姬明杰 武軍 孫麗君 左金玲

[摘要] 目的 分析基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性。 方法 隨機選取2016年2月～2018年2月河北省唐山市婦幼保健院子癇前期患者51例為研究對象，根據(jù)其病情嚴重程度將其分為重度組（n = 22）和輕度組（n = 29）;將同期正常足月妊娠婦女納入對照組（n = 30）。比較三組血清MMP-2、MMP-9水平，分析血清MMP-2、MMP-9水平與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性，評價MMP-2、MMP-9水平對重度子癇前期的預(yù)測價值。 結(jié)果 重度組血清MMP-2、MMP-9水平低于輕度組和對照組，輕度組血清MMP-2、MMP-9水平低于對照組（均P < 0.05）。Spearman相關(guān)分析顯示，血清MMP-2、MMP-9水平與子癇前期發(fā)病及病情嚴重程度呈負相關(guān)（r = -0.839、-0.747，P < 0.001）。血清MMP-2水平預(yù)測重度子癇前期的臨界值為54.89 pg/mL，敏感度、特異性分別為0.818、0.828;血清MMP-9水平預(yù)測重度子癇前期的臨界值為175.62 pg/mL，敏感度、特異性分別為0.818、0.897。 結(jié)論 血清MMP-2、MMP-9水平與子癇前期發(fā)病及病情嚴重程度密切相關(guān)，對重度子癇前期有一定預(yù)測價值。

[關(guān)鍵詞] 基質(zhì)金屬蛋白酶2;基質(zhì)金屬蛋白酶9;子癇前期;相關(guān)性

[中圖分類號] R714.244 ? ? ? ? ?[文獻標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）04（c）-0101-04

Correlation between matrix metalloproteinases and onset of preeclampsia

JI Mingjie ? WU Jun ? SUN Lijun ? ZUO Jinling

Department of Obstetrics， Tangshan Maternal and Child Health Hospital， Hebei Province， Tangshan ? 063000， China

[Abstract] Objective To analyze the correlation between matrix metalloproteinases （MMPs） and onset of preeclampsia. Methods From February 2016 to February 2018， 51 cases with preeclampsia patients in Tangshan Maternal and Child Health Hospital of Hebei Province were randomly selected for the study. According to the severity of disease， they were divided into severe group （n = 22） and mild group （n = 29）. Women with normal term pregnancy at the same time were included in control group （n = 30）. The levels of serum MMP-2 and MMP-9 were compared among three groups. The correlation between serum levels of MMP-2， MMP-9 and onset of preeclampsia was analyzed. The predictive value of MMP-2 and MMP-9 levels on severe preeclampsia was evaluated. Results The levels of serum MMP-2 and MMP-9 in severe group were lower than those in mild group and control group， and the levels serum MMP-2 and MMP-9 in mild group were lower than those in control group （all P < 0.05）. Spearman correlation analysis showed that serum MMP-2 and MMP-9 levels were negatively correlated with onset of preeclampsia and disease severity （r = -0.839， -0.747; P < 0.001）. The cut-off value of serum MMP-2 level was 54.89 pg/mL in predicting severe preeclampsia， and the sensitivity， specificity were 0.818， 0.828. The cut-off value of serum MMP-9 level was 175.62 pg/mL in predicting severe preeclampsia， and the sensitivity， specificity were 0.818， 0.897. Conclusion The levels of serum MMP-2 and MMP-9 are closely related to the onset of preeclampsia and severity of preeclampsia， which has certain predictive value for severe preeclampsia.

[Key words] Matrix metalloproteinase-2; Matrix metalloproteinase-9; Preeclampsia; Correlation

子癇前期是嚴重威脅母嬰身體健康和生命安全的妊娠期特發(fā)疾病，該病在發(fā)展中國家的發(fā)病率為1.8%～16.7%，我國發(fā)病率為2.81%～4.82%[1]。按其病情嚴重程度可分為輕度或重度子癇前期，重度子癇前期孕婦常需娩出胎兒以消除母體癥狀，但過早終止妊娠對圍生兒預(yù)后不利[2]。隨著研究的深入，目前普遍認為滋養(yǎng)細胞侵襲異常、血管內(nèi)皮損傷等情況是導(dǎo)致子癇前期發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[3]。相關(guān)研究[4-5]顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）如MMP-2、MMP-9等與血管生成和滋養(yǎng)細胞的侵襲能力密切相關(guān)，可能與子癇前期發(fā)病有一定相關(guān)性。對此，本研究觀察子癇前期患者血清MMP-2、MMP-9水平變化情況，分析上述指標(biāo)與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2016年2月～2018年2月河北省唐山市婦幼保健院子癇前期患者51例為研究對象，根據(jù)病情嚴重程度將其分為重度組（n = 22）和輕度組（n = 29）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《婦產(chǎn)科學(xué)》（第8版）[6]中子癇前期診斷分類標(biāo)準(zhǔn)者;②年齡20～40歲;③單胎妊娠;④臨床資料完整;⑤自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠前或孕期20周前發(fā)生高血壓者;②有其他確診并發(fā)癥和合并癥者。將同期正常足月妊娠婦女納入對照組（n = 30），排除伴糖脂代謝紊亂者;伴并發(fā)癥和合并癥者;資料不全者。

1.2 方法

收集三組年齡、產(chǎn)次、孕齡、體重指數(shù)等一般資料。三組受試者入組時采集清晨空腹靜脈血4 mL，離心分離血清，-70℃冰箱保存;采用酶聯(lián)免疫法檢測血清MMP-2、MMP-9水平，試劑盒均來自上海潤裕生物科技有限公司（生產(chǎn)批號：151244、151149）。檢測方法：檢測前20 min將試劑盒從冰箱取出，平衡至室溫后（20～25℃），取出板條;在酶標(biāo)板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔10孔，第1、2孔各加標(biāo)準(zhǔn)品100 μL，再向第1、2孔各加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，混勻;從第1、2孔中各取100 μL分別加入第3、4孔，再向第3、4孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，混勻;從第3、4孔各取50 μL棄去，再各取50 μL分別加入第5、6孔，再往第5、6孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，混勻;從第5、6孔中各取50 μL分別加入第7、8孔，再往第7、8孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，混勻;從第7、8孔分別取50 μL加入第9、10孔，再向第9、10孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 μL，混勻后從第9、10孔各取50 μL棄去。在酶標(biāo)板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測樣品10 μL;將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻后，用封板膜封板后置37℃溫育30 min。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，重復(fù)5次，拍干。除空白孔外各孔加酶標(biāo)試劑50 μL，封板膜封板后置37℃溫育30 min，再次洗滌。每孔依次加入顯色劑A、B各50 μL，輕微震蕩混勻，37℃避光顯色15 min。各孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)，此時藍色立即轉(zhuǎn)黃色。以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較三組受試者一般資料及血清MMP-2、MMP-9水平差異;分析血清MMP-2、MMP-9水平與子癇前期發(fā)病的相關(guān)性。評價MMP-2、MMP-9水平對重度子癇前期的預(yù)測價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗;相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析;繪制ROC曲線分析評價MMP-2、MMP-9水平對重度子癇前期的預(yù)測價值，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較

三組年齡、產(chǎn)次、孕齡、體重指數(shù)等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。

表1 ? 三組一般資料比較（x±s）

2.2 三組血清MMP-2、MMP-9水平比較

重度組血清MMP-2、MMP-9水平低于輕度組和對照組，輕度組血清MMP-2、MMP-9水平低于對照組（均P < 0.05）。見表2。

表2 ? 三組血清MMP-2、MMP-9水平比較（pg/mL，x±s）

注：與對照組比較，aP < 0.05;與輕度組比較，bP < 0.05。MMP：基質(zhì)金屬蛋白酶

2.3 Spearman相關(guān)分析結(jié)果

血清MMP-2、MMP-9水平與子癇前期發(fā)病及病情嚴重程度呈負相關(guān)（r = -0.839、-0.747，P < 0.001）。

2.4 ROC曲線結(jié)果

血清MMP-2水平預(yù)測重度子癇前期的臨界值為54.89 pg/mL，曲線下面積（AUC）為0.845，敏感度、特異性分別為0.818、0.828;血清MMP-9水平預(yù)測重度子癇前期的臨界值為175.62 pg/mL，AUC為0.845，敏感度、特異性分別為0.818、0.897。見圖1。

MMP：基質(zhì)金屬蛋白酶

圖1 ? ROC曲線結(jié)果

3 討論

子癇前期是妊娠期特發(fā)疾病，患者主要表現(xiàn)為不同程度的高血壓、蛋白尿、水腫，嚴重時出現(xiàn)抽搐、昏迷等，嚴重影響母嬰身體健康和生命安全[7-9]。該病的確切病因及機制尚未闡明，相關(guān)研究[10]顯示，其與子宮螺旋動脈重構(gòu)障礙、血管內(nèi)皮細胞受損、胰島素抵抗、遺傳等多方面因素有關(guān)。MMPs是一組具有重塑和改造細胞外基質(zhì)成分特性的鋅、鈣依賴性的內(nèi)肽酶。有研究[11]發(fā)現(xiàn)，MMP-2和MMP-9參與胎盤和子宮螺旋動脈的重塑，可能與子癇前期發(fā)病有一定相關(guān)性。

胎盤滋養(yǎng)細胞對子宮蛻膜侵入不足所致的胎盤淺著床將引起子宮螺旋動脈重塑障礙、小動脈痙攣等一系列病理生理改變，目前研究認為上述過程是導(dǎo)致子癇前期發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[12]。滋養(yǎng)細胞分泌的MMP-2是一種可降解Ⅳ型膠原的特殊蛋白水解酶，活化的MMP-2定位于細胞穿透基質(zhì)的突出部位，可在酶解基底膜Ⅳ型膠原及細胞間基質(zhì)成分中發(fā)揮“鉆頭”作用，與滋養(yǎng)細胞侵入能力密切相關(guān)[13]。血管內(nèi)皮功能障礙亦是子癇前期的主要病理改變，MMP-2是血管重建和血管生成的主要介導(dǎo)物[14-15]。本研究結(jié)果顯示，重度組血清MMP-2水平低于輕度組和對照組，輕度組MMP-2水平低于對照組（均P < 0.05）;Spearman相關(guān)分析顯示，血清MMP-2水平與子癇前期發(fā)病及病情嚴重程度呈負相關(guān)性，提示血清MMP-2水平降低可反映子癇前期加重。何西彥等[16]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)MMP-2表達不足時，胎盤滋養(yǎng)細胞缺乏足夠的動力穿透子宮蛻膜，與子癇前期發(fā)病密切相關(guān)，與本研究基本一致。

本研究結(jié)果顯示，重度組血清MMP-9水平低于輕度組和對照組，輕度組血清MMP-9水平低于對照組（均P < 0.05）;Spearman相關(guān)分析顯示，血清MMP-9水平與子癇前期發(fā)病及病情嚴重程度呈負相關(guān)性。MMP-9是一類由滋養(yǎng)細胞、內(nèi)皮細胞等細胞分泌Zn2+依賴的肽鏈內(nèi)切酶，主要功能是水解細胞外基質(zhì)[17]。在滋養(yǎng)細胞侵襲過程中，MMP-9發(fā)揮著重要的作用，其可以水解膠原組織，對基質(zhì)結(jié)構(gòu)進行重塑，利于胚泡的著床[18]。妊娠20周前滋養(yǎng)細胞侵襲能力的下降是引起子癇前期發(fā)生的關(guān)鍵因素，而MMP-9蛋白表達水平隨著子癇前期孕婦胎盤組織中滋養(yǎng)細胞侵蝕能力的明顯下降而降低[19-20]。動物實驗顯示，MMP-9基因敲除大鼠胎盤植入受限，最終發(fā)展為子癇前期表現(xiàn)[21]。Orlovic等[22]、Rahimi等[23]研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期患者血清MMP-9水平顯著低于健康孕婦，MMP-9于子癇前期發(fā)生及輕重程度均有密切相關(guān)性，與本研究基本一致。

ROC曲線結(jié)果顯示，血清MMP-2水平預(yù)測重度子癇前期AUC為0.845，臨界值為54.89 pg/mL;血清MMP-9水平預(yù)測重度子癇前期的AUC為0.845，臨界值為175.62pg/mL。提示血清MMP-2、MMP-9水平對子癇前期患者病情嚴重程度預(yù)測具有一定價值。

綜上所述，血清MMP-2、MMP-9水平隨子癇前期發(fā)病及病情加重逐漸升高，與子癇前期發(fā)病密切相關(guān)，檢測上述指標(biāo)有助于觀察和判斷患者病情變化，為指導(dǎo)醫(yī)師及時采取防治措施提供參考。

[參考文獻]

[1] ?李可，朱大偉，陳建昆，等.子癇前期發(fā)病機制與臨床治療研究進展[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2019，44（5）：423-429.

[2] ?郭莉.microRNA-210、VEGF在子癇前期孕婦胎盤中的表達水平及意義[J].中國醫(yī)師雜志，2018，20（3）：463-465.

[3] ?Sircar M，Thadhani R，Karumanchi SA. Pathogenesis of preeclampsia [J]. Curr Opin Nephrol Hypertens，2015，24（2）：131-138.

[4] ?趙祖英，梁勁勁，陸潔清.重度子癇前期患者胎盤組織TGF-β1及MMP-9的表達及意義[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科，2017，9（10）：45-47.

[5] ?Lee CL，Veerbeek JHW，Rana TK，et al. Role of Endoplasmic Reticulum Stress in Proinflammatory Cytokine-Mediated Inhibition of Trophoblast Invasion in Placenta-Related Complications of Pregnancy [J]. Am J Pathol，2019，189（2）：467-478.

[6] ?謝幸，茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：66-67.

[7] ?黃文亭，曾子純，王冬菊，等.改良減少子宮血流灌注法建立子癇前期大鼠模型[J].中國實驗動物學(xué)報，2019，27（6）：776-780.

[8] ?郭靜.早發(fā)型重度子癇前期合并胎兒生長受限期待治療妊娠結(jié)局的相關(guān)研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2019，57（11）：79-81.

[9] ?曹容.早發(fā)型重度子癇前期終止妊娠時機及分娩方式對圍生兒結(jié)局影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2019，17（7）：146-147.

[10] ?庭亮，夏雯，丁雯，等.重度子癇前期并發(fā)癥的預(yù)防及護理探討[J].中國醫(yī)師雜志，2015（z1）：178-179.

[11] ?葛新苗.胎盤組織中VEGF與MMP-9表達水平與子癇前期病情的相關(guān)性研究[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2017， 16（7）：651-653.

[12] ?Rojas-Arias JL，Ortiz-López LD，Ordu？觡a-Aparicio WJ，et al. Characterization of Atypical Preeclampsia [J]. Fetal Diagn Ther，2015，38（2）：119-125.

[13] ?鄒娜，姜丹，劉遠遠，等.MMP-2、TIMP-2和PPARγ在子癇前期患者胎盤中的表達及意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2016，32（5）：488-491.

[14] ?何慧，蔡怡琦，周冬梅，等.子癇前期患者血清中基質(zhì)金屬蛋白酶2和9及其抑制因子的水平研究[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2015，35（2）：246-248.

[15] ?Sahay AS，Jadhav AT，Sundrani DP，et al. Matrix metalloproteinases-2 （MMP-2） and matrix metalloproteinases-9 （MMP-9） are differentially expressed in different regions of normal and preeclampsia placentae [J]. J Cell Biochem，2018，119（8）：6657-6664.

[16] ?何西彥，孫曉彤，楊雪萍，等.子癇前期孕婦血清和胎盤組織中基質(zhì)金屬蛋白酶2及高遷移率族蛋白1表達及其意義[J].蘭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2018，44（1）：38-42.

[17] ?Rahat B，Sharma R，Bagga R，et al. Imbalance between matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in preeclampsia and gestational trophoblastic diseases [J]. Reproduction，2016，152（1）：11-22.

[18] ?辛樂，王翠秀.胎盤組織MMP-9表達與孕婦子癇前期發(fā)病的相關(guān)性研究[J].中國婦幼保健，2017，32（4）：675-677.

[19] ?楊亮，畢瑞，尹建威.妊娠期高血壓疾病胎盤組織中白血病抑制因子與基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達水平與子癇前期病情的關(guān)系研究[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2017，29（10）：50-53.

[20] ?Rahimi Z，Lotfi S，Ahmadi A，et al. Matrix metalloproteinase-2 C-735T and its interaction with matrix metalloproteinase-7 A-181G polymorphism are associated with the risk of preeclampsia： influence on total antioxidant capacity and blood pressure [J]. J Obstet Gynaecol，2018，38（3）：327-332.

[21] ?黃麗瓊，鄭波，鎮(zhèn)艷芬，等.Gadd45α mRNA和蛋白在子癇前期胎盤組織中表達及轉(zhuǎn)染siRNA對滋養(yǎng)細胞侵襲能力及侵襲相關(guān)分子的影響[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2019，18（16）：1736-1739.

[22] ?Orlovic M，Tomic V，Vukojevic K，et al. Decreased expression of MMP-9 in CD8+ cells in placenta with severe preeclampsia [J]. Biotech Histochem，2017，92（4）：288-296.

[23] ?Rahimi Z，Zangeneh M，Rezaeyan A，et al. MMP-8 C-799T and MMP-8 C+17G polymorphisms in mild and severe preeclampsia： Association between MMP-8 C-799T with susceptibility to severe preeclampsia [J]. Clin Exp Hypertens，2018，40（2）：175-178.

（收稿日期：2019-09-29 ?本文編輯：劉明玉）