劉 輝，劉志蘭

（1.漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462000；2.青海省婦女兒童醫(yī)院，青海 西寧 810007）

近幾年，在結(jié)直腸癌以及肺癌等腫瘤疾病中抗血管生成療法取得顯著的療效。形成新生血管時(shí)VEGFR-2發(fā)揮著重要的作用，同時(shí)亦是許多抗血管生成藥物[1]。用CTA承載樹突狀細(xì)胞以此來(lái)組成腫瘤疫苗為一種比較常見的抗腫瘤免疫治療措施，此次研究采用的便是CTA中的一員—XAGE-1b蛋白，其負(fù)載樹突狀細(xì)胞在體外組建肺癌疫苗[2]。為了評(píng)價(jià)非小細(xì)胞肺癌VEGFR-2與XAGE-1b基因表達(dá)關(guān)系，我院對(duì)其開展了深入的探究，現(xiàn)詳細(xì)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

使用已經(jīng)檢測(cè)XAGE-1b基因表達(dá)水平的20例非小細(xì)胞癌患者的mRNA/cDNA標(biāo)本，進(jìn)行mRNA的提取、鑒定質(zhì)量以及將mRNA通過逆轉(zhuǎn)錄使其生成cDNA。

1.2 探針與引物

以GenBank (Accession No.:NM_ 002253.1)之中VEGFR-2的序列為參考設(shè)計(jì)探針與引物，其內(nèi)參為β-actin。

為了構(gòu)建實(shí)時(shí)的PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用特異性引物通過逆轉(zhuǎn)錄PCR將β-actin與VEGFR-2擴(kuò)增，鑒定測(cè)序，利用A260將標(biāo)準(zhǔn)品DNA進(jìn)行定量，使用超純水來(lái)使其連續(xù)稀釋以致范圍在每微升107～101拷貝，取出1 uL將其當(dāng)作樣本檢測(cè)的一個(gè)定量標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 實(shí)時(shí)PCR定量

20 uL的反應(yīng)體系之中檢測(cè)β-actin與VEGFR-2的含量，首先進(jìn)行PCR反應(yīng)。實(shí)施PCR反應(yīng)的條件主要包括：2分鐘50℃，10分鐘95℃，隨后進(jìn)行15秒95℃以及1分鐘60℃ ，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。所有的樣本均需進(jìn)行重復(fù)兩次測(cè)定，定量檢測(cè)的結(jié)果為其均值。

若患者XAGE-1b為陽(yáng)性其VEGFR-2的表達(dá)量也偏高。在α為0.05時(shí)，把VEGFR-2的表達(dá)量與患者的臨床特征一起代入多元logistic的回歸分析之中，結(jié)果表明，VEGFR-2的表達(dá)量 (其比值比為14.812 , 95%可信區(qū)間為1.281～172.150,P為0.032)與病理類型(其比值比為0.071, 95%可信區(qū)間0.006～0.779,P為0.032)為影響XAGE-1b表達(dá)的因素。

2 討 論

為了研究在非小細(xì)胞癌治療之中免疫治療聯(lián)合抗血管生成療法的可行性，本次研究中檢測(cè)同時(shí)分析了在免疫治療中其靶點(diǎn)XAGE-1b和抗血管生成治療中其靶點(diǎn)VEGFR-2表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，結(jié)果表面，XAGE-1b和VEGFR-2的表達(dá)量呈現(xiàn)正相關(guān)，即XAGE-1b表達(dá)陽(yáng)性的患者其VEGFR-2的表達(dá)量偏高，同時(shí)多元logistic回歸分析表明，VEGFR-2的表達(dá)量影響XAGE-1b的表達(dá)。研究結(jié)果表明，抗血管生成療法和免疫療法相結(jié)合的治療措施適宜的患者可能為VEGFR-2的表達(dá)量高且體內(nèi)含有XAGE-1b基因。

1 80 男 非吸煙腺癌 中 ⅢA ＋ 4.72 2 65 男 吸煙 腺癌 中 ⅠB ＋ 4.83 3 58 男 吸煙 腺癌 中 ⅢA ＋ 5.01 4 62 男 吸煙 腺癌 中 ⅣA ＋ 4.68 5 59 男 吸煙 腺癌 中 ⅡA ＋ 5.23 6 61 男 吸煙 腺癌 中 ⅢB ＋ 4.71 7 63 男 吸煙 腺癌 中 ⅡB ＋ 5.17 8 75 男 非吸煙 腺癌 高 ⅡA ＋ 4.97 9 71 男 非吸煙腺癌 高 ⅢA ＋ 4.39 10 78 女 非吸煙 腺癌 高 ⅣB ＋ 4.26 11 53 女 非吸煙 鱗癌 低 ⅢB ＋ 4.59 12 65 女 非吸煙 鱗癌 低 ⅢB — 3.65 13 59 女 吸煙 鱗癌 中 ⅠB — 3.86 14 47 女 吸煙 鱗癌 中 ⅢA — 4.11 15 35 男 吸煙 鱗癌 中 ⅢB — 3.92 16 73 男 吸煙 鱗癌 中 ⅡA — 3.68 17 69 男 吸煙 腺鱗癌 高 ⅡB — 3.21 18 64 男 非吸煙 鱗癌 中 ⅢB — 3.46 19 59 女 非吸煙 鱗癌 高 ⅠB — 3.12 20 72 男 非吸煙 鱗癌 低 ⅢA — 3.51