中藥復(fù)方舒膚膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙雨　石磊　張倩玉　楊佳　楊紅兵

摘要：采用薄層色譜法對(duì)荊芥、防風(fēng)、凌霄花和狼毒進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)中藥復(fù)方舒膚膏的有效成分梣酮和黃柏酮進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明，薄層色譜法結(jié)果理想，陰性樣品無(wú)干擾;在5.92～47.36 μg/mL梣酮與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 1），平均回收率為99.76%（RSD=1.34%），在10.2～81.6 μg/mL黃柏酮與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 0），平均回收率為99.89%（RSD=1.63%），表明該方法操作簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性好，準(zhǔn)確可靠，可用于中藥復(fù)方舒膚膏的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：中藥;復(fù)方舒膚膏;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);薄層色譜法;高效液相色譜法

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1;O657.7+2? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2020）03-0130-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.03.028

Study on quality standard of Chinese medicine compound shufu cream

ZHAO Yu，SHI Lei，ZHANG Qian-yu，YANG Jia，YANG Hong-bing

（Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China）

Abstract： TLC was used to qualitatively identify Nepeta cataria L， Saposhnikovia divaricata （Trucz.） Schischk， Campsis grandiflora and Euphorbia fischeriana Steud. The content of the active constituents of fraxinellone and obacunone from cortex dictamni? was determined by HPLC. The results of TLC were ideal， and the negative samples had no interference. The linear relationship between the anthrone and the peak area was good （r=0.999 1） and the average recovery was 99.76% （RSD=1.34%） in the concentration range of 5.92～47.36 μg/mL. In the concentration range of 10.2～81.6 μg/mL， the linear relationship between the ketone and the peak area was good （r=0.999 0）， and the average recovery was 99.89% （RSD=1.63%）. This method is easy to operate， has good specificity， accurate and reliable， and can be used for quality control of traditional Chinese medicine compound skin cream.

Key words： traditional Chinese medicine compound skin cream; quality standard; TCL; HPLC

濕疹是由多種內(nèi)外因素引起的一種具有明顯滲出傾向的急性或慢性皮膚炎性反應(yīng)。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，濕疹發(fā)病緣于稟賦不耐，腠理不密，外界風(fēng)熱濕邪侵襲，即先天不足，外加內(nèi)濕外風(fēng)熱交困而致[1]。因此，中藥治療針對(duì)風(fēng)、濕、熱癥入手，運(yùn)用內(nèi)服和外用的方式治療濕疹，其中外用中藥復(fù)方軟膏以其毒副作用輕微和療效顯著等優(yōu)點(diǎn)，廣為運(yùn)用[2]。舒膚膏是在湖北省中醫(yī)院院內(nèi)制劑的基礎(chǔ)方上進(jìn)行加減，主要由苦參、白鮮皮、狼毒、荊芥、防風(fēng)、凌霄花等中藥組成的復(fù)方制劑，用于治療濕疹，緩解皮膚干燥、瘙癢及脫屑等癥狀，其中白鮮皮所含梣酮、黃柏酮是其有效成分[3-7]。研究建立了以HPLC法測(cè)定中藥復(fù)方舒膚膏中梣酮、黃柏酮的含量，并采用TCL法對(duì)荊芥、防風(fēng)、凌霄花及狼毒等成分進(jìn)行定性鑒別，方法簡(jiǎn)便可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1? 材料與方法

1.1? 儀器

LC-20AD液相色譜儀（日本島津）;SPD-20A UV檢測(cè)器;Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;DTP-1無(wú)油真空泵;AL104型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）;十萬(wàn)分之一分析天平（METTLERTOLEDO梅特勒托利多）;SK250H型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）;DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋。

1.2? 試藥

梣酮對(duì)照藥品（111700-201603）、黃柏酮對(duì)照藥品（111923-201604）、升麻素苷對(duì)照品（111522-201712）、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（111523-201811）、荊芥對(duì)照藥材（120911-201512）、防風(fēng)對(duì)照藥材（120947-201810）、凌霄花對(duì)照藥材（121122-201203）、狼毒對(duì)照藥材（121331-201303）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;巖大戟內(nèi)酯B對(duì)照藥品（批號(hào)：PS180911-01）購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司;中藥復(fù)方舒膚膏（批號(hào)分別為190412、190425、190506、190523、190610）陰性對(duì)照軟膏（湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院）;乙腈、甲醇（色譜純），水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。薄層用硅膠G，薄層用硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）。

1.3? 方法

1.3.1? 溶液的配制

1）對(duì)照品溶液的制備。精密稱(chēng)取1.48 mg梣酮和2.55 mg黃柏酮于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成含梣酮59.2 μg/mL和黃柏酮0.102 mg/mL的混合對(duì)照藥品溶液。

2）供試品溶液的制備。取中藥復(fù)方舒膚膏2 g，加入5 g硅藻土，攪拌均勻后，轉(zhuǎn)移至100 mL錐形瓶，加20 mL乙醇超聲15 min后，乙醇補(bǔ)齊失重，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤? mL甲醇溶解即得供試品溶液。

3）陰性對(duì)照溶液。按處方取除白鮮皮的各味藥材，按處方量配制白鮮皮陰性軟膏，按“對(duì)照品溶液的制備”方法制得白鮮皮陰性對(duì)照溶液。

1.3.2? 色譜條件? 色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相為甲醇-水（55∶45），流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)236 nm;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量為10 μL;理論板數(shù)按梣酮峰計(jì)，不低于3 000，各相鄰色譜峰之間的分離度大于1.5。

1.3.3? 線性關(guān)系考察? 從含59.2 μg/mL梣酮、0.102 mg/mL黃柏酮的混合對(duì)照品溶液中分別精密移取1、2、4、6、8 mL至10 mL容量瓶中，甲醇定容，稀釋為含梣酮濃度分別為5.92、11.84、23.68、35.52、47.36 μg/mL，含黃柏酮分別為10.2、20.4、40.8、61.2、81.6 μg/mL 5種不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液。各取10 μL進(jìn)樣分析。以梣酮、黃柏酮峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

在“1.3.2”的色譜條件下，對(duì)照品、供試品及陰性樣品的液相色譜（圖1）顯示，樣品中其他成分對(duì)梣酮與黃柏酮的測(cè)定無(wú)干擾。

2.2? 方法學(xué)考察

2.2.1? 線性關(guān)系考察結(jié)果? 以梣酮、黃柏酮峰面積分別為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得梣酮回歸方程Y=5 367.1X+1 950.7（R=0.999 1，n=10），線性范圍5.92～47.36 μg/mL;黃柏酮回歸方程Y=14 859X-670.59（R=0.999 0，n=10），線性范圍10.2～81.6 μg/mL。

2.2.2? 精密度試驗(yàn)? 精密吸取同一份混合對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果測(cè)得梣酮和黃柏酮的峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為1.61%、1.91%，表明該方法精密度良好。

2.2.3? 重復(fù)性試驗(yàn)? 取同一批號(hào)的樣品6份，按照“1.3.1”下供試品的制備方法制成供試品溶液，進(jìn)樣分析。測(cè)得梣酮和黃柏酮的含量RSD值分別為2.64%和2.37%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.4? 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)定目標(biāo)物質(zhì)的峰面積。結(jié)果測(cè)得梣酮、黃柏酮的峰面積RSD分別為1.34%、1.72%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5? 加樣回收試驗(yàn)? 精密稱(chēng)取6份已知梣酮、黃柏酮含量的同批樣品1 g，分別精密加入2 mL濃度為0.067 6 mg/mL的黃柏酮對(duì)照品溶液，1 mL濃度61.2 μg/mL的梣酮對(duì)照品溶液，按照“1.3.1”項(xiàng)下供試品的制備方法制成供試品溶液，按照“1.3.2”項(xiàng)下的色譜條件，檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)的峰面積，測(cè)得梣酮、黃柏酮的平均回收率分別為99.89%與99.76%，RSD分別為1.63%、1.34%（表1）。

2.3? 樣品測(cè)定

取不同批次樣品5份，分別按“1.3.1”方法制備供試品溶液，按“1.3.2”色譜條件進(jìn)樣10 μL，以外標(biāo)法計(jì)算得到梣酮與黃柏酮的平均含量分別為0.056 96、0.137 88 mg/mL。

2.4? 定性鑒別

2.4.1? 荊芥? 取4 g中藥復(fù)方舒膚膏于研缽，加入10 g硅藻土，研磨均勻后轉(zhuǎn)移至100 mL錐形瓶，加入60 mL石油醚，超聲15 min，補(bǔ)齊失重，搖勻，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，取濾液蒸干至1 mL作為供試品溶液。取不含荊芥藥材的陰性中藥復(fù)方乳膏，同法制得荊芥陰性樣品溶液。取荊芥對(duì)照藥材粗粉0.8 g，加入石油醚（60～90 ℃）20 mL，密塞，振搖，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液揮至1 mL，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各7 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（17∶3）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，噴含5%香草醛的5%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品則無(wú)（圖2）。

2.4.2? 防風(fēng)? 取5 g中藥復(fù)方舒膚膏于100 mL錐形瓶，加入20 mL丙酮，超聲處理20 min，補(bǔ)齊失重，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? mL乙醇溶解，為供試品溶液。取不含防風(fēng)藥材的陰性中藥復(fù)方乳膏，同法制得防風(fēng)陰性樣品溶液。取升麻素苷對(duì)照品、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品， 加入1 mL乙醇制成各含1 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。取防風(fēng)粉末1 g，加丙酮20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? mL乙醇溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)（圖3），吸取上述4種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（4∶1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品則無(wú)。

2.4.3? 凌霄花? 取3 g中藥復(fù)方舒膚膏于100 mL錐形瓶，加入甲醇10 mL，超聲處理30 min，冰水浴 1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，為供試品溶液。取不含凌霄花藥材的陰性中藥復(fù)方乳膏，同法制得凌霄花陰性樣品溶液。取凌霄花粉末0.5 g，加石油醚（60～90 ℃）15 mL，超聲處理15 min，濾過(guò)，棄去石油醚液，藥渣加甲醇15 mL，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇作為對(duì)照藥材溶液。稱(chēng)取毛蕊花糖苷對(duì)照藥品適量，置于10 mL量瓶中，加入甲醇溶解、定容，配制成0.8 mg/mL的溶液，為對(duì)照藥品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)（圖4），吸取上述4種溶液各7 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲甲酸（17∶1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，噴磷鉬酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品則無(wú)。

2.4.4? 狼毒? 取4 g中藥復(fù)方舒膚膏于100 mL錐形瓶，加入30 mL乙醇，充分振搖，水浴加熱冷凝回流30 min后，冰水浴1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，加入2 mL甲醇溶劑，為供試品溶液。取不含狼毒藥材的陰性中藥復(fù)方乳膏，同法制得狼毒陰性樣品溶液。取適量對(duì)照藥品巖大戟內(nèi)酯B于10 mL量瓶，甲醇定容，為對(duì)照品溶液。取狼毒對(duì)照藥材粗粉2 g，加乙醇 30 mL，加熱回流1 h，放冷，過(guò)夜，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)（圖5），吸取上述4種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（8.5∶1.5）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰， 置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3? 討論

白鮮皮作為一種皮膚病常用中藥，具有清熱燥濕、祛風(fēng)解毒、殺蟲(chóng)止癢的功效，常用于治療濕熱瘡毒、黃水淋漓、濕疹、疥癬、風(fēng)濕熱痹、黃疸、尿赤等癥，尤其善于治療濕疹的風(fēng)熱癥和濕熱癥?，F(xiàn)代研究表明，白鮮皮的提取物具有抗菌、消炎的作用[8]，因此測(cè)定白鮮皮的有效成分梣酮和黃柏酮含量，有助于規(guī)范舒膚膏的藥效質(zhì)量評(píng)價(jià)。采用高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí)，分別選用甲醇-水（60∶40）和甲醇-水（55∶45）作流動(dòng)相[9]，試驗(yàn)結(jié)果顯示，后者能更好的將梣酮與黃柏酮分開(kāi)，保證其分離度R>1.5，因此采用甲醇-水（55∶45）作流動(dòng)相，使2個(gè)目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰能較好的分離，且峰形良好，分離度、理論板數(shù)、拖尾因子等均符合要求，2個(gè)目標(biāo)峰的保留時(shí)間相對(duì)適宜。舒膚膏為乳膏基質(zhì)的外用乳膏劑，在做含量測(cè)定和定性鑒別時(shí)，將有效成分高效地從基質(zhì)中分離尤為重要，因此采用硅藻土對(duì)檢品做分散處理[10]，水浴加熱或超聲處理對(duì)檢品做破乳處理的方法，最大程度地提取有效成分。

通過(guò)對(duì)5個(gè)批次中藥復(fù)方舒膚膏的含量測(cè)定和定性鑒別等研究，證實(shí)該試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠，可以有效地控制該制劑的藥品質(zhì)量。

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收稿日期：2019-10-21

作者簡(jiǎn)介：趙? 雨（1993-），女，湖北十堰人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幤贩N、資源及開(kāi)發(fā)，（電話）15392844720（電子信箱）? 472932806@qq.com;通信作者，楊紅兵（1963-），男，教授，主要從事中藥品種、資源及開(kāi)發(fā)研究，（電話）15335896488（電子信箱）? yanghb321@126.com。