奶牛場無乳鏈球菌傳播途徑新發(fā)現(xiàn)

駱巧，呂倩，羅正中,2，張保海，沈留紅，曹隨忠

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，成都 611130；2.成都優(yōu)然牧業(yè)有限公司，成都 611130）

奶牛乳房炎直接導(dǎo)致奶產(chǎn)量的損失、乳液的廢棄及替代品費(fèi)用、獸醫(yī)藥品費(fèi)用和勞動力費(fèi)用的增加從而造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。而隱性乳房炎，除了造成經(jīng)濟(jì)損失之外，也會使乳制品的質(zhì)量大幅度下降。在牛群中大多數(shù)（90%）乳房炎表現(xiàn)為隱性，是造成經(jīng)濟(jì)損失的主要病因，其損失占每頭泌乳母牛每年總生產(chǎn)能力的10%～11%。

無乳鏈球菌是引起奶牛乳房炎的最主要病原菌之一，通常引起隱性乳房炎（又稱亞臨床型乳房炎），伴有間歇性的臨床型乳房炎發(fā)作[1]。無乳鏈球菌常存在于乳牛的皮膚、乳頭及乳房內(nèi)，通過擠乳人員的手或擠乳機(jī)械以及蠅類攜帶而傳播。多年來，無乳鏈球菌一直被認(rèn)為是奶牛專性乳房內(nèi)寄生和嚴(yán)格傳染性的病原體，并且科研人員在此基礎(chǔ)上建立了一系列防控計(jì)劃[2]。但是據(jù)資料顯示，從不同實(shí)驗(yàn)對象的各種樣本中都能分離出無乳鏈球菌，如表1所示，健康男性和女性在其泌尿生殖道、胃腸道或咽喉中都攜帶該病菌[3,4]，而反芻動物的糞便中也會帶有無乳鏈球菌[5]。J?rgensen等[6]和Cobo-ángel等[7]均從奶牛環(huán)境樣本（擠奶設(shè)備、水槽、地板拭子等）中分離出無乳鏈球菌，證明無乳鏈球菌不是專性的乳房內(nèi)病原體，且可以在乳房外環(huán)境中存活。本文就無乳鏈球菌在環(huán)境的分布范圍和傳播途徑進(jìn)行闡述，為調(diào)整對無乳鏈球菌的監(jiān)測和控制建議提供參考。

表1 無乳鏈球菌在不同實(shí)驗(yàn)對象中的分離情況

1 無乳鏈球菌

無乳鏈球菌是革蘭氏陽性球菌，單個或成雙鏈狀排列、長短不一。目前已發(fā)現(xiàn)的無乳鏈球菌主要致病因子包括莢膜多糖、溶血素、透明質(zhì)酸酶、環(huán)磷酸腺苷因子、超氧化物歧化酶和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶等[8]。無乳鏈球菌是寄生于奶牛乳房內(nèi)的常見鏈球菌，具有高度傳染性且傳播非?？臁η嗝顾胤浅Ｃ舾械忍攸c(diǎn)。奶牛感染無乳鏈球菌后，大缸奶樣體細(xì)胞數(shù)急劇升高，且大缸奶細(xì)菌總數(shù)顯著升高；它通常導(dǎo)致持續(xù)性的輕度感染，且自愈率低[9]。

Bianchi等[10]在巴西兩家屠宰場收集總共來自148頭奶牛592個乳區(qū)組織樣本，在432個細(xì)菌陽性培養(yǎng)皿中，12份（2.8%）分離出無乳鏈球菌，對應(yīng)乳區(qū)組織的病理變化主要為乳腺小葉增生，在實(shí)質(zhì)中間有小的黃色結(jié)節(jié)（直徑0.2～0.5cm）并向管腔和乳池內(nèi)腔突出，其中散布著白色薄膜。組織學(xué)特點(diǎn)為散發(fā)性至中度炎性浸潤，由腺泡和導(dǎo)管內(nèi)的中性粒細(xì)胞以及間質(zhì)中的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組成。

2 新的傳播途徑

J?rgensen等[6]通過分別收集泌乳?；旌先椤⒅蹦c和陰道拭子，青年奶牛直腸拭子，犢牛的直腸和扁桃體拭子，及來自自動擠奶系統(tǒng)（AMS）、地板、牛床、飲水和飼喂設(shè)備的環(huán)境拭子對4個牛群進(jìn)行了縱向研究（Longitudinal study），結(jié)果顯示無乳鏈球菌存在于直腸拭子和環(huán)境中，且飲用水的無乳鏈球菌陽性樣本量和直腸拭子中的無乳鏈球菌陽性樣本量呈顯著相關(guān)，這表明奶牛胃腸道和牛場環(huán)境是無乳鏈球菌的儲存庫，無乳鏈球菌可能通過口-糞傳播，飲水極可能是傳播媒介，所以奶牛群體中存在2個無乳鏈球菌的傳播途徑，即：通過擠奶程序與乳房之間的傳染性傳播途徑, 以及通過環(huán)境、用水和被污染的飼喂設(shè)備形成的口-糞傳播（Oro-faecal transmission）途徑（圖1）。

圖1 無乳鏈球菌在牛場的傳播途徑示意圖

此外，該團(tuán)隊(duì)還在15個無乳鏈球菌陽性牛群（37個牛群中排除22個兩年內(nèi)無無乳鏈球菌陽性記錄的牛群）中進(jìn)行橫向研究（Cross sectional study），將從縱向研究和橫向研究中采集的所有樣品進(jìn)行無乳鏈球菌培養(yǎng)，并且通過多位點(diǎn)序列分型（MLST）對從樣本中分離出的無乳鏈球菌（n=54）進(jìn)行基因分型，MLST結(jié)果顯示：在縱向研究中，從環(huán)境無乳鏈球菌發(fā)生最多的2個農(nóng)場中發(fā)現(xiàn)了ST103；在橫向研究中，在兩個環(huán)境污染嚴(yán)重的農(nóng)場中也發(fā)現(xiàn)了ST103，并發(fā)現(xiàn)了其單基因座變異ST731。另一方面，在3個牛場中發(fā)現(xiàn)了屬于CC12 （ST10和ST12）的分離株，但環(huán)境樣本均為陰性。因此不同的無乳鏈球菌有可能具有不同的生態(tài)位和傳播模式，所以它們在環(huán)境中的存活能力不同，在兩個傳播途徑中的傳播能力也不同。

Cobo-ánge等[7]收集了哥倫比亞3個省的部分奶牛場的大缸奶樣本、混合奶樣本、直腸樣本和環(huán)境樣本，從各類型樣本中均分離出無乳鏈球菌，通過對分離出的無乳鏈球菌進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型發(fā)現(xiàn)：①大缸奶樣與混合奶樣中的無乳鏈球菌，其分離株的序列型不完全一致；②從直腸樣本和大缸奶樣中分離出了相同序列型的無乳鏈球菌分離株；③部分牛場大缸奶樣有與環(huán)境樣本相同序列型的分離株，但與混合奶樣中的無乳鏈球菌分離株序列型不一致。說明無乳鏈球菌可以通過奶牛糞便排出而污染大缸奶。

3 預(yù)防措施

3.1 做好牛群管理

通過16S rRNA高通量測序技術(shù)對牛奶微生物群的研究表明，通常能從健康的乳房中檢測到幾種能引起奶牛乳房炎的微生物，如大腸桿菌、克雷伯氏菌、乳房鏈球菌等[11]。有學(xué)者提出乳房炎可能不應(yīng)歸因于乳房內(nèi)的病原感染，而應(yīng)歸因于健康狀態(tài)下乳腺內(nèi)微生物群多樣化的失調(diào)[12]。所以做好牛群管理，根據(jù)季節(jié)變化和奶牛的不同生理階段為奶牛提供科學(xué)合理的飼料搭配及良好的生長環(huán)境，使奶牛保持健康的生理狀態(tài)，是預(yù)防奶牛乳房炎的重要前提。

3.2 注重牛場的消毒工作

糞便不僅會污染臥床，還會將過道、水槽和環(huán)境變成環(huán)境病原體的來源。無乳鏈球菌和克雷伯氏菌可通過口-糞途徑進(jìn)行傳播[6,13]，所以一定要及時(shí)清理奶牛糞便，定期打掃養(yǎng)殖區(qū)域并進(jìn)行消毒處理。養(yǎng)殖環(huán)境要注意通風(fēng)，并且及時(shí)更換飲水及飼料，防止病原菌滋生。

3.3 規(guī)范對養(yǎng)殖人員的管理

養(yǎng)殖人員在養(yǎng)殖過程中與奶牛近距離接觸，難免會造成奶牛的感染。哥倫比亞25個牛場的無乳鏈球菌中40%為混合牛奶樣品中的分離株ST1[7]，它是人類和牛共有的主要致病菌株[5,14]，可能與種間傳播有關(guān)。所以養(yǎng)殖人員自身服飾的凈化處理也是很重要的。工作人員進(jìn)入奶牛生活區(qū)前應(yīng)更換工作服，且應(yīng)定期對工作服進(jìn)行清洗消毒。