李 彬 ，張 攀 ， 張遨然 ， 何開蓉 ， 喬煦瑋 ，徐 剛， 董成語， 李 巍， 富相奎， 孫 群， 朱正鵬*

（1．四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川成都 610064；2．新希望六和股份有限公司，北京 100102；3.成都楓瀾科技有限公司，四川成都 611731；4.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150086）

金霉素（CTC）屬于四環(huán)素類廣譜抗生素，對多種病原菌有較強(qiáng)的抑制作用，常用于動物疾病的預(yù)防治療。飼用金霉素是公認(rèn)的有效飼料添加劑，可促進(jìn)仔豬生長，改善仔豬飼料利用率 （陳旭東，2005），提高仔豬出生重，斷奶成活率等（Soma，1975；Sewell，1958），并對呼吸道與腸道疾病原菌有一定的抑制效果（盧建軍，2006；陳亮，1992）。 不同的金霉素預(yù)混劑因生產(chǎn)工藝的差異，選擇載體、穩(wěn)定劑等的類型和顆粒大小與硬度的不同，造成不同金霉素產(chǎn)品釋放速度和程度差異較大，因此不同金霉素預(yù)混劑在生物體內(nèi)的利用度不同，在動物生產(chǎn)中產(chǎn)生的效用也不同（伍濤，2018；曾東平，2012）。金霉素在動物體內(nèi)代謝迅速，評價(jià)金霉素預(yù)混劑質(zhì)量與其在生物體內(nèi)代謝速度與穩(wěn)態(tài)分布有關(guān)，豬通過腸道吸收金霉素，再通過血液達(dá)到需要的部位，保持一定的血藥濃度有利于動物的治療。本研究通過比較不同金霉素預(yù)混劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響及在動物體內(nèi)代謝速度，旨在考察不同金霉素預(yù)混劑對斷奶仔豬的保護(hù)性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 采用單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選擇 450 頭 21 日齡杜×長×大[（6.51±0.11）kg]斷奶仔豬，根據(jù)性別和體重相近的原則，隨機(jī)分為3個試驗(yàn)組，每個試驗(yàn)組6個重復(fù)，每重復(fù)25頭仔豬。試驗(yàn)組1飼喂基礎(chǔ)日糧+10%金霉素預(yù)混劑，試驗(yàn)組2飼喂基礎(chǔ)日糧+25%金霉素預(yù)混劑，試驗(yàn)組3飼喂基礎(chǔ)日糧+10%微囊金霉素預(yù)混劑，三處理組日糧中金霉素添加量均為75 mg/kg。試驗(yàn)用金霉素預(yù)混劑均購自金河生物科技股份有限公司。試驗(yàn)預(yù)飼3 d，正式試驗(yàn)期14 d，試驗(yàn)期間自由采食與飲水。

1.2 試驗(yàn)日糧 基礎(chǔ)飼料營養(yǎng)水平參照NRC（2012）推薦的斷奶仔豬營養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 指標(biāo)測定及方法

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3.1 斷奶仔豬生長性能 試驗(yàn)期間，記錄各組仔豬每日的采食量，并在試驗(yàn)的第0、14天飼喂前對仔豬進(jìn)行空腹稱重，測定生長性能指標(biāo)。

平均日增重/（g/d）=（試驗(yàn)?zāi)┢骄w重-試驗(yàn)初平均體重）/試驗(yàn)天數(shù)；

平均日采食量/（g/d）=試驗(yàn)期總耗料量/試驗(yàn)天數(shù)；

料肉比=平均日采食量/日增重。

1.3.2 斷奶仔豬腹瀉率 試驗(yàn)期內(nèi)，每天統(tǒng)計(jì)仔豬的腹瀉頭數(shù)，按照下列公式計(jì)算各處理組的腹瀉率。

腹瀉率/%=試驗(yàn)期間各重復(fù)仔豬累計(jì)腹瀉頭數(shù)/（各重復(fù)總頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100。

1.3.3 仔豬血漿中金霉素含量的測定 正式試驗(yàn)的第1天，隨機(jī)從每個重復(fù)中選取2頭母豬，共計(jì)36 頭， 在 6:00 飼喂后的第 1、2、4、6、8、10、16、24小時通過前腔靜脈采取血液5 mL，放置于抗凝血肝素鈉管中，靜置10 min后3000 r/min離心5 min，分離血漿，于-20℃冰箱保存至檢測。按照國家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T21317-2007》所規(guī)定的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測血漿中金霉素的濃度，具體操作為：血漿樣品進(jìn)行解凍搖勻后，吸取0.4 mL樣品加入2 mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine緩沖液溶解，漩渦30 s，混勻，靜置5 min。然后以12000 r/min離心5 min，吸取全部上清液凈化。將上述上清液以1滴/s的速度過HLB固相萃取小柱，依次用3 mL水和3 mL 5%甲醇水溶液淋洗，棄去全部流液，用3 mL甲醇+乙酸乙酯（1+9）洗脫，收集洗脫液于40℃氮?dú)獯蹈桑?.0 mL流動相溶解殘留物，漩渦混勻，轉(zhuǎn)入棕色進(jìn)樣瓶中，自動進(jìn)樣進(jìn)行HPLC-MS/MS檢測。液相色譜工作條件：流動相：V（乙腈）∶V（水）=30:70；柱溫：35 ℃；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：30 μL。 質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），其他質(zhì)譜條件如表2所示，以金霉素的色譜峰面積對相應(yīng)的藥物濃度進(jìn)行線性回歸。

表2 金霉素質(zhì)譜參數(shù)

1.4 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，運(yùn)用Duncan’s法進(jìn)行多重比較。以P＜0.05為差異顯著。所有數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同金霉素預(yù)混劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響 從表3可知，在試驗(yàn)結(jié)束14 d時，相較于10%和25%金霉素預(yù)混劑組，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬平均日增重提高了6.16%和1.24%，采食量增加了5.06%和1.15%，腹瀉率降低了0.84%和0.67%，但差異均未達(dá)到顯著水平（P＞0.05）。

表3 不同金霉素預(yù)混劑對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同金霉素預(yù)混劑對仔豬血漿藥物濃度變化的影響 由表4可知，10%金霉素預(yù)混劑組仔豬血藥濃度為45.21～56.99 ng/mL，25%金霉素預(yù)混劑組仔豬的血藥濃度為46.27～68.94 ng/mL，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬血藥濃度為57.02～95.14 ng/mL，三處理組在各時間段血藥濃度均表現(xiàn)為：10%微囊金霉素預(yù)混劑組＞25%金霉素預(yù)混劑組＞10%金霉素預(yù)混劑組，且在10:00時，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬血藥濃度顯著高于10%與25%金霉素預(yù)混劑組（P ＜ 0.05），在 12:00、14:00與22:00三個時間點(diǎn)，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬血藥濃度均顯著高于10%金霉素預(yù)混劑組 （P＜0.05）。根據(jù)各處理組仔豬血漿中金霉素含量，繪制出血藥濃度-時間曲線（圖1），從曲線上可看出各金霉素預(yù)混劑的血藥濃度在飼喂后6 h達(dá)到最高值，各處理組仔豬血藥濃度最大分別為 （56.99±5.68）、（68.94±9.69）ng/mL 和 （95.14±11.47）ng/mL。24 h內(nèi)，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬血藥濃度的最低值（57.02±6.35）ng/mL也高于10%金霉素預(yù)混劑組最大血藥濃度（56.99±5.68）ng/mL。

表4 不同金霉素預(yù)混劑對仔豬血藥濃度變化的影響ng/mL

3 討論

3.1 不同金霉素預(yù)混劑對仔豬生產(chǎn)性能的影響金霉素作為公認(rèn)的有效飼料添加劑，口服吸收良好，但隨著應(yīng)用的廣泛，抗生素濫用的問題日益突出，因此我國《藥物飼料添加劑使用規(guī)范》要求仔豬金霉素的添加量為25～75 mg/kg。綜合前人的研究，飼料中添加25 mg/kg金霉素飼喂仔豬，生產(chǎn)性能無顯著差異（劉家國，2005），而添加量為75 mg/kg（陳旭東，2005）、75 mg/kg 和 150 mg/kg（盧建軍，2006）、120 mg/kg 時（王彩玲，2004），仔豬的生產(chǎn)性能均得到了提升，這表明金霉素添加量在日糧中達(dá)到75 mg/kg時，已經(jīng)對仔豬生產(chǎn)性能起到了改善作用，這些效用的發(fā)揮可能是有效劑量金霉素通過改善仔豬腸道黏膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高仔豬采食量，降低腹瀉率（盧建軍，2006），提高干物質(zhì)消化率（黃俊文，2002），改善仔豬健康狀況來實(shí)現(xiàn)。在合理范圍內(nèi)金霉素的添加量越高對仔豬的效果也越好，因此在添加量范圍內(nèi)選擇具有更高效用的金霉素預(yù)混劑產(chǎn)品對于養(yǎng)豬生產(chǎn)具有重要的意義。本試驗(yàn)中選用了不同含量（10%與25%）且不同生產(chǎn)工藝（包被與非包被）的金霉素預(yù)混劑產(chǎn)品，所添加的金霉素含量均為75 mg/kg，試驗(yàn)結(jié)果表明，盡管試驗(yàn)期較短（14 d），但10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬平均日增重相較于10%和25%金霉素預(yù)混劑組提高了6.16%和1.24%，同時采食量增加了5.06%和1.15%。對比不同含量金霉素預(yù)混劑（10%與25%），含量高的金霉素預(yù)混劑（25%）在仔豬上的應(yīng)用效果優(yōu)于含量低的產(chǎn)品（10%），同時微囊金霉素預(yù)混劑（10%）在仔豬上的應(yīng)用效果優(yōu)于普通的金霉素預(yù)混劑產(chǎn)品（10%與25%）。

3.2 不同金霉素預(yù)混劑對仔豬血藥濃度的影響多數(shù)抗生素進(jìn)入血液后，逐步向機(jī)體各組織、器官和體內(nèi)分布，這過程與藥物在血液中的濃度密切相關(guān)，只有藥物吸收進(jìn)入生物體內(nèi)部循環(huán)達(dá)到一定濃度時才能發(fā)揮效用。本試驗(yàn)中，口服相同劑量（75 mg/kg）金霉素的條件下，三種金霉素預(yù)混劑組仔豬的血藥濃度上升速度基本相同，在12:00左右（飼喂后6 h）達(dá)到最高值，這與曾東平等（2012）的研究結(jié)果相似，其原藥組血藥濃度上升最快，在3～4 h達(dá)到最高峰濃度，而本試驗(yàn)的三種金霉素預(yù)混劑則在給藥后6～8 h達(dá)到峰濃度。通過測定24 h內(nèi)仔豬血藥濃度的變化發(fā)現(xiàn)，三個處理組在各時間段內(nèi)血藥濃度均表現(xiàn)為：10%微囊金霉素預(yù)混劑組＞25%金霉素預(yù)混劑組＞10%金霉素預(yù)混劑，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬血藥濃度在24 h內(nèi)均高于10%金霉素預(yù)混劑組最高血藥濃度。同時三試驗(yàn)組仔豬最大血藥濃度分別為 （56.99±5.68）、（68.94±9.69）ng/mL和（95.14±11.47）ng/mL，10%微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬最大血藥濃度顯著高于10%金霉素預(yù)混劑組，表明相較于普通金霉素，微囊金霉素更易被仔豬吸收進(jìn)入血液達(dá)到更高的血藥濃度，并且在24 h內(nèi)保持更高的血藥濃度。藥物進(jìn)入體內(nèi)能達(dá)到的最大藥物濃度，是臨床最重要的指標(biāo)，達(dá)到有效濃度藥物才會具有療效，雖然有研究表明臨床上金霉素對病原菌產(chǎn)生抑菌活性需要金霉素的血藥濃度大于500 ng/mL（曾東平，2012），本試驗(yàn)中三個處理組仔豬血藥濃度均低于500 ng/mL，有研究表明相較于靜脈注射給藥，通過飼喂獲得金霉素的仔豬，血藥濃度出現(xiàn)一定的降低（Nielsen，1996）。市場上最常見的15%金霉素預(yù)混劑，在飼料中添加量為75 mg/kg時，動物血液中金霉素的濃度為20～100 ng/mL（王冉，2010），本試驗(yàn)的血藥濃度在其范圍內(nèi)。綜上，飼喂相同添加量的金霉素，微囊金霉素能夠顯著增加仔豬血液中金霉素的濃度，提高對仔豬的保護(hù)性，因此微囊金霉素預(yù)混劑組仔豬腹瀉率有一定程度的下降，生產(chǎn)性能得到一定程度的提升。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，在日糧中添加相同量的金霉素（75 mg/kg），相較于10%和25%金霉素預(yù)混劑，10%微囊金霉素預(yù)混劑能夠顯著提高仔豬血漿中金霉素濃度，增加對仔豬的保護(hù)性，能一定程度提高仔豬的生產(chǎn)性能。