(chǎng)的淡水魚(yú)禽，而2010 年報(bào)道的海南儋州菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)病病例的起因?yàn)榛颊呱衬圉q[2]。這可能也是調(diào)查未檢出菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)的原因之一。因此，瓊海、陵水、樂(lè)東城區(qū)菜市場(chǎng)淡水魚(yú)及禽類(lèi)與?？谑袇^(qū)菜市場(chǎng)的淡水魚(yú)一樣不存在菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)感染市民的風(fēng)險(xiǎn)。

本調(diào)查結(jié)果與王延等[3]、但彩虹等[4]海口市區(qū)菜市場(chǎng)菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)感染情況調(diào)查中檢出其他寄生蟲(chóng)的結(jié)果相似，發(fā)現(xiàn)了其他寄生蟲(chóng)的感染。本調(diào)查顯示瓊海、樂(lè)東地區(qū)鳙魚(yú)的寄生蟲(chóng)檢出率、羅非魚(yú)的寄生蟲(chóng)檢出率及鴨的寄生蟲(chóng)檢出率之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。海南島有三大主要淡水河流，分別為南渡江、昌化江、萬(wàn)泉河。萬(wàn)泉河的南北支流于瓊海市合口咀匯合，昌化江流經(jīng)樂(lè)東縣并且為樂(lè)東境內(nèi)兩大河流之一。不同流域的內(nèi)部環(huán)境多樣復(fù)雜，河流中所棲居的生物也不盡相同。這可能是造成其檢出率差異的原因之一。本調(diào)查還顯示鳙魚(yú)的腸壁寄生蟲(chóng)檢出率高于羅非魚(yú)的檢出率。因此，不同地區(qū)居民食用不同淡水魚(yú)禽可能感染寄生蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)將有所不同。文獻(xiàn)顯示，國(guó)內(nèi)不同地區(qū)淡水魚(yú)感染寄生蟲(chóng)的概率有所不同，人們生食(或半生食)淡水魚(yú)將存在感染寄生蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)[6-9]。近年來(lái)人們對(duì)食材的口感、新鮮度有了更高追求，在魚(yú)類(lèi)食材的處理方面，不少當(dāng)?shù)鼐用襁x擇將其制成魚(yú)類(lèi)刺身、魚(yú)生粥等菜肴后食用；而對(duì)家禽類(lèi)食材的常見(jiàn)處理，海南多數(shù)家庭偏愛(ài)于將其煮至快熟的半生狀態(tài)后斬件、斬塊食用(簡(jiǎn)稱(chēng)白斬)。這些飲食行為和習(xí)慣將增加居民感染寄生蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，當(dāng)?shù)鼐用駪?yīng)提高防范意識(shí)，將淡水魚(yú)禽煮熟煮透后食用，當(dāng)?shù)胤酪卟块T(mén)也應(yīng)當(dāng)做好相應(yīng)的預(yù)防宣傳、定期檢疫等工作。

為了明確瓊海、陵水和樂(lè)東是否是菲律賓毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)的自然疫源地，本課題組之后將根據(jù)實(shí)際情況前往當(dāng)?shù)厮畮?kù)、河流及濕地等地區(qū)對(duì)野生淡水魚(yú)、泥鰍、水禽及候鳥(niǎo)等進(jìn)行調(diào)研。