高麗婷

摘 要：本文通過改變流動相的組成，對不同流動相的分離效果進(jìn)行比較，考察了三聚氰胺保留時間及信噪比的變化，洗脫劑采用乙腈和含0.1%甲酸的乙酸銨溶液，可實現(xiàn)較好的分離效果。

關(guān)鍵詞：三聚氰胺；流動相；動物源食品

三聚氰胺是一種含氮的雜環(huán)有機(jī)化合物，白色無味粉末，呈弱堿性，溶于熱水，極微溶于熱乙醇，長期攝入會造成生殖、泌尿系統(tǒng)損害，并可進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌和輸尿管腫瘤。但由于其含氮量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氨基酸，也被不少非法企業(yè)用作食品添加劑摻入蛋白飼料，如用在魚粉、大豆蛋白粉、肉松粉、玉米蛋白粉及餅粕原料等中來提高飼料中的表觀蛋白質(zhì)含量，以保證產(chǎn)品安全。畜禽在養(yǎng)殖過程中大多數(shù)要攝入飼料，這就增加了三聚氰胺殘留風(fēng)險。

近年來，使用液質(zhì)法檢測三聚氰胺的含量較為普遍，但是流動相系統(tǒng)卻不一致。本文對不同流動相組成進(jìn)行比較，乙腈較甲醇洗脫效果好；流動相中加入0.1%甲酸，有利于化合物離子化，并獲得較好的分離效果和較高的靈敏度，最終選擇乙腈-0.1%甲酸5 mmoL/L乙酸銨水溶液作為流動相。

1？材料與方法

1.1？儀器與試劑

串聯(lián)質(zhì)譜MS/MS API4000，電噴霧串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀（美國AB），島津LC-30高效液相色譜儀（日本島津），三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（德國Dr.Ehrenstorfer），甲醇、乙腈為色譜純；去離子水，其他試劑均為分析純。

1.2？儀器工作條件

色譜柱：UPLC BEH，2.1 mm×100 mm，1.7μm（Waters），流速：0.4 mL/min，柱溫：38 ℃，進(jìn)樣量：4 μL，信號采集時間：4 min，電噴霧離子源，正離子掃描模式。

1.3？試驗方法

本文采用GB 29704-2013[1]中對三聚氰胺的測定方法，流動相分別過0.22 μm濾膜，采用甲醇+0.5 mmol/L乙酸銨，甲醇+0.5 mmol/L乙酸銨（加 0.1%甲酸）和乙腈+0.5 mmol/L乙酸銨（加0.1%甲酸）3種流動相，三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣量為4 μL，比較目標(biāo)物的保留時間和信噪比變化。

2？結(jié)果與討論

流動相對峰形、靈敏度及分離度都有較大的影響。本實驗分別以乙腈和甲醇作為強(qiáng)洗脫溶劑，0.5 mmol/L乙酸銨溶液和0.1%甲酸作為輔助洗脫溶劑進(jìn)行實驗，對質(zhì)量濃度為0.200 ng/mL的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，得到不同流動相下的出峰保留時間以及信噪比，結(jié)果見表1，MRM離子流圖見圖1。

在流動相中加入甲酸可以提高檢測靈敏度，增加峰面積，因為甲酸提供了H+，提高了離子化效率，同時可以抑制其他離子的生成。選擇乙腈和含0.1%甲酸的乙酸銨溶液作為流動相時，目標(biāo)化合物的響應(yīng)值比用甲醇和含0.1%甲酸的乙酸銨溶液為流動相時低，可能是因為甲醇降低了目標(biāo)化合物的離子化效率，其響應(yīng)值亦隨之降低，對雜質(zhì)的分離效果差，保留時間延長，容易形成假陽性[2]。

選擇乙腈和含0.1%甲酸的乙酸銨溶液作為流動相不僅保證了目標(biāo)峰不受雜質(zhì)峰的干擾，而且出峰較快、節(jié)約分析時間。因此本實驗選擇乙腈和含0.1%甲酸的乙酸銨溶液做緩沖溶液。

3？結(jié)論

本文采用GB 29704-2013中三聚氰胺的樣品前處理方法，探究了甲醇+0.5 mmol/L乙酸銨，甲醇+0.5 mmol/L乙酸銨（加0.1%甲酸）和乙腈+0.5 mmol/L乙酸銨（加0.1%甲酸）3種流動相對三聚氰胺保留時間及信噪比的影響，選定了最佳的流動相為乙腈+0.5 mmol/L乙酸銨（加0.1%甲酸）。檢測時間在4 min之內(nèi)，保留時間為1.92 min，信噪比為395.1。該方法對檢測動物源食品中三聚氰胺殘留量具有實際應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).GB 29704-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中環(huán)丙氨嗪及代謝物三聚氰胺多殘留的測定 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

[2]胡梅，王駿，張卉，等.超高效液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜測定禽蛋制品中三聚氰胺[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（1）：59-62.