熱熔壓敏膠為基質(zhì)制備的傷柏貼膏皮膚給藥安全性分析

梁秀清， 徐海燕， 劉東文， 何寶凝， 陳韻姿

（佛山市中醫(yī)院制劑中心，廣東佛山 528000）

傷柏貼膏是在佛山市中醫(yī)院臨床驗方傷柏散的處方基礎(chǔ)上進行研發(fā)的新型制劑，具有涼血散瘀、消腫止痛的作用，用于慢性軟組織損傷和勞損，癥見關(guān)節(jié)腫脹，筋骨疼痛屬瘀血阻絡(luò)等。該制劑與原散劑相比，具有載藥量大、使用方便、透氣性好等優(yōu)點[1-2]。其中，用作基質(zhì)的熱熔壓敏膠屬于貼膏生產(chǎn)中較前沿的基質(zhì)，尚未收載于我國藥用輔料名錄中。作為國內(nèi)首次由廣東省藥監(jiān)局批準(zhǔn)以熱熔壓敏膠為基質(zhì)的新制劑之一，在研發(fā)上處于較領(lǐng)先的地位。為了收集該制劑臨床使用前的數(shù)據(jù)，本試驗考察了傷柏貼膏在皮膚上的使用安全性，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料

1.1 動物KM小鼠，SPF級，18 ～22 g，雌雄各半，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物質(zhì)量合格證號：0067727。白化豚鼠，普通級，250 ～300 g，雌雄各半，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物質(zhì)量合格證號：0067727。新西蘭兔，普通級，1.5 ～2.5 kg，雌雄各半，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物質(zhì)量合格證號：0067727。

1. 2 藥物傷柏貼膏[6 g（生藥）/貼，117 cm2/貼]（批號：305J8）及賦形劑貼，均由佛山市中醫(yī)院提供；硫化鈉，天津市福晨化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：20091207；2，4-二硝基氯苯，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所生產(chǎn)，批號：07713。

2 方法與結(jié)果

2.1 急性毒性試驗[3-4]

2.1.1 敷貼劑量的選擇 取昆明（KM）小鼠15只，隨機分成3組，分別為貼敷0.4 cm2/g、貼敷0.5 cm2/g及貼敷0.6 cm2/g組。給藥前將小鼠背部及腹部進行脫毛。禁食不禁水12 h 后，按上述劑量各組小鼠接受傷柏貼膏皮膚貼敷給藥。在給藥24 h 后，各組小鼠均無出現(xiàn)死亡情況，且精神狀態(tài)良好，飲食、飲水、活動和二便正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物。提示0.4 ～0.6 cm2/g敷貼劑量安全。

2.1.2 一般狀況觀察 取KM 小鼠30 只，雌雄各半，按小鼠最大貼敷劑量（0.6 cm2/g體質(zhì)量），給予傷柏貼膏貼敷給藥，一日2 次，6 h/次，連續(xù)給藥2 次，藥后觀察14 d。每天觀察小鼠精神狀態(tài)、活動、毛發(fā)光澤度、食欲、進水量、大便、小便、鼻眼、口腔有無異常分泌物、有無死亡。第7、15 天稱體質(zhì)量。第15 天處死及解剖動物，肉眼觀察主要臟器。

2.1.3 結(jié)果 見表1。所有受試小鼠均精神狀態(tài)良好，毛色光潔，飲食、飲水、活動和二便正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物，體質(zhì)量變化正常，肉眼觀察主要臟器沒發(fā)現(xiàn)異常，未出現(xiàn)不良情況和死亡動物。傷柏貼膏的小鼠貼敷皮膚給藥劑量為61.5 g（生藥）·kg-1·d-1。該貼膏劑[6 g（生藥）/貼，117 cm2/貼]成人臨床每天用量為1 ～2貼，即每天最大用量為12 g（生藥）/d，以成人體質(zhì)量60 kg 計，平均用藥劑量為0.2 g（生藥）·kg-1·d-1。而本品小鼠的日給藥量是成人最大臨床用量的308倍，提示本貼膏劑安全性較高。

2.2 皮膚過敏性試驗[3-4]

2.2.1 方法 取豚鼠30只，隨機分為5組，即賦形劑對照組，陽性對照組，傷柏貼膏高、中、低劑量組，每組6只，給藥前背部兩側(cè)脫毛，脫毛區(qū)為5 cm×5 cm。在第0、7、14 天，賦形劑對照組貼予賦形劑，陽性對照組涂予1%的2，4-二硝基氯苯，傷柏貼膏高、中、低劑量組（劑量分別為78.0、39.0、19.5 cm2·kg-1·d-1），貼敷6 h。末次給予相應(yīng)的藥物致敏后14 h，在激發(fā)接觸階段，陽性對照組涂予0.1%的2，4-二硝基氯苯，其余各組再次貼予相應(yīng)的藥物。6 h 后，觀察72 h 內(nèi)皮膚過敏反應(yīng)情況，并按表2皮膚過敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)進行評分，計算致敏發(fā)生率，再按表3進行皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)，同時密切觀察動物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性過敏反應(yīng)出現(xiàn)。

2. 2. 2 結(jié)果 如表4 所示，豚鼠按傷柏貼膏高、中、低劑量及賦形劑皮膚貼敷均無出現(xiàn)水腫及紅斑等過敏反應(yīng)，并且在觀察過程中豚鼠均無出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性過敏反應(yīng)。實驗結(jié)果表明傷柏貼膏對豚鼠無致敏性。

2.3 皮膚刺激性試驗[3-4]

2.3.1 方法 取家兔8 只，雌雄各半，隨機分為單次給藥組和多次給藥組，每組4只。試驗前24 h對給藥區(qū)（背部）進行脫毛處理。去毛范圍左、右各6 cm×6 cm（給藥前檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜進行試驗）。

單次給藥組：傷柏貼膏，以12 cm2·kg-1·d-1的劑量，直接貼敷于一側(cè)已去毛的皮膚上，然后用無刺激性膠布加以固定，另一側(cè)貼予賦形劑對照，貼敷6 h。貼敷結(jié)束后，除去該貼劑并用溫水清潔給藥部位，在自然光線下，肉眼觀察去除藥物后1、24、48、72 h的皮膚反應(yīng)，并記錄貼敷部位有無紅斑和水腫等情況。按表2皮膚過敏反應(yīng)程度的評分標(biāo)準(zhǔn)對皮膚紅斑和水腫進行評分，計算每一觀察時間點各組受試物及賦形劑皮膚反應(yīng)積分的平均分值，再按表3進行刺激強度評價。多次給藥組：取傷柏貼膏，以12 cm2·kg-1·d-1的劑量，直接貼敷于一側(cè)已去毛的皮膚上，然后用無刺激性膠布加以固定，另一側(cè)貼予賦形劑對照，連續(xù)1周同一時間給藥，每天1次，每次貼敷6 h。貼敷結(jié)束后，除去該貼劑并用溫水清潔給藥部位，在每次去除藥物后1 h以及再次貼敷前觀察及記錄紅斑及水腫、貼敷部位是否有色素沉著、出血點、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生時間及消退時間，并對紅斑及水腫進行評分。末次貼敷后，在自然光線下，肉眼觀察去除藥物后1、24、48、72 h的皮膚反應(yīng)，并記錄貼敷部位有無紅斑和水腫等情況，按表5皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)對皮膚紅斑和水腫進行評分，先計算觀察時間點各組積分均值，然后計算觀察期限內(nèi)每天每只動物刺激積分均值，再按表6皮膚刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)進行刺激強度評價。

表1 傷柏貼膏小鼠皮膚給藥急性毒性試驗Table 1 The changes in symptoms of mice in acute toxicity test for Shangbai Plaste

表2 皮膚過敏反應(yīng)程度的評分標(biāo)準(zhǔn)[5]Table 2 The scoring standard for skin allergic degrees

表3 皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)[5]Table 3 The evaluation standard for skin sensitization

表4 皮膚過敏反應(yīng)程度的平均分值及致敏發(fā)生率Table 4 The average scores and skin sensitization rate for skin allergic degrees （n=6，s/分）

2.3.2 結(jié)果 新西蘭兔按傷柏貼膏12 cm2·kg-1·d-1劑量貼敷皮膚給藥，單次給藥組在局部貼敷賦形劑和受試藥的1、24、48、72 h后，貼敷部位均無紅斑和水腫等情況。多次給藥組給藥7 d，在末次局部貼敷賦形劑和受試藥的1、24、48、72 h 后，賦形劑部位均無紅斑和水腫等情況。受試藥部位有輕度紅斑，平均分值（0.25 分）介于0 ～0.49 分之間。觀察期限內(nèi)，賦形劑組和傷柏貼膏組每天每只動物積分均值分別為0 分及0.1 分，介于0 ～0.49分之間表明傷柏貼膏對新西蘭兔局部皮膚無刺激性。

表5 皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)[5]Table 5 The scoring standard for skin irritation

表6 皮膚刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)[5]Table 6 The evaluation standard for skin irritation

3 討論

在新制劑的研發(fā)過程中，安全性研究一直是不容忽視的部分。雖有研究[6-7]結(jié)果表明，熱熔壓敏膠貼劑對皮膚無刺激和致敏性，但因熱熔壓敏膠沒有收載于我國的藥用輔料名錄中，尚無法定標(biāo)準(zhǔn)，國內(nèi)市面至今沒有經(jīng)藥監(jiān)部門批準(zhǔn)正式生產(chǎn)的藥品或醫(yī)療機構(gòu)制劑，更未能形成產(chǎn)業(yè)化，僅見一些以“醫(yī)療器械”名義注冊的產(chǎn)品在市面上流通，這些產(chǎn)品也未見相關(guān)的有效性或安全性實驗資料支持，這也為熱熔壓敏膠的應(yīng)用帶來了一定的不確定性。

本試驗結(jié)果表明，傷柏貼膏對小鼠皮膚無全身急性毒性反應(yīng)，對家兔皮膚無刺激性，對豚鼠皮膚無過敏反應(yīng)，表明該新制劑是較安全的局部外用藥，此為其在臨床的推廣使用提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。傷柏貼膏作為我院骨傷疾病治療的新劑型補充，既保留了原散劑的療效，又改進了患者的用藥模式，可為醫(yī)院制劑的臨床使用發(fā)揮更可靠的作用，進一步推動了醫(yī)療機構(gòu)制劑的發(fā)展。